畢鐵強，周 軍，梁文學，劉 毅，李淑琴，高希濤，沈 俊，王培順

全球每年約120萬婦女患乳腺癌，50萬左右死于乳腺癌。北美、西歐乳腺癌發(fā)病率占女性腫瘤首位，我國乳腺癌發(fā)病率逐年上升，沿海大城市的發(fā)病率較內(nèi)陸地區(qū)為高，已成為城市女性的“第一殺手”。大部分乳腺癌患者在就診時已非早期，手術后輔以化放療，治療效果欠佳。腫瘤的侵襲、轉移是影響乳腺癌患者術后生存的主要因素。因此，尋找對乳腺癌浸潤、轉移有價值的檢測指標，將有助于乳腺癌患者的預后評估，從而及時采取進一步治療措施，提高患者的無病生存率和總生存率。

煙酰胺磷酸核糖基轉移酶(Nampt)是細胞內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物合成的限速酶，具有多種生物效應。在煙酸胺合成NAD的過程中，Nampt催化5-磷酸核糖基-1-焦磷酸鹽(PRPP)轉移磷酸核糖基團給煙酸胺形成煙酰胺單核苷酸 (NMN)和焦磷酸鹽(PPi)。然后NMN再通過煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉移酶(Nmnat)催化生成NAD[1](圖1)。

圖1 煙酰胺(nicotinamide)生物合成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)

Nampt是一種具有多種功能的蛋白質，目前對其多種生物學功能，特別是在腫瘤發(fā)生發(fā)展、抗凋亡機制等方面的研究尚處于起步階段[2]。2007年，Yang等[3]在《Cell》上發(fā)表的一篇著重于研究營養(yǎng)影響線粒體NAD水平與細胞生存關系的論文中，用甲磺酸甲脂(一種DNA烷化劑)和依托泊甙(拓撲異構酶Ⅱ抑制劑)分別處理Nampt高表達的和Nampt敲除的纖維肉瘤細胞以及胚腎細胞，發(fā)現(xiàn)Nampt高表達的細胞凋亡減少，提示Nampt高表達能抵抗DNA損傷所引起的細胞死亡。Folgueira 等[4]在阿霉素治療乳腺癌的耐藥基因篩選中，發(fā)現(xiàn)3個基因與阿霉素耐藥有關，其中一個就是Nampt。

我們的前期研究發(fā)現(xiàn)Nampt在胃癌等多種惡性腫瘤中高表達，與惡性腫瘤生物學行為密切相關，且可能與腫瘤細胞對某些藥物的化療耐藥有關[5-6]。本研究中，通過探討乳腺癌組織中Nampt的表達與臨床病理特征及患者預后的關系，以期為乳腺癌患者臨床治療、預后評估提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病理組織來源 采集2006年1月至2008年12月間83例我院手術治療且隨訪資料完整的乳腺癌患者癌組織標本及對應的癌旁正常乳腺組織標本?；颊呔鶠榕裕挲g29～66歲，平均年齡47歲。所有患者術前未經(jīng)放療或化療。乳腺癌TNM分期采用AJCC標準(2009年版)。

1.2 免疫組化方法 標本經(jīng)35%甲醛水溶液固定，石蠟包埋，切成3 μm厚組織切片，附于玻片上，采用免疫組化SP法染色。應用圖像信號采集與分析儀對所有切片進行圖像采集。免疫組織化學染色后的切片按陽性率進行判斷：Nampt陽性染色定位于細胞質，以見棕黃色或者棕褐色顆粒為陽性細胞。每張切片按陽性細胞占總細胞數(shù)的百分比定量評為1～4分：≤25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；≥76%為4分。1～2分歸為低表達，3～4分歸為高表達。由兩名病理科醫(yī)師獨立判定每一個樣本，少數(shù)不統(tǒng)一的結果進行重新評估，取協(xié)商后一致的意見。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，Nampt在組織中表達的差異及與臨床病理學特性的關系采用χ2檢驗，Nampt表達與預后的關系采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，曲線之間的差異采用Log-rank檢驗評價。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Nampt在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(圖1) 48.19%(40/83)的乳腺癌組織標本中Nampt高表達，51.81%(43/83)的乳腺癌組織標本中Nampt低表達。正常乳腺組織中Nampt均幾無表達。

2.2 Nampt表達與乳腺癌臨床病理間的關系及與ER、PR、Her-2表達的相關性 由表1可見，Nampt的表達與患者年齡、腫瘤部位及組織分化程度無關，與腫瘤大小、淋巴結轉移及TNM分期有關(P<0.05)。Nampt表達與ER、PR的表達呈負相關，而與Her-2的表達之間沒有顯著相關性。

表1 Nampt表達與乳腺癌臨床病理間的關系及與ER、PR、Her-2表達的相關性

2.3 Nampt的表達與乳腺癌患者預后的關系 將Nampt高表達和低表達患者的同期生存率相比較后發(fā)現(xiàn)，Nampt高表達患者的5年無病生存率和總生存率低于低表達者，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(圖2、圖3)。

圖2 Nampt表達與乳腺癌患者5年無病生存率關系曲線

圖3 Nampt表達與乳腺癌患者5年總生存率關系曲線

3 討論

Nampt與腫瘤之間的關系正逐漸引起研究者們的興趣。研究證實Nampt在多種惡性腫瘤中高表達。多項研究檢測Nampt在相關腫瘤性疾病中血清水平和(或)組織水平的表達均得到了陽性結果，認為其可作為相關腫瘤的分子標記物[2]。Nakajima等[7-8]對胃癌及結腸癌患者血清中的多種因子進行檢測和分析后認為，Nampt可作為診斷進展期胃癌和結腸癌的一種新的生物標記物。Wang等[9]發(fā)現(xiàn)Nampt在前列腺癌中高表達，其抑制劑能有效抑制前列腺癌細胞生長和侵襲。Bajrami等[10]在近期通過裸鼠實驗發(fā)現(xiàn)，Nampt抑制劑聯(lián)合PARP抑制劑對三陰性乳腺癌有明顯的治療作用。

一種經(jīng)化學方法新篩選出的小分子化合物FK866(APO866)，能通過抑制Nampt引起NAD耗竭導致腫瘤細胞凋亡。FK866能抑制煙酰胺合成NAD以阻斷腫瘤細胞賴以生存的途徑，而對正常細胞影響很小，因此其有望成為一種新的抗癌藥物[11]。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，Nampt在乳腺癌中高表達，其表達程度與腫瘤大小、淋巴結轉移及TNM分期有關。隨著乳腺癌惡性程度及分期的增高，Nampt的表達也隨之增加，這表明Nampt可能參與了乳腺癌的發(fā)展和轉移過程，是乳腺癌進展過程中的重要蛋白，可用來輔助判定乳腺癌的分期或惡性程度。本研究還表明，與乳腺癌組織中Nampt低表達的患者相比較，Nampt高表達的患者術后無病生存率及總生存率低，提示Nampt可用來預測乳腺癌患者的預后和指導臨床治療，特別是在結合TNM分期及受體表達時，可能對預后的判斷更為準確。

綜上所述，Nampt在乳腺癌組織中呈高表達狀態(tài)，參與乳腺癌的發(fā)展和轉移過程，不僅可用于評估乳腺癌患者的預后，而且可作為乳腺癌潛在的治療靶點，為開發(fā)新的治療藥物提供思路。

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