劉麗麗，李曉霞，陳 玥，石萍萍，瞿 璐，張 祎

（天津市中藥化學與分析重點實驗室,天津 300193）

槐米化學成分研究I*

劉麗麗，李曉霞，陳 玥，石萍萍，瞿 璐，張 祎

（天津市中藥化學與分析重點實驗室,天津 300193）

[目的]對國槐（Sophora japonica L.）米70%乙醇提取物的化學成分繼續(xù)研究，為開發(fā)利用該植物資源提供依據(jù)。[方法]采用正相硅膠、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色譜及高效液相色譜法等方法進行分離純化，并通過理化性質(zhì)及光譜分析鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。[結(jié)果]從國槐米體積分數(shù)為70%的乙醇提取物中分離鑒定了6個單體化合物，分別為icariside F2（1）、gallic acid 3－O－β－D－（6＇－O－galloyl）－glucopyranoside（2）、ethyl－α－L－rhamnopyranosyl（1→6）－β－D－glucoside（3）、Et－（6－O－p－h(huán)ydroxybenzoyl）－β－D－glucopyranoside（4）、胸腺嘧啶脫氧核苷（5）和左旋色氨酸（6）。[結(jié)論]化合物1～5為首次從槐屬植物中分離得到的化合物。

槐米；化學成分；結(jié)構(gòu)鑒定

槐米性微寒、味苦，具有涼血、止血，清肝瀉火等功效，臨床研究表明其對改善心肌循環(huán)、清熱解毒、降血脂、軟化血管、消炎補腎等有良好的防治作用，對人體無毒、無害、無致死、致癌、致畸、致突變作用[1-2]。本文采用大孔吸附樹脂[3]、正相硅膠、反相ODS柱層析、制備型高效液相的方法對槐米70%乙醇提取物化學成分繼續(xù)研究的過程中[4-5]，分離鑒定了6個單體類化合物，并利用與文獻[6-8]類似的方法進行了鑒定，分別為icariside F2（1）、gallic acid 3-O-β-D-(6′-O-galloyl)-glucopyranoside（2）、ethyl-α-L-rhamnopyranosyl（1→6）-β-D-glucoside（3）、Et－（6－O－p－h(huán)ydroxybenzoyl）－β－D－glucopyranoside（4）、胸腺嘧啶脫氧核苷（5）及左旋色氨酸（6）。其中，1～5為首次從槐屬植物中分離得到的化合物。

1 儀器與材料

Bruker500MR超導核磁共振波譜儀（德國Bruker公司，AvanceⅢ500 MR），安捷倫6500系列四級桿-飛行時間質(zhì)譜儀（美國Aglient公司，6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS）。柱層析硅膠（青島海洋化工廠，48～75 μm），薄層色譜硅膠預板（天津思利達科技有限公司），ODS（日本YMC有限公司，50μm），D101大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司，0.3～1.25 mm）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA公司，IKA RV 10）；分析型高效液相色譜儀（美國Aglient公司，Aglient1260）；制備型高效液相色譜儀（日本島津公司，LC-8A）。Cosmosil 5 C18-MS-II分析柱/制備柱（日本Nacalai Tesque Inc.，250 mm×4.6 mm/250 mm×20 mm，5 μm）。

實驗所用試劑（色譜純或分析純）均為天津康科德科技有限公司產(chǎn)品。

國槐米于2010年10月購自安國市場，由天津中醫(yī)藥大學中藥標本館李天祥副教授鑒定為國槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾。植物標本存放于天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究中心。

2 提取分離

取干燥的槐米8.0 kg，用5、3、3倍量體積分數(shù)70%的乙醇溶液加熱回流提取3次，每次分別為2、2、1.5 h，減壓回收溶劑，得到浸膏2.3 kg。取浸膏670 g，用EtOAc-H2O萃取，得到EtOAc、EtOAc層沉淀及H2O層萃取物分別為78、197、385 g。取H2O層萃取物（330.3 g）溶于6 L水中，經(jīng)D101大孔吸附樹脂色譜柱分離（H2O→95%EtOH→Acetone），得到H2O、95%EtOH及丙酮洗脫物分別為213.1、122.1、8.2 g。取上述EtOAc萃取物（50 g）經(jīng)硅膠柱層析[CHCl3-MeOH（100∶0→100∶2→100∶3→100∶5，V/ V）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1，V/V/V，下層）→MeOH]，共得7個組分（Fr.1～7）。Fraction 6（7.5 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOH-H2O（10∶90→45∶55→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]得到12個組分（Fr.6-1～12）。Fraction 6-2（139.8 mg）經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備[MeOH-H2O（12∶88，V/V）]，得到5（7.8mg）。Fraction6-3（1462.0mg）經(jīng)高效液相色譜制備[MeOH-H2O（45∶55，V/V）；230 nm]得到11個組分[Fr.6-3-1～11]。Fraction 6-3-5（58.8 mg）經(jīng)PHPLC分離制備[MeCN-H2O（20∶80，V/V）]，得到4（2.5 mg）。

