林世莊 蘇湘川 葉挺挺 朱海元 章承中 顏美秋

不同期別梅毒患者外周血CD4+T細(xì)胞表面趨化因子受體的研究

林世莊 蘇湘川 葉挺挺 朱海元 章承中 顏美秋

目的 研究不同期別梅毒患者趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，探討梅毒患者免疫功能的變化。方法 檢測不同期別梅毒患者外周血趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，以健康體檢者作為正常對照組。結(jié)果 二、三期梅毒患者與正常對照組及一期梅毒患者比較，外周血CCR3水平增高，CCR5水平降低（P＜0．05或0．01）；三期梅毒患者與二期患者比較，外周血CCR3水平增高（P＜0．05）；二、三期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR3水平降低（P＜0．05）；二期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR5水平升高（P＜0．05）。結(jié)論 趨化因子受體在梅毒的發(fā)病和發(fā)展中可能起著重要作用。

梅毒 趨化因子受體 免疫功能

梅毒是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病，全世界每年新增約1 200萬新病例[1]，在我國發(fā)病率居傳染性疾病的第4位，僅次于病毒性肝炎、肺結(jié)核、甲型H1N1流感。梅毒復(fù)發(fā)及病情發(fā)展給患者帶來了極大的痛苦，并造成了公共衛(wèi)生資源的極大浪費(fèi)，因此及早徹底治愈梅毒，減少復(fù)發(fā)，有著極其重大的意義。近年研究發(fā)現(xiàn)梅毒患者的復(fù)發(fā)及病情發(fā)展與機(jī)體的免疫系統(tǒng)有著很大關(guān)系[2]。本研究通過檢測不同期別梅毒患者外周血趨化因子受體水平，旨在進(jìn)一步研究免疫系統(tǒng)對梅毒病情發(fā)展的影響，以便及時根除梅毒螺旋體，及早治愈梅毒患者，避免向晚期梅毒發(fā)展或病情復(fù)發(fā)，減少梅毒對患者造成的身體和精神損害。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2011-05—2013-10一期梅毒、二期梅毒患者各30例和三期梅毒患者20例，分別來自于溫嶺市第一人民醫(yī)院皮膚性病科（48例）及臺州市立醫(yī)院皮膚性病科門診（32例）。其中一期梅毒患者男17例，女13例，年齡19～62歲，平均（30.5±3.9）歲；二期梅毒患者男16例，女14例，年齡20～61歲，平均（32.2±4.1）歲；三期梅毒患者男12例，女8例，年齡19～60歲，平均（33.8±4.9）歲。所有患者血清反應(yīng)素試驗(yàn)、梅毒螺旋體特異性抗體均陽性，HIV抗體均陰性。均應(yīng)用芐星青霉素規(guī)范驅(qū)梅治療1個療程，治療結(jié)束后3個月復(fù)查，其中一期梅毒患者血清反應(yīng)素試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰13例，二期梅毒患者血清反應(yīng)素試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰11例，三期梅毒患者血清反應(yīng)素試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰5例。正常對照組為30例健康體檢者，男15例，女15例，年齡18～60歲，平均（32.2±4.7）歲。各期梅毒患者及正常對照組之間性別、年齡比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。所有受試者就診前均未合并感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病及肝、腎、造血系統(tǒng)疾病和內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等嚴(yán)重原發(fā)性疾病，半年內(nèi)未系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及免疫調(diào)節(jié)劑。

1.2 試劑與儀器 FITC標(biāo)記的CD4單抗以及相應(yīng)同型對照抗體、PE標(biāo)記的CCR3單抗、CCR5單抗及相應(yīng)的同型對照PE-IgG、PE-IgG2A購于美國eBioscience公司；APC標(biāo)記的CXCR4、CXCR3單抗以及其同型對照APC-IgG2A購于美國Abcam公司；流式細(xì)胞儀為美國BD公司產(chǎn)品。

