林淑琴，成 琳，張文兵＊＊，徐 瑋，麥康森，申屠基康

（1.中國海洋大學(xué)水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料農(nóng)業(yè)部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島266003；2.寧波市海洋與漁業(yè)研究院，浙江 寧波315010）

蛋白質(zhì)是魚類必需的營養(yǎng)物質(zhì)，在其生長過程中發(fā)揮著重要的生理功能。魚體攝入的蛋白質(zhì)通過一系列代謝過程合成新的蛋白質(zhì)，在組織器官中沉積[1]。魚體的生長實(shí)質(zhì)上是體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積的過程，飼料中蛋白質(zhì)缺乏或不足會導(dǎo)致魚體生長受阻，體質(zhì)下降。一般來說，隨著個體發(fā)育日趨成熟，魚體的生長速度下降，對蛋白質(zhì)的需要量也下降[2]。提高飼料中蛋白質(zhì)的含量通常會提高魚體的生長速率，但飼料蛋白質(zhì)含量超過其適宜值，會引起蛋白質(zhì)效率下降，作為能量消耗的蛋白質(zhì)增加，體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積也會受到影響[3－5]。與此同時，體內(nèi)多余的蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)生的氨和尿素排出體外，對養(yǎng)殖環(huán)境造成不良影響。

研究表明，東海銀鯧（Pampusargenteus）和絲尾魚（Mystusnemurus）的魚體蛋白質(zhì)含量會隨著飼料中蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高[6－7]，而美洲黑石斑（Centropristisstriata）的魚體蛋白質(zhì)含量則受飼料蛋白質(zhì)水平的影響不顯著[8]。Deng等研究絲尾鳠（Hemibagruswyckioides）后認(rèn)為，魚體蛋白質(zhì)的沉積主要由所處的生長階段所決定[9]。

大黃魚（Pseudosciaenacrocea）是我國特有的名貴海水養(yǎng)殖魚類。Duan等在研究飼料中不同蛋白質(zhì)/脂肪比對大黃魚幼魚生長的影響時發(fā)現(xiàn)，魚體蛋白質(zhì)含量受飼料蛋白質(zhì)水平的影響不顯著[10]。但大黃魚體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝相關(guān)反應(yīng)、蛋白質(zhì)沉積與代謝反應(yīng)是否受到飼料蛋白質(zhì)水平和生長階段的雙重影響等問題并不清楚。本研究以大黃魚為實(shí)驗(yàn)對象，比較分析飼料中不同蛋白質(zhì)水平對3個不同生長階段的大黃魚體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積和氨基酸代謝反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的影響，為完善不同生長階段大黃魚的飼料配方提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)用魚

實(shí)驗(yàn)用大黃魚購自浙江象山苗種培育有限公司。其中，小規(guī)格實(shí)驗(yàn)魚初始體重為（12.80±0.08）g，簡寫為SF；中規(guī)格實(shí)驗(yàn)魚初始體重為（137.90±0.81）g，簡寫為 MF；大規(guī)格實(shí)驗(yàn)魚初始體重為（194.10±2.37）g，簡寫為LF。

1.2 實(shí)驗(yàn)飼料

以魚粉、酪蛋白和明膠為蛋白源，魚油、卵磷脂為脂肪源，糊精為糖源，配制7種不同蛋白質(zhì)梯度的等脂（粗脂肪：11.8%）、等能（可利用能：16.7kJ/g）實(shí)驗(yàn)飼料。飼料中蛋白質(zhì)含量的實(shí)測值分別為：30.4%，34.2%，38.5%，42.2%，46.0%，50.3%和54.3%（見表1）。其中，蛋白質(zhì)含量為30.4%～50.3%的6組飼料用于LF大黃魚，蛋白質(zhì)含量為34.2%～54.3%的6組飼料用于SF和MF大黃魚。飼料制作前，所有原料經(jīng)粉碎后過80目篩網(wǎng)，各原料混合均勻后加入魚油和卵磷脂手工搓勻，隨后加適量的水揉勻，經(jīng)F（II）－26型雙螺桿擠條機(jī)（華南理工大學(xué)，廣州）加工制成顆粒飼料，然后置于50℃鼓風(fēng)烘箱烘干至水分含量10%以下，并用塑料袋包裝后保存于－20℃冰箱中備用。SF實(shí)驗(yàn)魚用飼料直徑為4mm，MF實(shí)驗(yàn)魚用飼料直徑為8mm，LF實(shí)驗(yàn)魚飼料直徑為10mm。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料配方和化學(xué)成分（干重）Table 1 Formulation and proximate composition of the experimental diets（dry matter）