取上述95%EtOH洗脫物（72 g）經(jīng)硅膠柱層析[CHCl3→CHCl3-MeOH（100∶2→100∶5→100∶7，V/V）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1，V/V/V，下層）→MeOH]，共得19個組分（Fr.1～19）。Fraction 12（3.3 g）經(jīng)PHPLC制備[MeOH-H2O（20∶80→40∶60→50∶50→60∶40→100∶0，V/V）]，共得到21個組分（Fr.12-1～12-21）。Fraction12-11（107.6mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱層析[MeOH-H2O（1∶1，V/V），共得到5個組分（Fr.12-11-1～12-11-5）。Fraction 12-11-2（58.7 mg）經(jīng)PHPLC[CH3CN-H2O（15∶85，V/V）+1%HAc]分離制備，得到1（8.0 mg）。Fraction 13（5.0 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOH-H2O（10∶90→20∶80→30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→100∶0，V/V）]，共得到 15個組分（Fr.13-1～13-15）。Fraction 13-5（50.4 mg）經(jīng)PHPLC分離制備[MeOHH2O（12∶88，V/V）+1%HAc]，得到3（16.8 mg）。Fraction 14（6.0 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOH-H2O（30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]，共得到10個組分（Fr.14-1～14-10）。Fr.14-2（23.2 mg）經(jīng)PHPLC分離制備[MeOH-H2O（15∶85，V/V）+1%HAc]，得到6（8.8 mg）。Fraction 19（5.5 g）經(jīng)PHPLC制備[CH3CN-H2O（13∶87，V/V）+1%HAc，V/V）]，共得到17個組分（Fr.19-1～19-17）。Fraction 19-3（246.9 mg）經(jīng)分離制備PHPLC [CH3CN-H2O（10∶90，V/V）+1%HAc]，得到2（21.1mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

從槐米中分離得到的化合物結(jié)構(gòu)見圖1。

3.1化合物1 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 425.141 2[M+Na]+，確定其分子式為C18H26O10（calcdforC18H26O10Na，425.1418）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.40（2H，br.d，ca.J=8 Hz，H-2,6），7.35（2H，t like，ca.J=8 Hz，H-3,5），7.28（1H，t like，ca.J=8 Hz，H-4），4.57、4.78（1H each，both d，J=12.0 Hz，H2-7），4.22（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.04（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.14（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-3′），3.02（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），3.27（1H，m，H-5′），[3.44（1H，dd，J= 7.0、11.5 Hz），3.88（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′]，4.91（1H，d，J=3.0 Hz，H-1″），3.79（1H，d，J=3.0 Hz，H-2″），3.60、3.88（1H each，both d，J=9.0 Hz，H2-4″），3.35（2H，s，H2-5″）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：137.8（C-1），127.7（C-2,6），128.0（C-3,5），127.3（C-4），69.4（C-7），101.8（C-1′），73.3（C-2′），76.5（C-3′），70.2（C-4′），75.6（C-5′），67.6（C-6′），109.2（C-1″），75.8（C-2″），78.7（C-3″），73.2（C-4″），63.1（C-5″）。該化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在內(nèi)的2D-NMR譜的解析，鑒定為icariside F2[9]。

圖1 從槐米中分離得到的化合物結(jié)構(gòu)

3.2化合物2 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 483.080 7[M-H]-，確定其分子式為C20H20O14（calcd for C20H19O14，483.078）。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.26（1H，br.s，H-2），7.14（1H，br.s，H-6），4.81（1H，br.s，H-1′），3.18（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.42（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-3′），3.69（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），4.25（1H，br.d，ca.J=11 Hz，H-5'），[3.44（1H，m，overlapped），4.44（1H，br.d，ca.J=11 Hz），H2-6′]，7.04（2H，br.s，H-2″，6″）。13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δ：122.2（C-1），111.9（C-2），145.3（C-3），139.0（C-4），145.2（C-5），108.5（C-6），102.5（C-1′），73.2（C-2′），75.2（C-3′），69.3（C-4′），74.0（C-5′），63.1（C-6′），119.1（C-1″），108.5（C-2″），145.5（C-3″），138.4（C-4″），145.5（C-5″），108.9（C-6″），165.8（C-7″），167.6（1-COOH）。該化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在內(nèi)的2D-NMR譜的解析，鑒定為gallic acid 3-O-β-D-（6′-O-galloyl）glucopyranoside[10]。

