郭艷紅，袁 煒，童來寶，李 浩，陸 珂，金亞美，林矯矯，劉一平，劉金明

（1. 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點實驗室，上海 200241；2. 安徽省望江縣動物疫病預防控制中心，望江 246200；3，安徽省動物疫病預防控制中心，合肥 230000）

·研究論文·

望江縣長江江灘放牧牛蠕蟲感染狀況調查

郭艷紅1，袁 煒1，童來寶2，李 浩1，陸 珂1，金亞美1，林矯矯1，劉一平3，劉金明1

（1. 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點實驗室，上海 200241；2. 安徽省望江縣動物疫病預防控制中心，望江 246200；3，安徽省動物疫病預防控制中心，合肥 230000）

為了解安徽省望江縣江灘放牧牛寄生蠕蟲的感染情況，本研究采用飽和鹽水漂浮法、沉淀法、貝爾曼法對此地區(qū)的115頭放牧牛的新鮮糞便進行檢查，同時對蟲種感染率以及不同品種、性別、年齡牛感染率進行了統(tǒng)計分析。調查結果顯示，當?shù)胤拍僚８腥镜娜湎x有夏伯特線蟲、捻轉血矛線蟲、奧斯特線蟲、肝片吸蟲以及肺線蟲，總感染率達到90.4%（104/115）。其中捻轉血矛線蟲為感染優(yōu)勢蟲種，感染率達70.4%；捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲在雄牛和雌牛中感染率的差異具有顯著性統(tǒng)計學意義。調查結果對長江流域江灘放牧牛蠕蟲病防治工作以及了解蠕蟲與宿主的相互關系具有一定參考意義。

牛；蠕蟲；調查；感染率；蟲卵計數(shù)

家畜蠕蟲病一直以來都是危害畜牧業(yè)的重要隱患，也因此制約著農(nóng)村的經(jīng)濟發(fā)展。家畜蠕蟲病通常呈慢性消耗性危害，感染畜類出現(xiàn)生長緩慢、形體消瘦、功能障礙，對畜牧業(yè)造成其他疾病無法比擬的巨大損失[1]。對家畜蠕蟲病防治主要采取以藥物驅蟲為主的綜合措施，掌握家畜蠕蟲病的病原及感染規(guī)律是選擇藥物、制定驅蟲方案的關鍵。國內多個地方開展了牛蠕蟲病病原學區(qū)系調查和防治研究[2,3]，以畜牧業(yè)較發(fā)達的北方居多。我國南方氣候溫暖濕潤，牧草豐富，家畜飼養(yǎng)量大。雖然南方個別地區(qū)也開展了放牧牛消化道線蟲及吸蟲病調查研究[4,5]，但放牧家畜蠕蟲病的危害并未引起足夠重視。對安徽省望江縣長江江灘放牧牛蠕蟲感染狀況進行調查，旨在明確類似地區(qū)放牧牛優(yōu)勢蟲種及其感染情況，以便結合當?shù)氐牡乩?、氣候等因素制定合理可行的驅蟲方案及防控措施。

1 材料與方法

1.1 調查地點及當?shù)氐牡乩怼夂?、自然狀況望江縣位于安徽省西南，長江中下游北岸，皖、贛、鄂三省交界處，地理坐標介于東徑115°34′～116°55′、北緯30°03′～30°26′之間。本次調查地點為長江沿岸的漳湖鎮(zhèn)六合村和雷池鄉(xiāng)溝口村與東洲村，其年降雨量在1312 mm左右，平均氣溫16.83℃。當?shù)仫曫B(yǎng)的牛包括黃牛和水牛，以肉牛為主，且以專業(yè)戶養(yǎng)殖為主。牛羊大多在長江沿岸江灘放牧，每年除開展血吸蟲病防治工作外，未采取其他蠕蟲病防控措施。

1.2 糞樣采集由當?shù)孬F醫(yī)人員采集。在采集前1 d通知畜主，將待查牛固定，于d 2在牛周圍采集新鮮糞便，編號，同時記錄每份糞樣對應牛的品種、性別、年齡等資料。