1.3 養(yǎng)殖管理與樣品采集分析

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在浙江省象山縣外高泥村西滬港海灣的近海浮式網(wǎng)箱中進(jìn)行。正式實(shí)驗(yàn)前，3種規(guī)格的大黃魚分別放于網(wǎng)箱（3.0m×6.0m×3.0m）中進(jìn)行暫養(yǎng)，并以商業(yè)飼料（青島七好生物科技有限公司，粗蛋白40%）飽食投喂2周，使之逐漸適應(yīng)人工配合飼料和養(yǎng)殖環(huán)境。

2周的暫養(yǎng)期結(jié)束以后，3種規(guī)格大黃魚采用相同方式進(jìn)行分組。分別從暫養(yǎng)網(wǎng)箱中挑選出規(guī)格一致、體格健壯的大黃魚隨機(jī)分配到18個小網(wǎng)箱（1.5m×1.5m×2.0m）中，SF每網(wǎng)箱放養(yǎng)60尾，MF和LF每網(wǎng)箱放養(yǎng)45尾。SF和MF投喂實(shí)驗(yàn)飼料8周，LF投喂實(shí)驗(yàn)飼料9周。每個規(guī)格大黃魚養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)均有6個處理，每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)1個網(wǎng)箱。采用飽食投喂，每天2次（05：00和17：30）。養(yǎng)殖期間，水溫27～30℃，鹽度25～28，溶解氧在7mg·L－1左右。

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)開始前對實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行饑餓處理24h后，分別隨機(jī)抽取10尾SF、MF和LF，置于－20℃冰箱中備用。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行24h饑餓處理，每個網(wǎng)箱隨機(jī)取11尾大黃魚，其中5尾置于－20℃冰箱中備用，另外6尾用無菌注射器自尾靜脈取血，在4℃、3 500r/min的條件下離心10min，取上清，于－80℃冰箱保存。實(shí)驗(yàn)魚取血后，立即進(jìn)行解剖，取肝臟迅速放入液氮中保存。

飼料原料、飼料成分和魚體蛋白質(zhì)含量測定參照AOAC的方法[12]。肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性以及血清中血氨、尿素氮和總氨基酸含量采用南京建成生物工程研究所相應(yīng)試劑盒測定。

1.4 計(jì)算和統(tǒng)計(jì)分析

氮保留率（NR，g·kg－1·d－1）＝（Nt－N0）/（（Wt＋W0）/2×t）。

其中：Nt和N0分別為大黃魚體終末氮含量（g）和初始氮含量（g）；Wt和W0分別為大黃魚終末體重（g）和初始體重（g）；t為實(shí)驗(yàn)天數(shù)（d）。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），當(dāng)差異顯著時（P＜0.05），進(jìn)行Tukey多重比較。

2 結(jié)果

2.1 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚體蛋白質(zhì)含量和氮保留率的影響

本實(shí)驗(yàn)條件下，大黃魚存活率均在85%以上，各處理組間沒有顯著差異（P＞0.05）。

SF全魚體蛋白質(zhì)含量隨著飼料蛋白質(zhì)水平的上升逐漸上升（P＜0.05），當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平為54.3%時，魚體蛋白質(zhì)含量取得最大值16.56%，顯著高于飼料蛋白質(zhì)含量為34.2%時魚體蛋白質(zhì)含量（14.78%，見圖1）。飼料蛋白質(zhì)水平對MF和LF全魚體蛋白質(zhì)含量沒有顯著影響（P＞0.05，見圖2和3）。

