張丹霞，賴東梅，江美芳，謝崢偉，黃華軾

(深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院 藥劑科，廣東 深圳 518101)

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馬齒莧總黃酮微乳的制備及經(jīng)皮滲透研究

張丹霞，賴東梅，江美芳，謝崢偉，黃華軾

(深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院 藥劑科，廣東 深圳 518101)

目的：以馬齒莧總黃酮為模型藥物，制備治療濕疹的經(jīng)皮給藥中藥有效組分微乳。方法：通過(guò)單因素試驗(yàn)及偽三元相圖的繪制篩選微乳組分，并以藥物體外經(jīng)皮滲透速率進(jìn)一步優(yōu)化微乳處方。結(jié)果：優(yōu)選處方為肉豆蔻酸異丙酯-Cremophor EL -丙三醇-水 (6.5∶29.25∶29.25∶35)，平均粒徑為24.54nm；馬齒莧總黃酮穩(wěn)態(tài)透皮速率為114.70μg·cm-2·h-1，比原濕疹搽劑的透皮速率提高了17倍。結(jié)論：馬齒莧總黃酮微乳性狀均一，澄清透明，質(zhì)量穩(wěn)定，透皮性能好。

馬齒莧總黃酮；有效組分微乳；偽三元相圖；體外經(jīng)皮滲透

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧(PortulacaoleraceaL.)的干燥地上部分，具有清熱解毒、涼血止血之功效，其水提取物作為外用搽劑在臨床上常用于濕疹的治療，療效顯著、副作用小、安全性好?，F(xiàn)代研究表明[1-3]，馬齒莧治療濕疹的物質(zhì)基礎(chǔ)在于其富含的黃酮類物質(zhì)(含量達(dá)6%～8%)。為提高馬齒莧水提液的藥效作用、生物利用度及外用藥的舒適美觀性，將原水洗搽劑進(jìn)行改進(jìn)，制備成微乳制劑。

微乳是油相(O)、表面活性劑(S)、助表面活性劑(COS)、水相(W)組成的均一、透明、各項(xiàng)同性的熱力學(xué)穩(wěn)定載藥系統(tǒng)，粒徑分布范圍10～100nm，能同時(shí)增溶水溶性和脂溶性成分，提高藥物的穩(wěn)定性，增加藥物透皮速率，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，維持恒定的血液濃度[4-6]。

目前微乳制劑多將西藥或者中藥有效單體作為研究對(duì)象，而以中藥有效組分作為研究對(duì)象鮮有報(bào)道，本研究以馬齒莧總黃酮為模型藥物，制備中藥有效組分微乳，體現(xiàn)了處方中藥多成分、多途徑、多靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)，增強(qiáng)了藥物經(jīng)皮滲透吸收作用。本研究為中藥有效組分微乳的制備提供了一種探索模式。

1 儀器與材料

1.1 受試藥材

馬齒莧藥材飲片，批號(hào)130912，購(gòu)自四川新荷花中藥飲片公司。

1.2 儀器和試劑

UV-1700紫外分光光度計(jì)(上海躍進(jìn))，Nano ZS90激光粒度儀(英國(guó)馬爾文)，Sartorius BP121s電子天平(北京賽多利斯)，VAP G3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)Heidolph)，DDS-307A電導(dǎo)率儀(上海雷磁)，TK-12B 型透皮擴(kuò)散儀(上海凱鍇)；蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)10080-201305)，中鏈三甘油酯(MCT，廣州紀(jì)雅)、油酸乙酯(EO，廣州紀(jì)雅)、肉豆蔻酸異丙酯(IPM，阿拉丁)、十六烷酸異丙酯(IPP，廣州紀(jì)雅)、Cremephor EL(EL，BASF)，Cremephor RH40(RH40，BASF)；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 有效部位制備

馬齒莧有效部位——馬齒莧總黃酮制備：稱取處方量藥材提取3次，每次加8倍量水，回流提取60min，濾過(guò)，合并濾液，加95%乙醇靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇至濾液蒸干，真空干燥(60℃)，干膏打粉，即得。