1.3 檢查方法

1.3.1 飽和食鹽水漂浮法 稱取5 g新鮮糞樣于小燒杯中， 加30 mL飽和食鹽水，用竹筷攪拌混勻直到無塊狀物，60目銅篩過濾。以20 mL飽和食鹽水沖洗銅篩，濾液收集于50 mL離心管，繼續(xù)添加飽和食鹽水直到液面稍高于管口，將蓋玻片蓋于液面，靜置30 min，小心平拿蓋玻片覆在載玻片上，置于顯微鏡下鏡檢。每份糞樣重復覆蓋2次蓋玻片，分別鏡檢。

根據(jù)文獻[6-9]描述的蟲卵形態(tài)特征進行種類鑒定，分別計數(shù)。

1.3.2 沉淀法 將上述飽和食鹽水漂浮法中上層線蟲蟲卵計數(shù)之后，小心倒掉部分上層液體直到離心管里剩余9 mL左右的液體，加水，定容至10 mL，攪拌重懸沉淀至均勻，吸取100 μL于載玻片上，鏡檢。根據(jù)文獻[6-9]描述的蟲卵形態(tài)特征進行種類鑒定，計數(shù)。每份樣本平行計數(shù)2次。

1.3.3 貝爾曼漏斗法 在玻璃漏斗（直徑10～15 cm）下面連接一段3～5 cm的橡皮管，橡皮管上裝一小玻璃管。將玻璃漏斗置于漏斗架上。稱取7 g糞便，用兩層紗布包好，放入漏斗中，加水溫約為40℃的清水至浸沒紗布，靜置1 h。小心拔下橡皮管連著的玻璃管，用吸管吸去上清液，再吸取管底沉淀物于載玻片上，鏡檢計數(shù)。此法主要用于診斷牛（羊）的肺線蟲病（網(wǎng)尾線蟲病、幼圓線蟲病和繆勒線蟲病等）。

1.4 幼蟲培養(yǎng)平皿中墊上一層濕潤的吸水紙，取新鮮糞便若干，弄碎揉成半球形（若糞便較干可加適量水）置于平皿中央，頂部壓平且略高出平皿口，加蓋確保糞便與培養(yǎng)皿蓋接觸。在25℃～30℃的室溫環(huán)境下培養(yǎng)10 d。每天觀察糞便是否干燥，根據(jù)情況可適量灑水以確保吸水紙的潮濕度。10 d后，通過貝爾曼漏斗法分離幼蟲，顯微鏡下觀察，根據(jù)文獻[6-9]描述的三期幼蟲形態(tài)特征進行種鑒定，驗證蟲卵計數(shù)結果。

1.5 統(tǒng)計分析利用SAS 9.2對不同品種、性別、年齡之間的差異性進行卡方檢驗，P＜0.05表示差異具有顯著統(tǒng)計學意義，P＜0.01表示差異具有極顯著統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 感染率和感染度本次調查共采集到115頭放牧牛的新鮮糞便，分別來自9位專業(yè)養(yǎng)殖戶。通過飽和鹽水漂浮法、沉淀法和貝爾曼漏斗法對115頭放牧牛糞樣進行檢測，檢測到當?shù)嘏４嬖谀磙D血矛線蟲（Haemonchus contortus）、夏伯特線蟲（Chabert sp.）、奧斯特線蟲（Ostertagia sp.）、肺線蟲（Pulmonary nematode）（有大型肺線蟲和小型肺線蟲兩類）、片形吸蟲（Fasciola sp.）（肝片吸蟲或大片吸蟲）等寄生蠕蟲感染，觀察到的蟲卵和幼蟲形態(tài)見圖1，總感染率為90.4%。其中線蟲總感染率為83.5%、吸蟲總感染率為31.3%，各類蠕蟲感染率和感染度見表1。在檢測到的各類蠕蟲中，捻轉血矛線蟲感染率最高，達70.4%，顯著高于其他蠕蟲的感染率（夏伯特線蟲58.3%，奧斯特線蟲35.7%，肺線蟲36.5%）。各種類蠕蟲感染度均較低，處于亞臨床狀態(tài)，其中片形吸蟲感染度相對較高，平均每克糞便蟲卵數(shù)為（28.75±55.7）個，其次為捻轉血矛線蟲，平均每克糞便蟲卵數(shù)為（4.60±7.36）個。大多數(shù)牛都處于混合感染，在104頭陽性牛中，75頭（72.11%）為混合感染，只有29頭（27.89%）只感染1種寄生蠕蟲。