飼料中蛋白質(zhì)水平的升高顯著提高SF的氮保留率（P＜0.05），當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平為54.3%時，氮保留率取得最大值0.65g·kg－1·d－1，顯著高于飼料蛋白質(zhì)含量為34.2%時的氮保留率（0.48g·kg－1·d－1，見圖1）。飼料中蛋白質(zhì)水平對MF和LF的氮保留率沒有顯著影響（P＞0.05），其中 MF的氮保留率為0.19～0.24g·kg－1·d－1，LF 的氮保留率為0.49～0.55 g·kg－1·d－1（見圖2和3）。

圖1 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚小規(guī)格魚（SF）全魚體蛋白質(zhì)含量和氮保留率的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Fig.1 Effects of dietary protein levels on the whole body protein content and the nitrogen retention of large yellow croaker（SF）（means±S.E.M.，n＝3）

圖2 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚中規(guī)格魚（MF）全魚體蛋白質(zhì)含量和氮保留率的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Fig.2 Effects of dietary protein levels on the whole body protein content and the nitrogen retention of large yellow croaker（MF）（means±S.E.M.，n＝3）

圖3 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚大規(guī)格魚（LF）全魚體蛋白質(zhì)含量和氮保留率的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Fig.3 Effects of dietary protein levels on the whole body protein content and the nitrogen retention of large yellow croaker（LF）（means±S.E.M.，n＝3）

大黃魚氮保留率在3個不同生長階段存在顯著差異（P＜0.0 5，見圖4）。MF的氮保留率最低（0.2 2 g·kg－1·d－1），顯著低于SF和LF。SF和LF之間氮保留率沒有顯著差異（P＞0.05），其中SF的氮保留率為0.59g·kg－1·d－1，LF的氮保留率為0.53g·kg－1·d－1。

圖4 不同生長階段對大黃魚氮保留率的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Fig.4 Effects of growth stages on the nitrogen retention of large yellow croaker（means±S.E.M.，n＝3）

2.2 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚肝臟指標(biāo)的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對SF、MF和LF肝臟中AST和ALT的活性均有顯著性影響（P＜0.05）。

隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，SF的肝臟AST活性顯著上升（P＜0.05）（見表2）。當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為54.3%時，AST活性取得最大值44.8U/mg prot.，顯著 高 于 34.2%、38.5%、42.2% 和 46.0% 處 理 組（P＜0.05），但與50.3%處理組之間沒有顯著差異。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，SF的肝臟ALT活性顯著上升（P＜0.05）（見表2）。當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為54.3%時，ALT活性取得最大值76.1U/mg prot.，顯著高于34.2%、38.5%、42.2%和46.0%處理組（P＜0.05），但與50.3%處理組之間沒有顯著差異。

MF的肝臟AST活性隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高顯著上升（P＜0.05）（見表3）。當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為54.3%時，AST活性取得最大值91.9U/mg prot.，顯著高于34.2%、38.5%和42.2%處理組（P＜0.05），但與46.0%和50.3%處理組之間沒有顯著差異。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，MF的肝臟ALT活性顯著上升（P＜0.05）（見表3）。當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為54.3%時，ALT活性取得最大值 55.9U/mg prot.，顯著高于34.2%、38.5%、42.2%和46.0%處理組（P＜0.05），但與50.3%處理組之間沒有顯著差異。

表2 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚小規(guī)格魚代謝反應(yīng)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）1Table 2 Effects of dietary protein levels on protein metabolic responses in serum and in liver of large yellow croaker（SF）（means± S.E.M.，n＝3）1

隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，LF的肝臟AST活性顯著上升（P＜0.05）（見表4）。當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為50.3%時，AST活性取得最大值24.0U/mg prot.，顯著高于30.4%，34.2%、38.5%處理組（P＜0.05），但與42.2%和46.0%處理組之間沒有顯著差異。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，LF的肝臟ALT活性顯著上升（P＜0.05）（見表4）。當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為50.3%時，ALT活性取得最大值63.1U/mg prot.，顯著高于30.4%，34.2%、38.5%、42.2%和46.0%處理組（P＜0.05）。

表3 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚中規(guī)格魚代謝反應(yīng)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）1Table 3 Effects of dietary protein levels on protein metabolic responses in serum and in liver of large yellow croaker（MF）（means±S.E.M.，n＝3）1

表4 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚大規(guī)格魚代謝反應(yīng)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）1Table 4 Effects of dietary protein levels on protein metabolic responses in serum and liver of large yellow croaker（LF）（means±S.E.M.，n＝3）1

2.3 飼料蛋白質(zhì)水平對大黃魚血清指標(biāo)的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對SF、MF和LF血清中血氨、尿素氮和總氨基酸含量均有顯著影響（P＜0.05）。

SF血清中血氨、尿素氮和總氨基酸含量均隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高（P＜0.05）（見表2）。其中，血氨含量為432.7～579.4μmol/L，尿素氮含量為6.8～9.1mmol/L，總氨基酸含量為61.2～83.5 μmol/L。

MF血清中血氨、尿素氮和總氨基酸均隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高（P＜0.05）（見表3）。其中，血氨含量為726.8～1154.9μmol/L，尿素氮含量為1.2～2.4mmol/L，總氨基酸含量為23.4～35.8 μmol/L。

LF血清中血氨、尿素氮和總氨基酸也隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高（P＜0.05）（見表4）。其中，血氨含量為371.1～585.5μmol/L，尿素氮含量為1.7～3.2mmol/L，總氨基酸含量為41.2～69.3 μmol/L。

大黃魚血清中血氨含量在3個不同生長階段之間存在顯著差異（P＜0.05）（見圖5）。MF階段血氨含量取得最高值984.4μmol/L，顯著高于SF和LF。而SF和LF之間血氨含量沒有顯著差異。其中，SF血氨含量為511.2μmol/L，LF血氨含量為465.8 μmol/L。

圖5 不同生長階段對大黃魚血清中血氨含量的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Fig.5 Effects of growth stages on the ammonia in serum of large yellow croaker（means±S.E.M.，n＝3）

3 討論

3.1 飼料蛋白質(zhì)水平對3個生長階段大黃魚蛋白質(zhì)沉積的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對魚體蛋白質(zhì)含量的影響在不同的研究中結(jié)果不盡一致。對東海銀鯧的研究表明魚體蛋白質(zhì)含量隨著飼料蛋白質(zhì)水平的上升而逐漸增加[6]。但也有研究發(fā)現(xiàn)魚體蛋白質(zhì)含量沒有顯著受到飼料蛋白質(zhì)水平的影響，如美洲黑石斑[8]。本研究中，SF魚體蛋白質(zhì)含量隨著飼料蛋白質(zhì)水平的上升而逐漸上升，54.3%處理組的魚體蛋白質(zhì)含量顯著高于34.2%處理組（見圖1）。而MF和LF的魚體蛋白質(zhì)含量沒有受到飼料蛋白質(zhì)水平的顯著影響（見圖2和3）。Einen和Roem[13]在對大西洋鮭（Salmosalar）的研究中也得到類似的結(jié)果，即初始體重為1.6kg的大西洋鮭體蛋白質(zhì)含量隨著飼料蛋白質(zhì)水平的上升而上升，但初始體重為2.48kg的大西洋鮭體蛋白質(zhì)含量在不同飼料蛋白質(zhì)水平之間沒有顯著差異。由此可見，同種魚類由于生長階段的不同，會導(dǎo)致魚體蛋白質(zhì)含量隨著飼料蛋白質(zhì)水平的變化趨勢有所差異。因此，關(guān)于飼料蛋白質(zhì)水平影響魚體蛋白質(zhì)含量在不同研究之間所得的不同結(jié)果，究其原因除了與種類差異有關(guān)外，不同的生長階段也是一個重要的影響因素。

