鄭敬民，尹 廣，劉志紅

（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院全軍腎臟病研究所國家腎臟疾病臨床醫(yī)學研究中心，南京 210002）

膜性腎病是導致成人腎病綜合征的一個常見原因。在我國，膜性腎病約占原發(fā)性腎小球腎炎的10%[1]。在西方，膜性腎病的比例則高達30%[2]。但有關膜性腎病的病理機制仍不是很清楚。

近年來，有關肥大細胞在各種腎臟疾病發(fā)生發(fā)展中的可能作用引起了不少研究者的關注。包括膜性腎病在內(nèi)的各種主要腎臟病患者腎組織中，均存在肥大細胞增多的現(xiàn)象[3?9]。但目前對腎組織肥大細胞的確切病理意義仍不了解。從已有的文獻來看，針對特定腎臟疾病腎組織肥大細胞的研究仍然不多，病例數(shù)也很有限，尤其是在國內(nèi)，這方面的文獻更少（就我們查閱的文獻來看，尚未見國內(nèi)有相關報道）。就膜性腎病而言，國外文獻只籠統(tǒng)地報道了患者腎組織肥大細胞增多的現(xiàn)象，尚未見對不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞的分類比較分析。本文對包括Ⅰ～Ⅳ期在內(nèi)的不同病理類型膜性腎病患者腎組織中的肥大細胞及其與某些臨床病理指標的相關性進行了定量分析，以比較全面地了解我國患者（漢族人）腎組織肥大細胞的分布特點，探討肥大細胞在膜性腎病發(fā)生發(fā)展中的可能病理意義。

1 對象與方法

1.1 病例選擇及相關病理資料的獲取

從南京軍區(qū)南京總醫(yī)院全軍腎臟病研究所腎活檢組織標本庫中選取臨床和病理資料完整的特發(fā)性膜性腎病病例55例（Ⅰ～Ⅳ期分別為5例、26例、16例和8例）。所有病例的腎活檢組織均經(jīng)光鏡、免疫熒光和電鏡分析，符合有關特發(fā)性膜性腎病的診斷標準[10]。同時選取8例移植供腎組織標本作為正常對照，所選供腎組織病理分析均顯示無明顯病變。所有臨床相關資料（包括生化檢測結(jié)果等）從有關病歷資料庫中獲取。本文所有研究均遵守《赫爾辛基宣言》原則，并獲得本單位倫理委員會的批準。

1.2 腎組織肥大細胞檢測和定量計數(shù)方法

根據(jù)腎組織肥大細胞特異性高表達C3aR的特點[11,12]，以免疫組化的方法標記腎組織中的肥大細胞。光鏡下攝取皮質(zhì)區(qū)圖像，計錄每張切片腎組織皮質(zhì)區(qū)中的肥大細胞數(shù)；同時利用NIS Element BR軟件測量每張切片皮質(zhì)區(qū)的腎組織面積；得到每平方毫米腎組織（皮質(zhì)區(qū)）肥大細胞平均數(shù)（肥大細胞密度）。

1.3 免疫組化染色方法

腎活檢組織石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟和復水處理后，于高壓鍋中高壓進行抗原修復；以3%過氧化氫甲醇溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶；以10%胎牛血清封阻30min；經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）洗3次（5min/次）后，與兔抗人C3aR多克隆抗體（Santa Cruz公司）于4℃孵育過夜；再經(jīng)PBS洗滌3次（5min/次）后，加Envision試劑（Dako公司）室溫孵育45min；第三次PBS洗滌后進行二氨基聯(lián)苯胺顯色反應，然后以蘇木素復染1min，自然風干后封片觀察。

1.4 小管間質(zhì)相對體積測量方法

參照Okon等[13]介紹的方法，每張切片隨機選取皮質(zhì)區(qū)10個區(qū)域，利用NIS Element BR3.4軟件（Nikon，Japan）測量每個區(qū)域中的小管間質(zhì)面積和區(qū)域中不含小球的面積，計算出小管間質(zhì)面積所占的比例，以平均值代表每張切片的相對小管間質(zhì)體積。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計分析。由于數(shù)據(jù)的正態(tài)性不佳，采用Kruskal-Wallis檢驗進行組間比較，Mann-Whitney檢驗進行兩兩比較，同時采用Bonferroni法進行校正。相關性分析采用Pearson法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 肥大細胞在膜性腎病患者腎組織中的分布定位

免疫組化分析顯示（圖1），肥大細胞主要分布在膜性腎病患者腎組織的皮質(zhì)及皮髓交界區(qū)，與皮質(zhì)區(qū)相比，髓質(zhì)中肥大細胞的數(shù)量明顯要少得多。在皮質(zhì)區(qū)，肥大細胞主要以一種松散的方式分布于小管間質(zhì)中，常出現(xiàn)在小管間質(zhì)增寬的區(qū)域，分布于萎縮的小管和損傷小球的周圍。多數(shù)情況下，肥大細胞并不與小管間質(zhì)中其他炎癥細胞扎堆分布（圖1B-D），在有大量炎癥細胞浸潤的區(qū)域，肥大細胞的數(shù)量往往不多。雖然在絕大多數(shù)膜性腎病患者的腎小球中觀察不到肥大細胞，但在少數(shù)病例的一些小球（在我們所分析的55例中的5例），可見肥大細胞侵入腎小球的情況（圖1E-F），這與我們以前在糖尿病性腎病和IgA腎病等觀察到的情況有所不同（以前在腎小球中從未觀察到肥大細胞）[8,9]。在不同病理類型的膜性腎病腎組織中，沒有觀察到肥大細胞在分布方式上有明顯差異。