圖1 蟲卵和幼蟲的顯微形態(tài)Fig.1 Micro-morphology of eggs, fi rst-stage larva and third-stage larva

1a: 夏伯特線蟲蟲卵; 1b: 捻轉血矛線蟲蟲卵；2: 奧斯特線蟲蟲卵；3: 片形吸蟲蟲卵；4: 肺線蟲幼蟲；5c: 奧斯特線蟲的第三期幼蟲; 5d: 夏伯特線蟲的第三期幼蟲；6: 捻轉血矛線蟲的第三期幼蟲

1a: Egg of Chabert sp.; 1b: Egg of Haemonchus contortus; 2: Egg of Ostertagia sp.; 3: Egg of Fasciola sp.; 4: Larva of Pulmonary nematode; 5c: The third-stage larva of Ostertagia sp.; 5d: The third-stage larva of Chabert sp.; 6: The third-stage larva of Haemonchus contortus

2.2 不同品種、性別、年齡牛感染狀況的比較在采集的115頭牛糞樣品中，有100頭牛的品種、年齡、性別等相關資料相對齊全。不同品種、性別、年齡牛寄生蟲感染情況見表2。

黃牛和水牛比較，黃牛捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲、肺線蟲、片形吸蟲的感染率均高于水牛，但差異無顯著性統(tǒng)計學意義。除奧斯特線蟲外，黃牛其他寄生蟲的感染度也高于水牛，但差異無顯著性統(tǒng)計學意義。水?？偟母腥韭矢哂邳S牛，但黃?；旌细腥颈人乐?，黃牛同時感染3種以上寄生蟲蠕蟲的有20份，占62.5%。

共有87份糞樣標明了來源牛性別。雄牛和雌?？偢腥韭氏嘟?，分別為95.0%和87.2%。但雄牛的捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲、肺線蟲感染率高于雌牛，其中捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲在雄牛和雌牛中的感染率差異具有顯著性統(tǒng)計學意義。片形吸蟲感染率則是雌牛高于雄牛，但差異不顯著。而雄牛夏伯特線蟲、捻轉血矛線蟲、奧斯特線蟲的感染度均高于雌牛，雌牛片形吸蟲的感染度高于雄牛，但感染度差異均不具有顯著統(tǒng)計學意義。

按年齡大小，將被調查對象分為≤2歲和＞2歲兩組，共有88頭牛用于統(tǒng)計分析，結果顯示，兩個年齡段都有蠕蟲感染，2歲以下牛捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲的感染率高于2歲以上牛；2歲以上牛片形吸蟲感染率高于2歲以下牛，但均無顯著統(tǒng)計學意義；肺線蟲感染率在兩組牛中相似。從感染度來看，2歲以下牛奧爾特線蟲、夏伯特線蟲及片形吸蟲的感染度高于2歲以上牛，而2歲以下牛的捻轉血矛線蟲與肺線蟲感染度則較低。

2.3 三期幼蟲鑒定結果為了進一步確證感染線蟲的種類，選擇20份陽性糞樣進行幼蟲培養(yǎng)，顯微鏡下觀察三期幼蟲的形態(tài)。結果僅發(fā)現(xiàn)捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲的幼蟲（圖1）。