本研究中SF的氮保留率隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高，MF和LF的氮保留率卻沒有受到飼料蛋白質(zhì)水平的顯著影響。但MF的氮保留率顯著低于SF和LF。本研究所選擇的3個規(guī)格的大黃魚，在性成熟方面存在差異。林丹軍等[13]的研究表明，大黃魚的性腺發(fā)育分為6個時期。其中，5月齡的大黃魚，卵巢和精巢都處于第Ⅰ期，性腺呈絲狀，外觀不易辨認(rèn)。8月齡開始，雌魚卵原細(xì)胞進(jìn)入小生長期形成初級卵母細(xì)胞，雄魚精原細(xì)胞也迅速增值，都進(jìn)入大黃魚性腺發(fā)育的第Ⅱ期。1～2.5年齡的大黃魚，卵巢長期處于第Ⅱ期。1齡雄魚開始，精巢已有各期精原細(xì)胞和少量精子為發(fā)育的第Ⅲ、Ⅳ期。3年齡大黃魚雌魚性腺發(fā)育進(jìn)入第Ⅲ期，初級卵母細(xì)胞進(jìn)入大生長期，開始積累營養(yǎng)物質(zhì)[14]。由此可見，8月齡（體重為100g左右）開始是大黃魚性腺發(fā)育的一個重要時期，此過程中性腺的發(fā)育需要消耗大量能量物質(zhì)，尤其是蛋白質(zhì)和脂肪[15－17]。本研究中 SF（12.8g）、MF（137.9g）和 LF（194.1g）分別是5月齡、9月齡和17月齡大黃魚。取樣發(fā)現(xiàn)，SF魚體內(nèi)沒有明顯的性腺組織，MF中性腺組織較少，而LF時期大黃魚體內(nèi)性腺組織較發(fā)達(dá)，這與林丹軍等[14]研究中的描述相符。因此可以推斷，MF時期飼料蛋白質(zhì)較大一部分用于性腺的發(fā)育，為性腺發(fā)育提供能量，魚體生長發(fā)育相對較緩，體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積相對較少。

3.2 飼料蛋白質(zhì)水平對3個生長階段大黃魚肝臟轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

本研究中，大黃魚3個生長階段的肝臟AST和ALT活性均隨著飼料中蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高。Melo等在克琳雷氏鯰（Rhamdiaquelen）的研究中表明飼料中蛋白質(zhì)水平越高，魚體內(nèi)AST和ALT的活性越強(qiáng)[5]，其他一些研究中也得到類似結(jié)果[18－19]。飼料中蛋白質(zhì)進(jìn)入魚體后經(jīng)過消化作用分解為氨基酸，然后轉(zhuǎn)運(yùn)到各組織中合成新的蛋白質(zhì)。過量的氨基酸可被分解代謝排出體外，也可以轉(zhuǎn)化為碳水化合物和脂肪儲存在體內(nèi)。AST和ALT是氨基酸代謝關(guān)鍵酶。由此可見，隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，大黃魚體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝活力在增強(qiáng)。

3.3 飼料蛋白質(zhì)水平對3個生長階段大黃魚血清中血氨、尿素氮和總氨基酸含量的影響

食物中的蛋白質(zhì)經(jīng)消化分解產(chǎn)生氨基酸通過吸收進(jìn)入體內(nèi)氨基酸代謝庫，有一部分氨基酸被氧化分解，產(chǎn)生氨和尿素等。其中氨是魚類氨基酸分解代謝的主要產(chǎn)物。魚體內(nèi)肝臟代謝產(chǎn)生的氨，在血液中逐漸累積，最后由鰓排出體外。本研究中，3個生長階段的大黃魚血清中血氨含量和尿素氮含量均隨著飼料蛋白質(zhì)水平的上升而升高。在克琳雷氏鯰、石首魚（Bidyanus bidyanus）和歐洲黑鱸（Dicentrarchuslabrax）的研究中也得到相同的結(jié)果[5，20－21]。

