邱敏琦 綜述，姜 浩，賀修勝 審校（. 南華大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 衡陽(yáng)400；. 南華大學(xué)腫瘤研究所，湖南衡陽(yáng)400）

wnt 信號(hào)通路是一條在進(jìn)化上高度保守的通路，對(duì)細(xì)胞的增殖、遷移和凋亡起重要作用，wnt 信號(hào)通路的失調(diào)與許多疾病的病理改變甚至腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[1-2]。目前發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)wnt 基因共有19 種，它們有不同的表達(dá)形式和功能[3]。其中發(fā)現(xiàn)wnt2 在多種腫瘤組織中高表達(dá)，且能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移，包括胰腺癌、胃癌、直腸結(jié)腸癌、膠質(zhì)細(xì)胞瘤等。本文重點(diǎn)就wnt2 與多種腫瘤之間關(guān)系的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 wnt 信號(hào)通路與wnt2

1.1 Maiese 等[4]發(fā)現(xiàn)一種原癌基因參與小鼠乳腺腫瘤的發(fā)生，并將其命名為int1，隨后研究發(fā)現(xiàn)int1 與果蠅Wingless 具有同源性，因此將其統(tǒng)稱(chēng)為wnt 基因。wnt 基因編碼的WNT 蛋白為350～400 個(gè)氨基酸的分泌型糖蛋白，在胚胎形成期間調(diào)控細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)，包括蒼蠅、蠕蟲(chóng)、人等[5]。目前已在不同動(dòng)物間發(fā)現(xiàn)多種wnt 基因，在人類(lèi)中包含19 種基因組（wnt1、wnt2、wnt3、wnt4、wnt5、wnt5a、wnt5b、wnt6、wnt7b、wnt10b、wnt11 等）[2]。wnt 基因介導(dǎo)的信號(hào)通路的失調(diào)或過(guò)度活化可導(dǎo)致腫瘤的形成、侵襲與轉(zhuǎn)移。由WNT蛋白介導(dǎo)的信號(hào)通路主要分為：（1）wnt 經(jīng)典信號(hào)通路，WNT 蛋白與細(xì)胞膜受體特異性結(jié)合，通過(guò)核內(nèi)β-catenin 累積，激活下游相關(guān)的靶基因，從而促進(jìn)腫瘤形成。（2）wnt/Ca2+非經(jīng)典通路，由wnt5a、wnt11 激活，主要通過(guò)蛋白激酶C（PKC）依賴(lài)機(jī)制調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的高低，抑制wnt 經(jīng)典信號(hào)通路，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞之間的黏附。（3）wnt/Jun 激酶途徑，主要通過(guò)誘導(dǎo)Jun 激酶（JNK）調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞骨架，參與腫瘤細(xì)胞的變形、遷移、細(xì)胞極性變化等[6-8]。

1.2 wnt2 基因位于人類(lèi)染色體7q31.3，與7 次跨膜蛋白受體Fzd9結(jié)合，協(xié)同共同受體LRP5/6 激活Dishevelled（DLV）阻止β-catenin降解，使其向核內(nèi)易位，促進(jìn)下游相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄[9]。經(jīng)研究證實(shí)，wnt2 通過(guò)激活wnt/β-catenin 經(jīng)典路徑，可促進(jìn)中腦腹部等組織的生長(zhǎng)和分化[10]。而wnt/β-catenin 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常與人類(lèi)疾病有關(guān)，包括腫瘤、骨質(zhì)疏松、衰老和退化等[11]。有學(xué)者研究證實(shí)，wnt2 可通過(guò)激活wnt/β-catenin 經(jīng)典路徑促進(jìn)食管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲能力[12]。另外，wnt2 能通過(guò)自分泌和旁分泌途徑誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。Dale 等[13]通過(guò)原位雜交技術(shù)證實(shí)乳腺癌組織中存在wnt2。在胰腺癌、胃癌、直腸結(jié)腸癌、膠質(zhì)細(xì)胞瘤中wnt2 均可見(jiàn)高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移呈正相關(guān)。在乳腺癌患者和胰腺癌患者的血清中均可檢測(cè)到wnt2 陽(yáng)性表達(dá)，且高于健康成年人。wnt2 高表達(dá)于這些腫瘤組織及血清中，揭示wnt2 在腫瘤生長(zhǎng)、發(fā)展過(guò)程中起著重要的促進(jìn)腫瘤增殖，遷移的作用[12-13]。