2.2 馬齒莧總黃酮含量測(cè)定

2.2.1 馬齒莧總黃酮鑒定 取馬齒莧水提液200mL 減壓濃縮至小體積，95%乙醇沉降除去水溶性雜質(zhì)，濾過(guò)，濾液濃縮至干，加60%乙醇轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中。取1mL于試管中，加鎂粉適量，再注入濃鹽酸數(shù)滴(1次加入)，在泡沫處呈桃紅色。另取適量溶液點(diǎn)于硅膠G薄層板上，噴灑1%AlCl3·EtOH 溶液，干燥后，黃色斑點(diǎn)在UV(254，365nm)燈下顯黃色熒光，表明含黃酮。

2.2.2 馬齒莧總黃酮含量測(cè)定[7](1)對(duì)照品溶液制備: 取蘆丁對(duì)照品50mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加70%甲醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，即得。

(2)供試品溶液制備: 取馬齒莧水提液100mL減壓濃縮至小體積，95%乙醇沉降除去水溶性雜質(zhì)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇至濾液至干，加60%乙醇200mL，超聲提取30min，過(guò)濾，取續(xù)濾液置250mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，即得。

(3)含量測(cè)定: 精密吸取各溶液0.2mL置10mL量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.4mL，搖勻，放置6min，加10% 硝酸鋁溶液0.4mL，搖勻，放置6min，再加4.3%氫氧化鈉試液4mL，搖勻，加純化水至刻度，搖勻，放置15min。照紫外可見(jiàn)分光光度法(2010版《中國(guó)藥典》附錄ⅤA)測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 10.191X-0.040 1，r=0.999 9 ，蘆丁在0.020～0.120mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。平行測(cè)定3個(gè)樣品，測(cè)得馬齒莧總黃酮平均含量為0.063g/g生藥材。

2.3 微乳處方的篩選

2.3.1 油相選擇 選取具有較好生物相容性的6種油相，分別為中鏈三甘油酯(MCT)、油酸乙酯(EO)、肉豆蔻酸異丙酯(IPM)、十六烷酸異丙酯(IPP)、橄欖油(LCT)、精制花生油(PO)。采用指標(biāo)成分溶解量法，分別測(cè)定馬齒莧總黃酮在6種油相中的表觀溶解度。取過(guò)量馬齒莧總黃酮純化物置具塞試管中，分別加入等體積的各油相，超聲至不再溶解，放入振蕩器中，(25±1)℃，100r·min-1振搖 24h，所得飽和溶液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，測(cè)定各樣品中指標(biāo)成分含量，結(jié)果見(jiàn)圖1。

由圖1可知，馬齒莧總黃酮在IPM中的溶解度最大，且IPM的黏度較其它油相低，因而確定微乳的油相為IPM。

2.3.2 助表活性劑選擇 采用指標(biāo)成分溶解量法，分別測(cè)定馬齒莧總黃酮在乙醇、異丙醇、PEG200、PEG400、丙二醇、丙三醇等6種助表面活性劑中的溶解度，測(cè)定方法同“2.3.1”項(xiàng)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1 馬齒莧總黃酮在各油相中的表觀溶解度

圖2 馬齒莧總黃酮在各助表面活性劑中的表觀溶解度

圖3 最小加入表面活性劑量MSmin

由圖2可知，馬齒莧總黃酮在丙三醇中的溶解度最大，其次是PEG200、乙醇，而在異丙醇中的溶解度最小。且在相同比例IPM-CremephorRH40的體系中，加入少量丙三醇即可形成微乳，因而確定助表面活性劑為丙三醇。

2.3.3 表面活性劑選擇 測(cè)定形成微乳時(shí)表面活性劑最小加入量(MSmin):選擇IPM為油相，丙三醇為助表面活性劑，固定二者比例為1∶2，在該體系中，逐滴加入各表面活性劑(Tween80，Tween60，Tween20，CremephorEL、RH40)，每次加入混勻后，取一滴滴入10mL水中，觀察油—水混合狀況，并測(cè)定粒徑，記錄微乳形成時(shí)表面活性劑的最小加入量，并計(jì)算其在油-表面活性劑-助表面活性劑混合體系中所占百分比，結(jié)果見(jiàn)圖3。