本研究中，MF階段大黃魚血清中血氨含量顯著高于SF和LF。這表明在MF階段，大黃魚體內(nèi)氨基酸的分解代謝旺盛，此結(jié)果與MF的氮保留率顯著低于SF和LF的結(jié)果相統(tǒng)一。MF時期，飼料中較大一部分蛋白質(zhì)為大黃魚的性腺發(fā)育提供能量，魚體內(nèi)氨基酸較大部分進(jìn)入分解代謝，在大黃魚體內(nèi)生成新蛋白質(zhì)沉積下來的比例相對減少。這可能是造成MF的氮保留率顯著低于SF和LF，而血清中血氨含量顯著高于SF和LF的一個重要原因。

本研究中，SF、MF和LF的血清總氨基酸含量均隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高而顯著升高。在克琳雷氏鯰、虹鱒（Salmogairdneri）和歐洲鰻鱺（Anguillaanguilla）的研究中表明飼料蛋白質(zhì)水平能顯著提高血液中游離氨基酸的含量[5，22－23]。血液中游離氨基酸含量是飼料中氨基酸攝入水平與組織氨基酸新陳代謝動態(tài)平衡的綜合結(jié)果，它是氨基酸在組織間轉(zhuǎn)運(yùn)的主要形式，其含量的變化在一定程度上反映了機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和能量代謝水平。血清游離氨基酸受多種因素的調(diào)節(jié)，其中以飼料成分影響為主，而飼料中蛋白質(zhì)含量是其主要影響因素[24－25]。本研究中隨著飼料蛋白質(zhì)水平升高，血清總氨基酸含量顯著上升，這也從另外一方面說明大黃魚體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝強(qiáng)度與飼料蛋白質(zhì)供給量之間有著密切的關(guān)系。

本研究表明，大黃魚體蛋白質(zhì)的沉積不僅受到飼料蛋白質(zhì)水平的影響，同時還與大黃魚的生長階段密切相關(guān)；飼料中蛋白質(zhì)水平的升高，增強(qiáng)了3個生長階段大黃魚體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝。

[1]Houlihan D F，Mathers E，F(xiàn)oster A R.Biochemical correlates of growth rate in fish[M].//Rankin J C，Jensen F B.Fish Ecophysiology.London：Chapman ＆ Hall，1993：45－72.

[2]National Research Council（NRC）.Committee on animal nutrition.Nutrient requirements of fish[M].Washington：National A－cademies Press，2011.

[3]Ballantyne J S.Amino acid metabolism [J].Fish Physiology，2001，20：77－107.

[4]Stone D A J，Allan G L，Anderson A J.Carbohydrate utilization by juvenile silver perch，Bidyanusbidyanus（Mitchell）.III.The protein－sparing effect of wheat starch－based carbohydrates [J].Aquaculture Research，2003，34（2）：123－134.

[5]Melo J F B，Lundstedt L M，Metón I，et al.Effects of dietary levels of protein on nitrogenous metabolism ofRhamdiaquelen（Teleostei：Pimelodidae）[J].Comp Biochem Physiol，2006，145（2）：181－187.

[6]Arshad Hossain M，Almatar S M，James C M.Optimum dietary protein level for juvenile silver pomfret，Pampusargenteus（Euphrasen）[J].Journal of the World Aquaculture Society，2010，41（5）：710－720.

[7]Khan S，Ang K J，Ambak M A.The effect of varying dietary protein level on the growth，food conversion，protein utilization and body composition of tropical catfishMystusnemurus（C.＆ V.）cultured in static pond water system [J].Aquaculture Research，1996，27（11）：823－829.

