郭君麗，張永利

(寶雞市婦幼保健院，陜西寶雞721000)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是育齡女性常見的良性疾病，具有與腫瘤相似的生物學特性［1］。異位內(nèi)膜黏附—侵襲—新生血管形成是EMs發(fā)病的關鍵，其中均涉及細胞外基質(zhì)(ECM)的降解?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在降解ECM及促進異位病灶新生血管生成等過程中具有重要作用。水通道蛋白(AQPs)是一組促進水分子快速跨膜轉(zhuǎn)運的蛋白［2］，具有調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外滲透壓平衡及促進細胞遷移等重要作用［3］。2011年7月～2013年7月，我們觀察了MMP-9、AQP5在EMs患者在位子宮內(nèi)膜及異位內(nèi)膜組織中的表達變化，探討二者在EMs發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期在我院住院手術治療、術后病理證實為EMs的患者40例為EMs組，年齡20～43歲，平均36歲。選擇同期因不孕癥住院行腹腔鏡手術的患者20例為對照組，年齡25～35歲，平均32歲。兩組患者月經(jīng)規(guī)律，術前3個月內(nèi)未使用任何激素類藥品或使用過宮內(nèi)節(jié)育器，均無婦科腫瘤、內(nèi)分泌疾病。

1.2 子宮內(nèi)膜組織MMP-9、AQP5表達檢測 采用免疫組化法。EMs組于術中取在位子宮內(nèi)膜20份及異位內(nèi)膜(卵巢內(nèi)膜樣囊腫囊壁組織)40份，對照組經(jīng)腹腔鏡取正常子宮內(nèi)膜組織(病理證實)20份。所有標本經(jīng)中性甲醛溶液固定，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，免疫組化染色，檢測MMP-9、AQP5表達。用PBS代替一抗做陰性對照，具體步驟按試劑盒說明操作。結果判定:每例切片隨機觀察10個高倍視野。按染色強度及陽性細胞百分比綜合計分。染色強度:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性細胞百分比＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，＞50%為3分。兩項得分相乘，0為陰性，1～3為弱陽性(+)，4～5為中度陽性(++)，≥6為強陽性，弱陽性～強陽性計為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，率的比較采用 χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

MMP-9定位于胞質(zhì)，分布于異位內(nèi)膜腺上皮細胞、間質(zhì)細胞胞質(zhì)，間質(zhì)血管內(nèi)皮細胞亦有少量表達;AQP5定位于胞質(zhì)，主要位于子宮內(nèi)膜腺上皮及腔上皮細胞，間質(zhì)中有少許表達。對照組、EMs組在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜中MMP-9的陽性表達率分別為5.0%(1/20)/20)、30.0%(6/20)、80.0%(32/20)，AQP5 陽性表達率分別為10.0%(2/20)、40.0%(8/20)、75.0%(30/20)，EMs組異位內(nèi)膜組織中的表達高于在位內(nèi)膜，二者均高于對照組(P均 ＜0.05)。

3 討論

EMs的形成與基底膜(BM)和ECM的降解密切相關，通過降解屏障，為各種細胞提供依附支架及附著結構，同時對于細胞的黏附、遷移、新生血管生成、分化以及各種基因表達的調(diào)控也起著重要作用。MMPs是一組與鋅離子結合的內(nèi)肽酶，其主要功能在于降解ECM，參與許多生理與病理過程。Ⅳ型膠原蛋白是BM和ECM主要成分，而MMP-9是降解這些蛋白成分的主要酶類，其活性調(diào)節(jié)決定了細胞外基質(zhì)的降解速度［4］。Osteen 等［5］認為，EMs患者體內(nèi)MMPs調(diào)節(jié)系統(tǒng)的改變，使脫落的子宮內(nèi)膜逆流入腹腔后，在異位病灶處呈侵襲性生長過程中起到關鍵作用。

AQP5由265個氨基酸組成，分子量為27 kD，定位于人類染色體12q3水通道蛋白，主要位于各種腺體腺泡細胞表面及多種組織中，參與跨膜水轉(zhuǎn)運及腺體分泌功能，協(xié)助腺細胞和基質(zhì)細胞的遷徙。文建國等［6］研究表明，子宮內(nèi)膜腺癌中AQP1、AQP2的高表達可能與腫瘤血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移有關。而EMs與腫瘤有相似的生物學特性，且其發(fā)生過程涉及到子宮異位內(nèi)膜的遷徙，因此以水通道蛋白5為切入點，了解子宮內(nèi)膜細胞在水通道蛋白干預后的細胞遷徙變化情況，有助于明確水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)膜遷移過程中的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，EMs組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜MMP-9、AQP5的表達均高于對照組，提示 MMP-9、AQP5高水平的表達與EMs的發(fā)病有關;異位內(nèi)膜中的陽性表達率又高于在位內(nèi)膜，證實MMP-9、AQP5的表達與EMs發(fā)病密切相關。異位內(nèi)膜中MMP-9蛋白的過度表達，使異位內(nèi)膜中降解ECM成分的蛋白酶活性增加，破壞周圍組織基底膜及腹膜間細胞的連接，組織屏障消失，病灶向間質(zhì)侵潤［7］，使EMs的子宮內(nèi)膜細胞更易發(fā)生腹腔種植，并且可在VEGF的協(xié)同下促進血管內(nèi)皮細胞出芽及新生血管形成［8］，使病灶不斷擴大，表現(xiàn)出類似腫瘤的侵襲性特點。AQP5在異位及在位內(nèi)膜的高表達，增強了血管的滲透性和組織間隙的壓力，促進大量內(nèi)膜細胞的外移、遷徙。江秀秀等［9］研究也表明，AQP在誘導EMs異位細胞的遷徙過程中具有重要作用。研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔內(nèi)微環(huán)境會發(fā)生改變［10.11］，包括基質(zhì)金屬蛋白酶、整合素、降鈣素等，使得AQP5可能發(fā)生去磷酸化，異位病灶中AQP5的合成減少，腺細胞的遷徙能力下降，黏附力增強，加劇了異位病灶的形成。研究發(fā)現(xiàn)，AQP在婦科腫瘤系統(tǒng)中可抑制細胞凋亡和促進新生血管生成［12］。因此AQP5可能在減少侵襲性子宮內(nèi)膜細胞凋亡與促進異位病灶新生血管生成等過程中起著重要作用。我們認為，MMP-9降解EMC的同時，卻增加了血管的滲透性，從而使內(nèi)膜細胞在AQP5的作用下，遷移速度進一步加快，因此兩者在EMs的形成過程中可能具有協(xié)同作用。

總之，研究EMs組織中MMP-9、AQP5表達的關系為了解EMs的發(fā)病機制提供了新思路，但MMP-9及AQPs能否作為治療靶點仍有待進一步研究。

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