由圖3可知，以MSmin為評(píng)價(jià)指標(biāo)，Cremophor系列小于吐溫系列，且EL略小于RH40，說(shuō)明其乳化能力最強(qiáng)，吐溫系列中，tween80MSmin小于其它兩項(xiàng)，吐溫20的MSmin最大，預(yù)示其需要加入較多的表面活性劑才可形成微乳。且由于表面活性劑對(duì)皮膚有一定刺激性，減少表面活性劑用量有利提高藥品的安全性[8]。因此確定微乳表面活性劑為CremephorEL。

2.3.4 偽三元相圖繪制 對(duì)已確定的微乳各相成分，通過(guò)繪制偽三元相圖進(jìn)一步確定體系中微乳形成的區(qū)域。按質(zhì)量比，配制好S/COS為1∶2、1∶1、2∶1的混合表面活性劑(Smin)，將油相與混合表面活性劑按0.5∶9.5，1∶9，2∶8，3∶7至9∶1比例混合，室溫下，逐滴加水，漩渦混勻，用電導(dǎo)率法觀測(cè)微乳液的相變情況，同時(shí)采用目測(cè)法，記錄體系由澄清變?yōu)闇啙峄蛴蓽啙嶙優(yōu)槌吻宓呐R界點(diǎn)各相比例，用originpro8.5軟件繪制偽三元相圖，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 偽三元相圖

由圖4可知，S/COS由0.5增大到1.0微乳區(qū)域增大，這主要是因?yàn)楸砻婊钚詣┑谋壤龃?，乳化能力增?qiáng)，形成微乳區(qū)域增大。而S/COS值由1.0增大到2.0，微乳區(qū)域略有減小，這可能由于表面活性劑的增加到一定值后，體系黏稠度增加，凝膠區(qū)域擴(kuò)大，縮小了微乳形成的區(qū)域。且隨著S/COS的增大，微乳形成的澄清點(diǎn)呈上移趨勢(shì)。

表1 不同微乳處方

表2 不同處方微乳體外經(jīng)皮滲透動(dòng)力學(xué)參數(shù)

2.3.5 體外經(jīng)皮滲透試驗(yàn) 根據(jù)微乳的穩(wěn)定性及載藥量的要求，選取偽三元相圖中心偏左下區(qū)域，篩選不同S/COS、不同含水量及不同含油量的微乳，微乳處方見(jiàn)表1，依照表1，分別稱取等量有效部位藥物加入到油相、表面活性劑、助表面活性劑的混合體系中，超聲溶解充分分散均勻后，滴加水相，制備得相同載藥量的各處方微乳，外觀均呈現(xiàn)均一、澄清、透明、褐紅色，12 000rpm高速離心20min，未出現(xiàn)分層，所制備的各微乳穩(wěn)定性良好。

取各處方微乳3mL進(jìn)行體外透皮試驗(yàn)，采用Franz擴(kuò)散池，滲透膜為小鼠腹部脫毛全皮，有效擴(kuò)散面積2.80cm2，接收介質(zhì)為生理鹽水，接收池體積為18mL，于32℃、200rpm試驗(yàn)，各處方體外經(jīng)皮滲透動(dòng)力學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2，單位面積累積滲透量動(dòng)力學(xué)曲線見(jiàn)圖5，通過(guò)比較體外經(jīng)皮滲透動(dòng)力學(xué)參數(shù)(穩(wěn)態(tài)透皮速率Js;單位面積累積滲透量Qn)，確定最佳微乳處方。

圖5 單位面積累積滲透量動(dòng)力學(xué)曲線

由表3和圖5可知，對(duì)于相同O/W(6/40)、不同S/COS(1/2；1/1；2/1)的微乳M1，M2，M3，隨著S/COS的增加，微乳藥物體外透皮Js、Qn呈減小趨勢(shì)，這可能是隨著S/COS的增大，表面活性劑比例增加，體系黏稠度增加，影響皮膚的水化作用，從而影響透皮速率；對(duì)于S/COS=1，相同O/Smin，不同含水量的微乳處方M4，M2，M5，含水量由35%增大到45%，微乳藥物體外透皮Js、Qn呈減小趨勢(shì)，這可能是由于水分的增加，使得具有促滲透作用的油相IPM、助表面活性劑丙三醇含量降低，從而透皮速率減??；對(duì)于S/COS=1，具有相同含水量(35%)，不同O/Smin的微乳M6，M4，M7，隨著油相IPM由6%增大到7%，微乳藥物體外透皮Js、Qn呈增大趨勢(shì)，這主要是IPM具有促滲透作用，其含量增加，透皮速率增加。綜合考慮到微乳的穩(wěn)定性及透皮速率，因而確定微乳最佳處方為M4，即IPM 6.5%、Cremephor EL 29.25%、丙三醇29.25%、水35% 。