[8]Shah Alam M，Watanabe W O，Carroll P M.Dietary protein requirements of juvenile black sea bass，Centropristisstriata[J].Journal of the World Aquaculture Society，2008，39（5）：656－663.

[9]Deng J，Zhang X，Bi B，et al.Dietary protein requirement of juvenile Asian red－tailed catfishHemibagruswyckioides[J].Animal Feed Science and Technology，2011，170：231－238.

[10]Duan Q，Mai K，Zhong H，et al.Studies on the nutrition of the large yellow croaker，Pseudosciaena crocea R.I：growth response to graded levels of dietary protein and lipid[J].Aquaculture Research，2001，32：46－52.

[11]Garling J D L，Wilson R P.Optimum dietary protein to energy ratio for channel catfish fingerlings，Ictaluruspunctatus[J].The Journal of Nutrition，1976，106（9）：13－68.

[12]Association of Official Analytical Chemists （AOAC）.Official Methods of Analysis of Official Analytical Chemists International[M].16th edn.Arlington，USA：Association of Official Analytical Chemists，1995.

[13]Einen O，Roem A J.Dietary protein/energy ratios for Atlantic salmon in relation to fish size：growth，feed utilization and slaughter quality[J].Aquaculture Nutrition，2003，3（2）：115－126.

[14]林丹軍，張健，駱嘉，等.人工養(yǎng)殖的大黃魚性腺發(fā)育及性周期研究 [J].福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1992，8（3）：81－87.

[15]Einen O，Roem A J.Dietary protein/energy ratios for Atlantic salmon in spawning performance and amino acid composition of eggs of Nile tilapia，Oreochromisniloticus[J].Aquaculture，1997，146：121－134.

[16]Palitha Kithsiri H M，Prakash Sharma S G，Syeddain Zaidi A K，et al.VenkateshwarluGrowth and reproductive performance of female guppy，poecilia reticulate（peters）fed diets with different nutrient levels[J].Indian Journal of Fisheries，2010，157：65－71.

[17]施瑔芳.魚類性腺發(fā)育研究新進(jìn)展 [J].水生生物學(xué)報(bào)，2005，12（3）：248－258.

[18]Sánchez－Muros M J，García－Rejón L，García－Salguero L，et al.Long－term nutritional effects on the primary liver and kidney metabolism in rainbow trout.Adaptive response to starvation and a high－protein，carbohydrate－free diet on glutamate dehydrogenase and alanine aminotransferase kinetics [J].Biochem Cell Bio，1998，30（1）：55－63.

[19]Sung－Sam，Kim Kyeong－Jun Lee.Dietary protein requirement of juvenile tiger puffer （Takifugurubripes）[J].Aquaculture，2009，287：219－222.

[20]Yang S，Liou C，Liu F.Effects of dietary protein level on growth performance，carcass composition and ammonia excretion in juvenile silver perch（Bidyanusbidyanus）[J].Aquaculture，2002，213：363－372.

[21]Peres H，Oliva－Teles A.Effect of dietary protein lipid level on metabolic utilization of diets by European sea bass（Dicentrarchus labrax）juveniles[J].Fish Physiology and Biochemistry，2001，25：269－275.

[22]Lone K P，Ince B W，Matty A J.Changes in the blood chemistry of rainbow trout，Salmogairdnerifish，in relation to dietary protein level，and an anabolic steroid hormone，ethylestrenol[J].Journal of Fish Biology，1982，20：597－606.

[23]Suárez M D，Hidalgo M C，García Gallego M，et al.Influence of the relative proportions of energy yielding nutrients on liver intermediary metabolism of the European eel[J].Comparative Bio－chemistry and Physiology Part A：Physiology，1995，111（3）：421－428.

[24]Grove D J，Loizides L G，Nott J.Satiation amount，frequency of feeding and gastric emptying rate in Salmo gairdner[J].Journal of Fish Biology，1981，12：507－516.

[25]Darcy B.Availability of amino acids in monogastric animals[J].Diabetes Metabolism，1984，10：121－133.