王康鋒　張立娟　孫西慶　師冉

[摘要] 目的 觀察抵當(dāng)湯對阿爾茨海默?。ˋD）大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。 方法 將40只雄性Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、安理申組和抵當(dāng)湯組。采用右側(cè)海馬一次性注射聚集態(tài)Aβ25-35方法制備AD大鼠模型，造模成功后進行定位航行實驗及空間探索實驗，之后連續(xù)灌胃給藥，療程為8周，用藥結(jié)束后繼續(xù)進行Morris水迷宮實驗，觀察各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變。 結(jié)果 與模型組比較，各給藥組大鼠逃避潛伏期明顯縮短（P<0.05或P<0.01），抵當(dāng)湯組較安理申組縮短更明顯（P<0.05）。同時藥后安理申組和抵當(dāng)湯組大鼠跨臺次數(shù)較實驗前明顯增加（P<0.05），與安理申組相比抵當(dāng)湯組增加更顯著（P<0.05）。 結(jié)論 抵當(dāng)湯可以改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

[關(guān)鍵詞] 抵當(dāng)湯；阿爾茨海默病；學(xué)習(xí)記憶

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）03（b）-0016-03

阿爾茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一種以進行性認知障礙和記憶力損害為主要臨床表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病，其典型的病理學(xué)特征是老年斑（SP）、神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFTs）和神經(jīng)元丟失[1]。本病發(fā)病率高，危害大，目前中國60歲以上人群AD發(fā)病率已高達3%～5%[2]，給家庭和社會帶來了沉重的負擔(dān)。由于發(fā)病機制尚未完全闡明，本病尚缺乏有效的防治手段，積極尋找療效確切的治療藥物是目前醫(yī)務(wù)工作者的迫切任務(wù)。近年來，受張仲景蓄血證理論的啟迪，采用抵當(dāng)湯治療阿爾茨海默病取得了理想的臨床療效[3]。但本方治療阿爾茨海默病的基礎(chǔ)研究目前還十分薄弱，療效機制尚未完全闡明。本研究通過Aβ25-35海馬區(qū)注射建立AD動物模型并用經(jīng)方抵當(dāng)湯進行干預(yù)，觀察本方對阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，以期為其臨床應(yīng)用提供客觀依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

抵當(dāng)湯組成：桃仁12 g，大黃9 g，水蛭6 g，虻蟲6 g。藥物由本院藥劑科提供，水煎后濃縮制成每毫升煎液含生藥3 g，高溫消毒滅菌，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩６嗄芜啐R[安理申，衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司，批號130536A]。Aβ25-35購于Sigma公司。

1.2 儀器

腦立體定向儀（江灣1號C型，上海川沙花木農(nóng)機廠）；Morris水迷宮（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 動物

雄性Wistar大鼠40只，清潔級，鼠齡8～12周，體質(zhì)量200～250 g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組及給藥 將大鼠40只隨機分為假手術(shù)組、模型組、安理申組、抵當(dāng)湯組，每組10只。治療藥物及對照藥物均根據(jù)臨床用藥情況，按成人（60 kg）日用藥量的10倍量折算成大鼠使用劑量。造模成功后第2天開始連續(xù)灌胃給藥，1次/d。假手術(shù)組及模型組用等量生理鹽水灌胃。療程為8周。

1.4.2 動物模型的建立[4] 用10%水合氯醛腹腔注射（3～3.5 ml/kg）麻醉大鼠。將頭部固定在立體定向儀上，剪毛消毒，在頭背中部縱向切口，暴露顱骨，參照《大鼠腦立體定位圖譜》，選右側(cè)海馬為注射區(qū)，定位坐標：前囟后3.0 mm，中線右側(cè)2.0 mm，硬膜下2.6 mm。在坐標點周圍用牙科鉆環(huán)行鉆開顱骨，并分離暴露硬腦膜，緩慢垂直進針至靶點，然后將1 μl Aβ25-35（10 μg/μl）緩慢注入，注射時間5 min，留針5 min，以保證溶液充分彌散，再緩慢撤針。所有操作均在無菌條件下進行，皮膚切開處給予少許青霉素粉劑，縫合切口。