2.4 微乳與原處方搽劑體外透皮吸收比較

按照處方M4制備載藥量為2.5%，其中馬齒莧總黃酮純化物為0.6%(相當(dāng)于馬齒莧生藥含量7.80 %)的載藥微乳A，同時(shí)按相同生藥含量制備原處方搽劑B。分別取A、B各3mL置于Franz 擴(kuò)散儀的供藥池，照“2.3.5”方法進(jìn)行體外透皮吸收試驗(yàn)，微乳A和搽劑B中極性藥代表成分馬齒莧總黃酮透皮速率分別為114.70、6.37μg·cm-2·h-1，透皮速率提高了約17倍，可見(jiàn)制成微乳后，藥物透皮性能得到很大提升。

圖6 微乳粒徑分布

2.5 微乳粒徑分布

粒徑及分布是微乳最重要的特征之一，微乳粒徑的大小和分布直接影響微乳制劑的質(zhì)量[9]。取按最佳處方M4

制備的微乳3mL，運(yùn)用馬爾文Nano ZS90激光粒度儀，在28℃條件下，測(cè)定微乳樣品，測(cè)得其平均為粒徑為24.54 nm，呈正態(tài)分布，見(jiàn)圖6，多分散系數(shù)PDI為0.189。

3 討論

在制備載藥微乳時(shí)，將藥物在混合油相、表面活性劑、助表面活性劑體系中分散均勻，而后滴加水相，較向空白微乳加藥物更易制成微乳，這可能是由于藥物在微乳微觀結(jié)構(gòu)的分布對(duì)微乳結(jié)構(gòu)的影響造成的差異。

本研究確定了在傳統(tǒng)中藥馬齒莧有效部位的基礎(chǔ)上，通過(guò)微乳這一新型載藥系統(tǒng)，對(duì)處方中有效部位多成分進(jìn)行增溶，將原搽劑制成了復(fù)方微乳，制備方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，微乳粒徑小(平均24.54 nm)且分布均勻，性質(zhì)穩(wěn)定，增強(qiáng)了藥物的透皮性能。其中藥效成分馬齒莧總黃酮透皮速率提高了約17倍，有利于提升原處方藥效作用。

本研究將傳統(tǒng)中藥搽劑制成微乳制劑，為中藥制劑現(xiàn)代化提供了一種探索思路，為中藥有效組分微乳的制備提供一種研究模式。

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Preparation and in Vitro Transdermal Delivery of Portulaca Total Flavone Microemulsion

Zhang Danxia ,Lai Dongmei ,Jiang Meifang ,Xie Zhengwei, Huang Huashi

(Pharmaceutical department,The people’s hospital of baoan ,Shenzhen 518101，China)

Objective:Taking portulaca total flavone(PTF) as model drug to prepare transdermal delivery combination microemulsion used for curing eczema. Methods:Choosing microemulsion formulation by using single factor methodology and drawing pseudo-ternary phase diagram. The prescription of microemulsion was further optimized with in vitro permeation of drug. Results:The optimized prescription of microemulsion was composed of isopropyl myristate-cremophor EL-glycerol-water(6.5∶29.25∶29.25∶35).The appearance of the prepared microemulsion was clear with the mean diameter of 24.54 nm. The speed of PTF in COPTIDIS RHIZOMA and paeonol in vitro permeation were 114.70μg·cm-2·h-1and 74.09μg·cm-2·h-1， which are 17 times more than former preparation liniment’s. Conclusion:The PTF microemulsion was homogeneous，clear，translucent，stable，and highly infiltrative.

Portulaca Total Flavone ; Effective Component Microemulsion ; Pseudo-ternary Phase Diagram ; In Vitro Transdermal Permeation

2014-07-13

張丹霞(1974-)，女，廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院主管藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)。

R284.2

A

1673-2197(2014)21-0017-04