1.3 檢測方法 采用流式細(xì)胞儀雙標(biāo)法檢測外周血CD4+T細(xì)胞表面CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3的表達(dá)。所有受試者均空腹抽取外周血5ml，抗凝備用。分別取用A、B、C、D、E 5個離心管，其中A管作為陰性對照，B管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+PE-CCR3單抗（0.5μg），C管加入 FITC-CD4單抗（0.5μg）+PE-CCR5單抗（0.5μg），D管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+APC-CXCR4單抗（0.5μg），E管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+ APC-CXCR3單抗（0.5μg）。各管分別加入100μl的新鮮抗凝全血，混勻，經(jīng)避光孵育、裂解、離心后，各管再加入1.00%多聚甲醛溶液150μl固定，上機(jī)檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，多組間比較方差齊者采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者采用T a m h a n e檢驗(yàn)。患者治療前后比較采用配對t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各期梅毒患者及正常對照組間趨化因子受體表達(dá)水平比較 二、三期梅毒患者與正常對照組比較，外周血CCR3水平增高，CCR5水平降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05或0.01）；二、三期梅毒患者與一期梅毒患者比較，外周血CCR3水平增高，CCR5水平降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05或0.01）；三期梅毒患者與二期患者比較，外周血CCR3水平增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見表1。

表1 各組受試者趨化因子受體表達(dá)水平比較（%）

2.2 各期梅毒患者治療前后趨化因子受體表達(dá)水平比較 二、三期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR3水平降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0.05）；二期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR5水平升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見表2。

表2 各組患者治療前后趨化因子受體表達(dá)水平比較（%）

3 討論

趨化因子是一類在淋巴細(xì)胞募集過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)超家族，其受體是一類與G蛋白相偶聯(lián)、介導(dǎo)趨化因子行使功能的受體，它的表達(dá)是趨化因子發(fā)揮作用的一個重要決定因素。趨化因子及其受體能精確地調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，免疫系統(tǒng)中免疫活性細(xì)胞的動態(tài)分布、各類細(xì)胞的分化、發(fā)育及活化都受到趨化因子受體的影響和調(diào)控，在機(jī)體生理發(fā)育及疾病的病理過程中均起著重要作用。趨化因子受體在分化的Th亞群Th1/Th2上表達(dá)不同，在趨化T細(xì)胞的同時，還能直接或間接影響T細(xì)胞分化為Th1和Th2。趨化因子受體的類型和表達(dá)量的差異是調(diào)節(jié)Th1/Th2活化和極化狀態(tài)的重要因素。蔡川川等[3]研究發(fā)現(xiàn)潛伏梅毒患者及其感染性伴均出現(xiàn)IL-12水平降低和Th1/Th2偏移現(xiàn)象，Th1/Th2偏移現(xiàn)象加速了梅毒螺旋體的增殖，并促進(jìn)疾病向潛伏階段發(fā)展。梅毒患者早期以Th1型細(xì)胞因子為主，Th1型免疫反應(yīng)占優(yōu)勢[4]，隨著病程延長其表達(dá)逐漸降低，Th2型免疫反應(yīng)被激活，抑制Th1型免疫反應(yīng)[5]。其他研究也表明，梅毒患者細(xì)胞免疫功能可能與淋巴細(xì)胞過度凋亡和Th細(xì)胞亞群分化失調(diào)，Th1向Th2方向偏移有關(guān)，患者的細(xì)胞免疫功能受到抑制[6]。本研究發(fā)現(xiàn)二、三期梅毒患者CCR5有不同程度的降低，CCR3有不同程度的升高，而其中以三期梅毒患者的改變更明顯。CCR5、CXCR3主要表達(dá)在Th1細(xì)胞上，CCR3主要表達(dá)在Th2細(xì)胞上[7]，進(jìn)一步證實(shí)隨著梅毒病程的進(jìn)展，Th2型免疫反應(yīng)被激活，Th1型免疫反應(yīng)受抑制。本研究還發(fā)現(xiàn)二、三期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR3、CCR5水平有一定的恢復(fù)，二期梅毒患者接近正常對照組平均水平，說明二期梅毒患者經(jīng)過規(guī)范驅(qū)梅治療，免疫功能有一定的恢復(fù)，這與賈月琴等[8]研究結(jié)果一致，進(jìn)一步說明趨化因子受體在梅毒的發(fā)病和發(fā)展中可能起著重要作用。