3 討論

雖然我國各地陸續(xù)開展了牛羊蠕蟲病流行狀況及蠕蟲病病原的區(qū)系調查，但我國幅員遼闊，家畜感染的蠕蟲種類多，各地自然、社會條件差異大，仍有必要開展相應的流行病學調查，以因地制宜地制定防控策略。目前關于牛羊寄生蠕蟲感染狀況調查的報道，大多在東北、西北如山西省、青海省、西藏自治區(qū)等地[6,7]，南方如貴州省、云南省、湖南省等地也有報道[8,9]。安徽省望江縣長江流域江灘放牧牛的寄生蠕蟲調查報道幾乎沒有。

本研究對安徽省望江縣長江洲灘115頭放牧牛蠕蟲感染狀況進行了調查，其總感染率達90.4%，表明該類地區(qū)放牧牛蠕蟲感染狀況嚴重，須引起足夠重視。感染蟲種有捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲、肺線蟲（有大型肺線蟲和小型肺線蟲兩類）、片形吸蟲（肝片吸蟲或大片吸蟲）等，線蟲感染率為83.5%，片形吸蟲感染率為31.3%，這些調查數(shù)據(jù)為類似地區(qū)開展防治工作提供了參考。

本次調查還對不同品種、年齡、性別牛感染率進行了統(tǒng)計學分析。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)雄牛的捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲、肺線蟲感染率高于雌牛，其中捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲在雄牛和雌

牛中的感染率差異具有顯著性統(tǒng)計學意義。根據(jù)所查文獻，線蟲感染的宿主性別差異迄今未見報道。這種性別差異是否廣泛存在以及差異產(chǎn)生的原因還需要大量調查研究方能確定。同時，2歲以下小牛消化道線蟲捻轉血矛線蟲、夏伯特線蟲、奧斯特線蟲的感染率高于2歲以上牛，雖然因樣本量較小而沒有顯著差異，但考慮到動物感染這些線蟲后大多具有自愈現(xiàn)象，成年牛在前期感染線蟲后可能具有一定抵抗力，推測這種年齡差異性可能具有普遍性。謝擁軍等[10]報道不同年齡的耕牛肝片吸蟲感染率差異具有顯著統(tǒng)計學意義；顧有方等[11]報道水牛的感染率亦與年齡有明顯相關，晏文梅等[12]在南京市調查發(fā)現(xiàn)片形吸蟲感染率隨年齡增加而增加，但其中差異沒有顯著統(tǒng)計學意義。我們的調查發(fā)現(xiàn)片形吸蟲感染率為2歲以上牛高于2歲以下牛，差異也沒有顯著統(tǒng)計學意義。這些統(tǒng)計結果對深入了解上述蠕蟲與宿主的相互關系具有一定參考意義。

?

望江縣屬于血吸蟲病疫區(qū)，但本次調查未發(fā)現(xiàn)血吸蟲蟲卵，原因可能如下：一是血吸蟲病是當?shù)刂攸c防控疾病，且該調查點是本所公益性項目家畜血吸蟲病防控示范點，連續(xù)幾年開展了“一查兩治”（吡喹酮治療）的防控措施，家畜血吸蟲病已得到有效控制；二是本次調查采用的是糞便蟲卵計數(shù)法，其敏感性可能低于糞便蟲卵孵化法。

本次調查明確了當?shù)嘏８腥镜膬?yōu)勢蟲種為捻轉血矛線蟲，同時，片形吸蟲的感染也不容樂觀，感染率達31.3%。由于片形吸蟲屬于人畜共患寄生蟲，其防控也須受到足夠重視。建議當?shù)孬F醫(yī)部門在繼續(xù)開展家畜血吸蟲病防控的同時，選用線蟲病治療藥物和片形吸蟲治療藥物進行驅蟲。

[1] 張秀萍, 陳宏偉. 新疆阿克蘇地區(qū)羊消化道寄生蟲感染情況調查[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學, 2011, 39(4): 250-252.

[2] 朱美樂, 王仲兵, 王鳳龍, 等. 山西黃土高原地區(qū)牛寄生蟲感染情況調查[J].中國獸醫(yī)雜志, 2010, 46(8): 52-53.