1.4.3 Morris水迷宮實驗[5] Morris水迷宮為一恒溫圓形水池，直徑150 cm，高60 cm，水深35 cm，在水池的上緣等距離地設(shè)東、西、南、北4個標記點，以這4個入水點在水面和水桶底部的投影點，將水面和水桶分成4個象限，水溫（25±2）℃，實驗時保持水池周圍參照物、燈光強度不變。①定向航行實驗：大鼠術(shù)前1周進行Morris水迷宮訓(xùn)練，將平臺設(shè)置于東北象限，每天將實驗動物從東、南、西、北4個入水點分別放入水池中。記錄90 s內(nèi)動物自入水到找到平臺后四肢爬上平臺時所需要的時間，作為逃避潛伏期。每天訓(xùn)練一次，共訓(xùn)練5 d，第6天進行測試。②空間探索實驗：第7天撤走平臺進行空間探索實驗，任選一個入水點將大鼠面向池壁放入，記錄在90 s內(nèi)大鼠跨越原平臺的次數(shù)。給藥完畢后訓(xùn)練3 d后再進行定位航行實驗及空間探索實驗。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，樣本均數(shù)間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 定位航行實驗結(jié)果

藥物干預(yù)后安理申組、抵當(dāng)湯組東、南、西北給方向逃避潛伏期均短于模型組（P<0.05或P<0.01），抵當(dāng)湯組東向潛伏期和北向潛伏期短于安理申組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；南向潛伏期和西向潛伏期分別較安理申組縮短，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

表1 給藥后Morris水迷宮實驗各方向逃避潛伏期情況的比較（s，x±s）

與模型組比較，*P<0.05，#P<0.01；與安理申組比較，△P<0.05

2.2 空間探索實驗結(jié)果

用藥后安理申組和抵當(dāng)湯組大鼠跨臺次數(shù)均較實驗前明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與安理申組相比抵當(dāng)湯組增加更顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；假手術(shù)組和模型組較實驗前無明顯變化（P>0.05）（表2）。

表2 實驗前后各組大鼠跨臺次數(shù)比較（次，x±s）

與同組用藥前比較，*P<0.05；與安理申組比較，△P<0.05

3 討論

抵當(dāng)湯是醫(yī)圣張仲景創(chuàng)立的理血名方，由水蛭、虻蟲、桃仁、大黃四味藥物組成，主治下焦蓄血證?！秱摗酚涊d“太陽病六七日，表證猶存，脈微而沉，反不結(jié)胸，其人發(fā)狂者，以熱在下焦，少腹當(dāng)硬滿，小便自利者，下血乃愈，所以然者，以太陽隨經(jīng)，瘀熱在里故也，抵當(dāng)湯主之。”“太陽病，身黃，脈沉結(jié)，少腹硬，小便不利者，為無血也，小便自利，其人如狂，血證諦也，抵當(dāng)湯主之?！北痉疆?dāng)時是為下焦蓄血所設(shè)，但后世醫(yī)家大大拓寬了它的應(yīng)用范圍，目前已應(yīng)用于阿爾茨海默病、高血壓腦出血、外傷性腦梗死、頑固性失眠、腫瘤、慢性前列腺炎、糖尿尿病腎病、腎靜脈血栓形成等幾十種疾病。我們近年來受本方主治中“喜忘”“如狂”等癥狀的啟示，認為瘀血內(nèi)阻是阿爾茨海默病的重要病機[6-7]，采用抵當(dāng)湯治療阿爾茨海默病，收效滿意。有研究報道[3]，本方治療阿爾茨海默病總有效率達80.0%，明顯優(yōu)于西藥對照組的70.0%（P<0.01）；且治療組MMSE評分、ADAS-cog評分改善情況均明顯優(yōu)于對照組（P<0.05）。

現(xiàn)代藥理研究表明抵當(dāng)湯能通過改善模型大鼠的血液流體力學(xué)狀態(tài)和血液“凝”的病理狀態(tài)，下調(diào)內(nèi)皮素mRNA，提高體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)化率等達到抗衰老的作用[8]。溫曉輝等[9]認為抵當(dāng)湯通過調(diào)節(jié)血脂，減少細胞黏附分子的生成，以發(fā)揮保護內(nèi)皮功能的作用，從而能防治動脈粥樣硬化的形成，減少各種心腦血管疾病的發(fā)生。本研究表明抵當(dāng)湯可以顯著改善阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，縮短Morris水迷宮實驗逃避潛伏期，增加跨臺次數(shù)，作用優(yōu)于對照藥多奈哌齊，研究結(jié)果與文獻報道吻合[10]。其作用機制尚有待進一步深入研究，有學(xué)者認為可能與本方具有抗氧化、清除氧化代產(chǎn)物、改善血液流變學(xué)和增加腦血流量等作用有關(guān)[10]。

[參考文獻]

[1] 樊華.糖尿病與阿爾茨海默病發(fā)病風(fēng)險相關(guān)性研究進展[J].實用老年醫(yī)學(xué)，2010，24（4）：342-345.