患者的細(xì)胞免疫狀態(tài)在梅毒的發(fā)病中起著重要的作用，細(xì)胞免疫功能低下不僅可增加感染梅毒螺旋體的機(jī)會，而且影響病情的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸[9]。Th1/Th2細(xì)胞免疫反應(yīng)在生理狀況下保持動態(tài)平衡，機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫也保持著相對穩(wěn)定的關(guān)系。當(dāng)平衡狀態(tài)被打破，兩類細(xì)胞因子失去相互間的控制作用，機(jī)體則處于Th1型或Th2型免疫反應(yīng)占優(yōu)勢的Th1/Th2偏移狀態(tài)。三期梅毒患者與二期患者比較，CCR3增高更明顯，CCR5降低更明顯，說明Th1/Th2偏移現(xiàn)象更嚴(yán)重，平衡狀態(tài)進(jìn)一步被破壞，更不利于疾病的恢復(fù)。Th1/Th2偏移現(xiàn)象加速了梅毒螺旋體的增殖并促進(jìn)疾病向潛伏階段發(fā)展，這與感染進(jìn)入慢性階段有一定的關(guān)系，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。所以筆者認(rèn)為趨化因子受體CCR3、CCR5在梅毒患者清除體內(nèi)梅毒螺旋體的免疫反應(yīng)中可能起著重要作用。Podwinska等[10]指出，只有當(dāng)患者機(jī)體免疫系統(tǒng)功能正常時，與抗生素聯(lián)合應(yīng)用才能徹底治愈梅毒患者。很多學(xué)者認(rèn)為對梅毒患者的治療，臨床上除常規(guī)采用抗生素驅(qū)梅治療外，可配合免疫調(diào)節(jié)劑，以增強(qiáng)和調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，特別是細(xì)胞免疫功能，以便提高療效，減少梅毒復(fù)發(fā)。

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Expression of chemokine receptors in peripheral CD4+T lymphocytes in patients with various stages of syphilis

Objective To investigate the expression of chemokine receptors CCR3,CCR5,CXCR4,CXCR3 in peripheral CD4+T-lymphocytes of patients with various stages of syphilis．Methods The chemokine receptors CCR3,CCR5,CXCR4,CXCR3 were detected by double-label flow cytometry in 30 patients with stage I syphilis,30 patients with stage II syphilis,20 patients with stage III syphilis and 30 healthy controls．Results The expression of CCR3 on CD4+T cells was increased and CCR5 was declined in peripheral blood of patients with stage II and III syphilis in comparison to those of healthy controls and patients with stage I syphilis(P＜0．05 or 0．01)．The expression of CCR3 was higher in patients with stage III syphilis than that in stage II syphilis(P＜0．05)．The expression of CCR3 in patients with stage II and III syphilis was declined after treatment compared to pre-treatment level(P＜0．05)．The expression of CCR5 in patients with stage II syphilis was increased after treatment compared to pre-treatment level(P＜0．05)．Conclusion The chemokine receptors CCR3,CCR5 may be involved in the onset and development of syphilis．

Syphilis Chemokine receptorImmune function

2014-07-11）

（本文編輯：胥昀）

溫嶺市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012WLCA0071）

317500 臺州，溫嶺市第一人民醫(yī)院皮膚性病科（林世莊、葉挺挺、朱海元、章承中、顏美秋）；臺州市立醫(yī)院皮膚性病科（蘇湘川）