3.3化合物3 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 377.142 6[M+Na]+，確定其分子式為C14H26O10（calcd for C14H26O10Na，377.141 8）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：1.14（3H，t，J=6.5 Hz，H3-1），3.49、3.76（1H each，both dd，J=7.0、10.0 Hz，H2-2），4.11（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），2.94（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.13（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-3′），2.98（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），3.25（1H，m，H-5′），[3.43（1H，m，overlapped），3.80（1H，br.d，ca.J=11 Hz），H2-6']，4.59（1H，br.s，H-1″），3.61（1H，br.s，H-2″），3.42（1H，m，overlapped，H-3″），3.18（1H，dd，J=9.5、9.5 Hz，H-4′），3.45（1H，m，H-5′），1.13（3H，d，J=6.5 Hz，6″-CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：15.1（C-1），63.8（C-2），102.5（C-1′），73.3（C-2′），76.5（C-3′），70.2（C-4′），75.3（C-5′），67.1（C-6′），100.8（C-1″），70.4（C-2″），70.5（C-3″），71.9（C-4″），68.2（C-5″），17.8（6″-CH3）。該化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在內(nèi)的2D-NMR譜的解析，鑒定為ethyl－α－L－rhamnopyranosyl（1→6）－β-D-glucoside[11]。

3.4化合物4 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 327.109 5[M-H]-，確定其分子式為C15H20O8（calcd for C15H19O8，327.109 85）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：1.21（3H，t，J=7.0 Hz，H3-1），3.58、3.88（1H each，both dd，J=7.0、10.5 Hz，H2-2），4.31（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.21（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.40（2H，m，overlapped，H-3′and H-4′），3.57（1H，m，overlapped，H-5′），[4.40（1H，dd，J=5.5、11.5 Hz），4.52（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′]，7.89（2H，d，J=8.0 Hz，H-2″,6″），6.82（2H，d，J=8.0 Hz，H-3″,5″）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：15.5（C-1），66.4（C-2），104.1（C-1′），75.1（C-2′），78.0（C-3′），71.9（C-4′），75.5（C-5′），64.9（C-6′），122.1（C-1″），132.9（C-2″，6″），116.3（C-3″，5″），163.9（C-4″），168.2（C-7″）。該化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在內(nèi)的2D-NMR譜的解析，鑒定為Et－（6－O－phydroxybenzoyl）－β－D－glucopyranoside[12]。

3.5化合物5白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 265.081 1[M+Na]+，確定其分子式為C10H14N2O5（calcdforC10H14N2O5Na，265.0795）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.81（1H，s，H-6），6.28（1H，t，J=7.0 Hz，H-1′），2.24（2H，m，H2-2′），4.40（1H，m，H-3′），3.90（1H，q like，ca.J=4 Hz，H-4′），[3.72（1H，dd，J=4.0、12.0 Hz），3.79（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），H2-5′]，1.85（3H，s，5-CH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：152.4（C-2），166.5（C-4），111.6（C-5），138.2（C-6），86.3（C-1′），41.2（C-2′），72.2（C-3′），88.9（C-4′），62.9（C-7′），12.5（5-CH3）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻中報道的胸腺嘧啶脫氧核苷的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為胸腺嘧啶脫氧核苷（2′-deoxythymidine）[13]。

3.6化合物6白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 205.096 6[M+H]+，確定其分子式為C11H12N2O2（calcd for C11H13N2O2，205.097 2）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.21（1H，s，H-2），7.57（1H，d，J=8.0 Hz，H-4），6.97（1H，t like，ca.J=8 Hz，H-5），7.06（1H，t like，ca.J=8 Hz，H-6），7.35（1H，d，J=8.0Hz，H-7），[2.96（1H，dd，J=9.0、15.0Hz），3.31（1H，dd，J=3.5、15.0 Hz），H2-8]，3.46（1H，dd，J= 3.5、9.0 Hz，H2-9）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻中報道的左旋色氨酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為左旋色氨酸（L-tryptophan）[14]。

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Isolation and identification of chemical constituents from Flos Sophorae I

LIU Li-li，LI Xiao-xia，CHEN Yue，SHI Ping-ping，QU Lu，ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the chemical constituents from Flos Sophorae.[Methods]The chemical components were obtained by using chromatographies such as silica gel,ODS,Sephadex LH-20 and HPLC,and identified by the chemical and physical methods,especially spectral analysis.[Results]Six compounds were obtained and identified as icariside F2 (1),gallic acid 3-O-β-D-(6'-O-galloyl)glucopyranoside(2),ethyl-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)-β-D-glucoside(3),Et(6-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucopyranoside(4),L-tryptophan (5)and 2'-deoxythymidine(6),respectively.[Conclusion]Compounds 1～5 were obtained from Sophora genus firstly.

Flos Sophorae;chemical constituents;structural identification

R284

：A

：1673－9043（2014）04－0230-04

2014-03-15）

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.04.11

國家自然基金項目資助（81202995）；國家科技重大專項項目-重大新藥創(chuàng)制（2011ZX09307-002-01）；新世紀優(yōu)秀人才支持計劃資助（NCET-12-1069）。

劉麗麗（1986-），女，碩士研究生，主要從事中藥化學研究。

張 祎，E-mail:zhwwxzh@hotmail.com。