2 wnt2 與腫瘤的關(guān)系

2.1 wnt2 與乳腺癌。Watananbe 等[14]對(duì)23 例乳腺癌組織及癌旁乳腺組織運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)wnt2 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)23 例乳腺癌組織中wnt2 均高表達(dá)，而僅有13%（3/23）的癌旁組織中wnt2 表達(dá)上調(diào)。郭變琴等[15]為進(jìn)一步研究wnt2 在乳腺癌患者體內(nèi)的表達(dá)情況，采用免疫組織化學(xué)（免疫組化）方法檢測(cè)了5 例配對(duì)癌旁組織、9 例乳腺癌原位組織及9 例侵襲性乳腺癌組織中wnt2 的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，wnt2 在配對(duì)癌旁組織中僅見(jiàn)1 例乳腺上皮細(xì)胞質(zhì)或間質(zhì)弱表達(dá)，而在6 例例乳腺原位癌及9 例侵襲性乳腺癌組織上皮細(xì)胞中呈高表達(dá)，部分間質(zhì)細(xì)胞胞漿中也可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。在乳腺癌原位組織及侵襲性乳腺癌組織中wnt2 表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于配對(duì)癌旁組織；同時(shí)，他們運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)30 例乳腺癌患者及15 例健康成年女性的血清進(jìn)行了wnt2 檢測(cè)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，乳腺癌患者血清中wnt2 水平顯著高于健康成年女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明wnt2與乳腺癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

2.2 wnt2 與胰腺癌。Yu 等[16]采用數(shù)字基因分析、RNA 原位雜交方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，wnt2 高表達(dá)于胰腺癌小鼠的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）中，并且wnt2 只在64%小鼠（3/4）中表達(dá)細(xì)胞角質(zhì)的細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄；他們對(duì)胰腺癌原位標(biāo)本、CTCs、胰腺癌轉(zhuǎn)移性腹腔積液中的wnt2進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，在CTCs、胰腺癌轉(zhuǎn)移性腹腔積液中均可見(jiàn)大量wnt2 mRNA 信號(hào)，而在8/14 胰腺癌原位組織中僅有1%～5%的細(xì)胞中可檢測(cè)到少量wnt2 mRNA 信號(hào)，因此，進(jìn)一步得出結(jié)論，wnt2 信號(hào)在CTCs、轉(zhuǎn)移癌性腹腔積液中呈陽(yáng)性表達(dá)，而在胰腺癌原位組織僅少量表達(dá)。為進(jìn)一步研究wnt2 在體內(nèi)表達(dá)的意義，構(gòu)建慢病毒載體，并轉(zhuǎn)染NB508 胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞使其缺失wnt2 基因，將其接種于裸鼠皮下；另外，將帶有熒光蛋白標(biāo)記（GFP）的wnt2-NB508 也接種于裸鼠皮下，將二者進(jìn)行對(duì)比觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，接種帶有GFP 的wnt2-NB508 細(xì)胞的裸鼠產(chǎn)生了更多的肺轉(zhuǎn)移，因此可推測(cè)wnt2 增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移性的潛能。為進(jìn)一步揭示wnt2的分子作用機(jī)制，隨之又構(gòu)建了針對(duì)Tak1（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 激活性激酶）的shRNA 并將之轉(zhuǎn)染進(jìn)wnt2-NB508，應(yīng)用蛋白免疫印跡（western blot）法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后相關(guān)基因表達(dá)情況，結(jié)果顯示，F(xiàn)n1 表達(dá)下降，與之相關(guān)的Cleaved caspase-3 表達(dá)上調(diào)，證實(shí)在胰腺導(dǎo)管癌中存在非經(jīng)典途徑的wnt 信號(hào)通路活化，并對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移起著至關(guān)重要的作用。

2.3 wnt2 與結(jié)腸直腸癌。wnt 通路與結(jié)直腸癌的發(fā)展有高度相關(guān)性[17]，近年來(lái)越來(lái)越多的wnt2 信號(hào)被證實(shí)高表達(dá)于腫瘤組織中。Park 等[18]運(yùn)用免疫組化方法對(duì)120 例結(jié)直腸癌組織中wnt2 基因表達(dá)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，61.7%（74/120）標(biāo)本的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中wnt2高表達(dá)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，wnt2 表達(dá)上調(diào)可能是一個(gè)獨(dú)立于臨床與病理學(xué)特征的腫瘤標(biāo)記物，并且與腫瘤位置、大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及5 年生存率無(wú)關(guān)（P＞0.05），推測(cè)wnt2 的高表達(dá)可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生息息相關(guān)。最近，Carmona 等[19]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌的原位癌標(biāo)本中存在wnt2 基因的DNA 甲基化，并進(jìn)一步證實(shí)在結(jié)直腸癌患者的糞便標(biāo)本中，有78%的標(biāo)本可檢測(cè)到wnt2基因的DNA 甲基化， 為臨床上早期無(wú)創(chuàng)診斷結(jié)腸直腸癌提供了有效的甲基化生物標(biāo)記。