[3] 陳少博, 布和巴特爾, 其其格, 等. 內蒙古鑲黃旗地區(qū)牛寄生蟲病調查報告[J]. 中國牛業(yè)科學, 2012, 38(6): 77-80.

[4] 王冬英, 張為宇, 黃維義. 廣西牛片形吸蟲流行情況調查[J]. 廣西畜牧獸醫(yī), 2006, 22(5): 200-202.

[5] 王京仁, 李淑紅, 曹姍妹. 常德地區(qū)濱湖水牛消化道內寄生蟲區(qū)系調查及其防治[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學, 2006, 34(23): 6210-6211.

[6] 邵士元, 王英, 石文輝. 化隆縣牛羊寄生蟲區(qū)系調查[J].中國動物檢疫, 2012, 9(2): 49-51.

[7] 文藝. 甘南高寒牧區(qū)牛羊胃腸道線蟲病調查與防治[J].畜牧獸醫(yī)雜志, 2009, 28(2): 59-61.

[8] 彭忠飛, 張云貴, 白文順, 等. 紅河州散養(yǎng)奶牛糞樣寄生蟲調查[J]. 養(yǎng)殖與飼料, 2013, (5): 33-34.

[9] 袁大龍, 劉麗, 嚴枝彪, 等. 凱里市耕牛寄生蟲調查與驅蟲效益觀察[J]. 中國獸醫(yī)寄生蟲病, 2003, 11(4): 31.

[10] 謝擁軍, 劉偉, 陽建輝, 等. 湖南岳陽市耕牛肝片吸蟲感染情況調查[J].中國獸醫(yī)寄生蟲病, 2005, (3): 31.

[11] 顧有方, 沈永林, 毛鑫智, 等. 蘇皖水牛肝片吸蟲和前后盤吸蟲感染情況的調查[J].中國獸醫(yī)雜志, 2000, 26(10): 5-7.

[12] 晏文梅, 金蘭梅. 南京地區(qū)奶牛肝片吸蟲和前后盤吸蟲感染初報[J]. 金陵科技學院學報, 2007, 23(3): 107-109.

INVESTIGATION INTO HELMINTH INFECTION IN CATTLE ON THE BEACH OF YANGTZE RIVER IN WANGJIANG COUNTY

GUO Yan-hong1, YUAN Wei1, TONG Lai-bao2, LI Hao1, LU Ke1, JIN Ya-mei1, LIN Jiao-jiao1, LIU Yi-ping3, LIU Jin-ming1
(1. Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China; 2. Wangjiang Animal Disease Control Center, Anhui Province, Wangjiang 246200, China: 3.Anhui Animal Disease Control Center, Hefei 230000, China)

The prevalence of helminth infection was investigated in cattle on the beach of Yangtze River in Wangjiang county, Anhui Province. A total of 115 fresh fecal samples from yellow cattle and buffalos were examined using saturated salt solution flotation, precipitation and Baermann method, respectively. The prevalence of worm species in different hosts, genders and ages were compared. The results showed that 104 out of 115 (90.4%) cattle were infected with Chabert sp., Haemonchus contortus, Ostertagia sp., Fasciola sp. and Pulmonary nematode. The dominant parasite was H. contortus with a prevalence of 70.4%. The prevalences of H. contortus and Chabert sp. were 82.5% and 70.0% in male cattle, which were signifi cantly higher than that (51.1% and 36.2%) in females. The results of this investigation provided a basis for control of helminth infection in cattle on the beach of Yangtze River and better understanding of the parasite-host relationship of H. contortus and Chabert sp.

Cattle; helminth; investigation; prevalence; egg count

S858.232.73

：A

1674-6422（2014）04-0050-06

2014-01-22

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項經(jīng)費資助（201303037）

郭艷紅，女，碩士研究生，預防獸醫(yī)學專業(yè)

劉金明，E-mail：jimyliu@shvri.ac.cn