2.2 不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞數(shù)量統(tǒng)計分析結(jié)果

正常對照腎組織中極少發(fā)現(xiàn)肥大細胞。與正常對照組相比，各種病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞數(shù)量（密度）均有不同程度的增加。Ⅰ期膜性腎病患者腎組織肥大細胞的數(shù)量相對較少，而其他病理類型間的差異并不顯著（圖2）。

2.3 膜性腎病患者腎組織肥大細胞與臨床病理指標的相關性分析結(jié)果

基于雙變量Person模型相關分析顯示，膜性腎病患者腎組織肥大細胞數(shù)量（密度）與患者血肌酐水平（r＝0.464，P＜0.001）、血胱抑素C（cystatin C，Cys C，r＝0.464，P＜0.01）、尿視黃醇結(jié)合蛋白（retinol-binding protein，RBP，r＝0.322，P＝0.024）、尿N-乙?；?β-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-glucosaminidase，NAG，r＝0.453，P＜0.001）、尿α微球蛋白（r＝0.351，P＝0.013）、尿C3水平（r＝0.334，P＜0.018）、以及小管間質(zhì)相對體積具有顯著相關性（r＝0.636，P＜0.001），其中以與小管間質(zhì)相對體積的相關性最高。而與24h尿蛋白、尿溶菌酶水平，以及性別等沒有顯著相關性。

圖1 肥大細胞（黑色箭頭所示）在不同病理類型膜性腎病患者腎組織中的分布情況Figure1 The distribution of mast cells (indicated by black arrows) in the renal tissue of patients with membranous nephropathy(×200)

圖2 不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞數(shù)比較Figure2 Comparison of renal mast cell number in patients with different pathological types of membranous nephropathy

3 討論

本文首次對我國（漢族人）膜性腎病患者腎組織肥大細胞進行了觀察，并與國際上首次對不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞進行了比較分析。從我們的分析結(jié)果來看，在膜性腎病患者腎組織中，肥大細胞主要是以一種松散的方式分布于腎小管間質(zhì)，常出現(xiàn)在小管間質(zhì)增寬的區(qū)域，特別是萎縮的小管和損傷小球的周圍。這與肥大細胞在其他腎臟疾病中的分布相似[3?9]。但在本文，我們還在少數(shù)病例的一些腎小球中也觀察到了肥大細胞的存在，特別是在硬化小球中，有時可觀察到較多的肥大細胞浸潤。這是我們以前對其他疾病的分析中所從未見到的[8,9]。文獻上[3?7,14?16]。也未見有肥大細胞出現(xiàn)在腎小球中的報道。但這是否是膜性腎病特有的病理現(xiàn)象，以及產(chǎn)生這一病理現(xiàn)象的原因，仍有待于進一步的研究。基于膜性腎病的病理分類分析顯示，不同病理類型膜性腎病的腎組織肥大細胞在分布方式上并未觀察到明顯的差異。與已往研究一致[3?9]，在本文中，我們觀察到正常腎組織中極少有肥大細胞。與正常對照相比，膜性腎病患者腎組織肥大細胞的數(shù)量顯著增加。相對而言，Ⅰ期患者腎組織肥大細胞的數(shù)量較少，而其他組間的差異并不顯著。相關性分析顯示，膜性腎病患者腎組織肥大細胞與反映腎功能損傷程度的指標（血肌酐和Cys C）和小管間質(zhì)損傷指標（包括NAG、尿視黃醇結(jié)合蛋白和小管間質(zhì)相對體積）具有顯著相關性。這些結(jié)果提示：（1）肥大細胞參與了膜性腎病患者腎組織損傷過程；（2）肥大細胞主要與小管和小管間質(zhì)損傷有關，可能在膜性腎病慢性化病變中起重要作用；（3）在一些特定生理情況下，肥大細胞可能與膜性腎病患者腎小球的損傷有關。

需要特別指出的是，在本文的研究中，我們對不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞進行了分類分析，雖然總的病例數(shù)并不少，但涉及到每一病理類型的病例仍很有限，因此，對于不同病理類型中的情況，仍有待于進一步擴大每組病例數(shù)進行觀察，以便得出更加可靠的結(jié)論。

總之，本文的研究結(jié)果提示，肥大細胞很可能參與了膜性腎病腎組織損傷，特別是小管間質(zhì)損傷的過程。肥大細胞作為一種新的致病因素以及一個潛在的膜性腎病腎組織慢性病變防治新靶標，值得我們關注。

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