[2] 陳可冀.老年性癡呆基礎(chǔ)和臨床研究進展思考[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1998，18（6）：324-326.

[3] 王康鋒，張立娟.抵當(dāng)湯加減治療老年性癡呆療效觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（10）：74-75.

[4] 蔡高梅，畢建忠.TRAIL在Aβ25-35誘導(dǎo)的大鼠海馬組織中的表達[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2008，25（10）：1856-1858.

[5] 呂誠，胡小令，祝高春，等.β-淀粉樣蛋白所致模擬老年性癡呆動物模型的建立[J].江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，45（1）：28，39.

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[7] 王康鋒.中醫(yī)治療老年性癡呆的思路與方法[J].河南中醫(yī)，2011，31（12）：1350-1351.

[8] 施雪音.抵當(dāng)湯與桃核承氣湯抗衰老作用比較的實驗研究[D].杭州：浙江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[9] 溫曉輝，潘麗，王鑫國，等.抵當(dāng)湯對去卵巢大鼠血脂異常及ET-1mRNA，VCAM-1mRNA表達的影響[J].河北中醫(yī)，2010，32（5）：751.

[10] 夏衛(wèi)軍，金妙文，張莉.抵當(dāng)湯治療老年期血管性癡呆的實驗研究[J].中藥藥理與臨床，2000，16（4）：6-8.

（收稿日期：2014-02-08 本文編輯：郭靜娟）

3 討論

抵當(dāng)湯是醫(yī)圣張仲景創(chuàng)立的理血名方，由水蛭、虻蟲、桃仁、大黃四味藥物組成，主治下焦蓄血證?！秱摗酚涊d“太陽病六七日，表證猶存，脈微而沉，反不結(jié)胸，其人發(fā)狂者，以熱在下焦，少腹當(dāng)硬滿，小便自利者，下血乃愈，所以然者，以太陽隨經(jīng)，瘀熱在里故也，抵當(dāng)湯主之?！薄疤柌?，身黃，脈沉結(jié)，少腹硬，小便不利者，為無血也，小便自利，其人如狂，血證諦也，抵當(dāng)湯主之?！北痉疆?dāng)時是為下焦蓄血所設(shè)，但后世醫(yī)家大大拓寬了它的應(yīng)用范圍，目前已應(yīng)用于阿爾茨海默病、高血壓腦出血、外傷性腦梗死、頑固性失眠、腫瘤、慢性前列腺炎、糖尿尿病腎病、腎靜脈血栓形成等幾十種疾病。我們近年來受本方主治中“喜忘”“如狂”等癥狀的啟示，認為瘀血內(nèi)阻是阿爾茨海默病的重要病機[6-7]，采用抵當(dāng)湯治療阿爾茨海默病，收效滿意。有研究報道[3]，本方治療阿爾茨海默病總有效率達80.0%，明顯優(yōu)于西藥對照組的70.0%（P<0.01）；且治療組MMSE評分、ADAS-cog評分改善情況均明顯優(yōu)于對照組（P<0.05）。

現(xiàn)代藥理研究表明抵當(dāng)湯能通過改善模型大鼠的血液流體力學(xué)狀態(tài)和血液“凝”的病理狀態(tài)，下調(diào)內(nèi)皮素mRNA，提高體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)化率等達到抗衰老的作用[8]。溫曉輝等[9]認為抵當(dāng)湯通過調(diào)節(jié)血脂，減少細胞黏附分子的生成，以發(fā)揮保護內(nèi)皮功能的作用，從而能防治動脈粥樣硬化的形成，減少各種心腦血管疾病的發(fā)生。本研究表明抵當(dāng)湯可以顯著改善阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，縮短Morris水迷宮實驗逃避潛伏期，增加跨臺次數(shù)，作用優(yōu)于對照藥多奈哌齊，研究結(jié)果與文獻報道吻合[10]。其作用機制尚有待進一步深入研究，有學(xué)者認為可能與本方具有抗氧化、清除氧化代產(chǎn)物、改善血液流變學(xué)和增加腦血流量等作用有關(guān)[10]。

[參考文獻]

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[4] 蔡高梅，畢建忠.TRAIL在Aβ25-35誘導(dǎo)的大鼠海馬組織中的表達[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2008，25（10）：1856-1858.