2.4 wnt2 與肺癌。Chen等[20]篩選出1 株側(cè)群細(xì)胞（SP）上高表達(dá)wnt1、wnt2、notch1 和c-myc 的肺腺癌細(xì)胞株A549，并沉默sox2，用逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）和Western blot 檢測(cè)沉默sox2 基因后相關(guān)基因的變化，發(fā)現(xiàn)wnt1、wnt2、notch1 和c-myc 在mRNA 和蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)，證明在肺癌的發(fā)生過(guò)程中，wnt1、wnt2、notch1 和c-myc 等致癌基因的轉(zhuǎn)錄可能與sox2 的調(diào)控有關(guān)。而sox2 是一種干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)胚胎干細(xì)胞全能性發(fā)育、器官形成及神經(jīng)分化等起著重要作用[21]。研究發(fā)現(xiàn)，人體內(nèi)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與其異常表達(dá)相關(guān)，進(jìn)一步推測(cè)，wnt1、wnt2、notch1 和c-myc 可能與腫瘤干細(xì)胞的強(qiáng)致癌性有關(guān)。You 等[22]發(fā)現(xiàn)wnt2 基因在人非小細(xì)胞肺癌組織中過(guò)表達(dá)，使用WNT2 蛋白阻滯劑能導(dǎo)致過(guò)表達(dá)wnt2的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系凋亡，并能減少β-catenin 在核內(nèi)的累積、轉(zhuǎn)錄因子T 細(xì)胞因子（TCF）依賴(lài)的轉(zhuǎn)錄活性。另外，還向非小細(xì)胞肺癌中A549 細(xì)胞轉(zhuǎn)染針對(duì)wnt2 基因的siRNA，并下調(diào)β-catenin在核內(nèi)的累積和TCF 依賴(lài)的轉(zhuǎn)錄活性，在此過(guò)程中還觀(guān)察到，在分別經(jīng)過(guò)上述2 種處理方式的細(xì)胞中，凋亡抑制基因（Suvivin）均表達(dá)下調(diào)，他們假設(shè)WNT2 蛋白阻滯劑和wnt2-siRNA 可能通過(guò)抑制Suvivin 而起到細(xì)胞凋亡的作用。

2.5 wnt2 與胃癌。早期研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織上wnt2 呈高表達(dá)，推測(cè)其高表達(dá)可能與激活wnt-β-catenin 信號(hào)通路有一定關(guān)聯(lián)性[23]。王自闖[24]為進(jìn)一步研究其分子作用機(jī)制，對(duì)兩種類(lèi)型的胃癌組織（腸型和彌漫型）及4 種人胃癌細(xì)胞系（AGS、HGC-27、MGC803、BGC823） 采用免疫組化、RT-PCR、Western blot 方法進(jìn)行了E-cadherin、β-catenin、wnt2 進(jìn)行檢測(cè)，并用Kruskal-Wallis 和Mann-Whitney 檢驗(yàn)方法對(duì)上述指標(biāo)在不同胃組織及臨床不同分期中的表達(dá)進(jìn)行了差異分析； 用Spearman 相關(guān)分析檢測(cè)該幾項(xiàng)指標(biāo)間的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)兩種類(lèi)型的胃癌組織及4 種人胃癌細(xì)胞系均可見(jiàn)到膜型E-cadherin 表達(dá)下調(diào)甚至缺失；同時(shí)還伴隨著wnt2 表達(dá)上調(diào)（在此過(guò)程中β-catenin 在膜周邊的分布減少，而在核內(nèi)累積增加），且與T 分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。提示在胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中，E-cadherin 表達(dá)丟失可能對(duì)激活wnt2 介導(dǎo)的wnt-β-catenin-TCF 信號(hào)通路起到促進(jìn)作用。

2.6 wnt2 與膠質(zhì)細(xì)胞瘤。Pu 等[25]采用RT-PCR 和免疫組化方法對(duì)45 例膠質(zhì)細(xì)胞瘤標(biāo)本中wnt2、wnt5a、frizzled2、β-catenin 進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)上述基因均高表達(dá)，并向U251 人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染靶向抑制wnt2、β-catenin 的siRNA， 證實(shí)能抑制細(xì)胞的增殖和侵襲能力，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。向裸鼠皮下瘤內(nèi)移植經(jīng)沉默wnt2、β-cateni基因的U251 人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞，能減慢腫瘤的生長(zhǎng)速度。另外，經(jīng)研究證實(shí)，在下調(diào)wnt2、β-catenin 基因的同時(shí)伴隨著PI3K/p-AKT表達(dá)下調(diào)，說(shuō)明在膠質(zhì)細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)和侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中存在wntβ-catenin 和PI3K/p-AKT 通路的交叉作用。

3 展 望

WNT2 蛋白高表達(dá)于許多腫瘤組織、患者血清、轉(zhuǎn)移病灶甚至患者糞便中，與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡密切相關(guān)。目前研究證實(shí)，針對(duì)WNT2 的阻滯劑和siRNA 能有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。但關(guān)于wnt2 與其他信號(hào)通路之間的相互作用機(jī)制還不十分清楚，對(duì)wnt2 的深入研究有望為臨床腫瘤的早期診斷及治療提供新的依據(jù)和手段。

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