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[8] 施雪音.抵當(dāng)湯與桃核承氣湯抗衰老作用比較的實驗研究[D].杭州：浙江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[9] 溫曉輝，潘麗，王鑫國，等.抵當(dāng)湯對去卵巢大鼠血脂異常及ET-1mRNA，VCAM-1mRNA表達的影響[J].河北中醫(yī)，2010，32（5）：751.

[10] 夏衛(wèi)軍，金妙文，張莉.抵當(dāng)湯治療老年期血管性癡呆的實驗研究[J].中藥藥理與臨床，2000，16（4）：6-8.

（收稿日期：2014-02-08 本文編輯：郭靜娟）

3 討論

抵當(dāng)湯是醫(yī)圣張仲景創(chuàng)立的理血名方，由水蛭、虻蟲、桃仁、大黃四味藥物組成，主治下焦蓄血證。《傷寒論》記載“太陽病六七日，表證猶存，脈微而沉，反不結(jié)胸，其人發(fā)狂者，以熱在下焦，少腹當(dāng)硬滿，小便自利者，下血乃愈，所以然者，以太陽隨經(jīng)，瘀熱在里故也，抵當(dāng)湯主之?！薄疤柌?，身黃，脈沉結(jié)，少腹硬，小便不利者，為無血也，小便自利，其人如狂，血證諦也，抵當(dāng)湯主之?！北痉疆?dāng)時是為下焦蓄血所設(shè)，但后世醫(yī)家大大拓寬了它的應(yīng)用范圍，目前已應(yīng)用于阿爾茨海默病、高血壓腦出血、外傷性腦梗死、頑固性失眠、腫瘤、慢性前列腺炎、糖尿尿病腎病、腎靜脈血栓形成等幾十種疾病。我們近年來受本方主治中“喜忘”“如狂”等癥狀的啟示，認為瘀血內(nèi)阻是阿爾茨海默病的重要病機[6-7]，采用抵當(dāng)湯治療阿爾茨海默病，收效滿意。有研究報道[3]，本方治療阿爾茨海默病總有效率達80.0%，明顯優(yōu)于西藥對照組的70.0%（P<0.01）；且治療組MMSE評分、ADAS-cog評分改善情況均明顯優(yōu)于對照組（P<0.05）。

現(xiàn)代藥理研究表明抵當(dāng)湯能通過改善模型大鼠的血液流體力學(xué)狀態(tài)和血液“凝”的病理狀態(tài)，下調(diào)內(nèi)皮素mRNA，提高體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)化率等達到抗衰老的作用[8]。溫曉輝等[9]認為抵當(dāng)湯通過調(diào)節(jié)血脂，減少細胞黏附分子的生成，以發(fā)揮保護內(nèi)皮功能的作用，從而能防治動脈粥樣硬化的形成，減少各種心腦血管疾病的發(fā)生。本研究表明抵當(dāng)湯可以顯著改善阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，縮短Morris水迷宮實驗逃避潛伏期，增加跨臺次數(shù)，作用優(yōu)于對照藥多奈哌齊，研究結(jié)果與文獻報道吻合[10]。其作用機制尚有待進一步深入研究，有學(xué)者認為可能與本方具有抗氧化、清除氧化代產(chǎn)物、改善血液流變學(xué)和增加腦血流量等作用有關(guān)[10]。

[參考文獻]

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[3] 王康鋒，張立娟.抵當(dāng)湯加減治療老年性癡呆療效觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（10）：74-75.

[4] 蔡高梅，畢建忠.TRAIL在Aβ25-35誘導(dǎo)的大鼠海馬組織中的表達[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2008，25（10）：1856-1858.

[5] 呂誠，胡小令，祝高春，等.β-淀粉樣蛋白所致模擬老年性癡呆動物模型的建立[J].江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，45（1）：28，39.

[6] 王康鋒.老年性癡呆病機及治法探討[J].中國民間療法，2011，19（10）：8-9.

[7] 王康鋒.中醫(yī)治療老年性癡呆的思路與方法[J].河南中醫(yī)，2011，31（12）：1350-1351.

[8] 施雪音.抵當(dāng)湯與桃核承氣湯抗衰老作用比較的實驗研究[D].杭州：浙江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[9] 溫曉輝，潘麗，王鑫國，等.抵當(dāng)湯對去卵巢大鼠血脂異常及ET-1mRNA，VCAM-1mRNA表達的影響[J].河北中醫(yī)，2010，32（5）：751.

[10] 夏衛(wèi)軍，金妙文，張莉.抵當(dāng)湯治療老年期血管性癡呆的實驗研究[J].中藥藥理與臨床，2000，16（4）：6-8.

（收稿日期：2014-02-08 本文編輯：郭靜娟）