何怡

吉林省四平市中心血站，吉林四平136000

ELISA檢測(cè)中全自動(dòng)加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的分析

何怡

吉林省四平市中心血站，吉林四平136000

目的探討ELISA檢測(cè)中全自動(dòng)加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的原因以及所要采取的對(duì)策。方法別使用試劑檢測(cè)篩查血液標(biāo)本，然后根據(jù)檢測(cè)試劑說明書的要求，在全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)控制微機(jī)上編輯程序，程序包括初檢和復(fù)檢。使用一次性探針和永久性探針的污染情況對(duì)比，再使用2種標(biāo)本進(jìn)行3孔復(fù)檢，在進(jìn)行判斷是否為強(qiáng)陽性所引起的拖帶污染現(xiàn)象。結(jié)果整個(gè)檢測(cè)過程中，以HIV檢測(cè)為例所檢測(cè)的7324份血液檢測(cè)中出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象的為2例，而2013年1月—2014年5月間共檢測(cè)血液標(biāo)本66085份，沒有出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象。結(jié)論一次性加樣探針的使用能夠很好的減少甚至杜絕拖帶假陽性污染現(xiàn)象的發(fā)生，在檢測(cè)過程中由于不同的廠家的試劑有所區(qū)別，在設(shè)計(jì)加樣參數(shù)時(shí)應(yīng)該遵循科學(xué)合理的原則，檢測(cè)儀器要定期進(jìn)行檢驗(yàn)維修，校準(zhǔn)，同時(shí)對(duì)于血液標(biāo)本要嚴(yán)格質(zhì)量控制，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和安全性，使得全自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備的優(yōu)勢(shì)充分。

ELISA檢測(cè)；加樣探針；拖帶假陽性

全自動(dòng)加樣系統(tǒng)的特點(diǎn)就是、標(biāo)本處理量大、精確度高、加樣速度快、不易出錯(cuò)等，因此使得血液檢測(cè)的水平和質(zhì)量都有了質(zhì)的飛躍，在近年來的采供血系統(tǒng)中血液標(biāo)本加樣檢測(cè)得到了非常廣泛的使用。然而在之前的全自動(dòng)血樣本加樣檢測(cè)中，出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象，使得檢測(cè)工作非常棘手，影響正常的工作。經(jīng)過逐層排除認(rèn)真分析，依次嘗試，終于在更換使用一次性加樣探針之后拖帶假陽性現(xiàn)象消失。本文就對(duì)ELISA檢測(cè)中全自動(dòng)加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的原因以及所要采取的對(duì)策現(xiàn)進(jìn)行探討報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我站2012年8～12月間無償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本7324，2013年1月—2014年5月間無償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本66085份，總共血液標(biāo)本73409份。每一位獻(xiàn)血者我們均保留2份他（她）的血液標(biāo)本，1份是采血護(hù)士的試管標(biāo)本作為初檢之用，另1份是留取的血袋導(dǎo)管標(biāo)本作為復(fù)檢之用。采集所得的血液標(biāo)本均進(jìn)行3000 r/min，15 min的離心處理。

1.2 試劑

初檢用采用上海科華生物工程股份有限公司提供的人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒，規(guī)格:576人份/盒，劑型:診斷試劑盒，批準(zhǔn)日期:2012-12-6，批準(zhǔn)文號(hào):國藥準(zhǔn)字S20103010藥品類型:生物制品英文名稱:ELISA；復(fù)檢時(shí)采用人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒，50人份/盒，劑型：劑盒診斷試劑盒，批準(zhǔn)日期：2013-10-5，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字S20030035，名稱：人類免疫缺陷病毒HIV(1/2)抗體診斷試劑盒(膠體金法)。所有的試劑在使用時(shí)都要保證產(chǎn)品質(zhì)量合格，而且在有效期內(nèi)。

1.3 儀器設(shè)備

本次研究所使用的儀器是瑞士STAR全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)，型號(hào)為FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)，型號(hào)為SUNRISE酶標(biāo)儀，型號(hào)為MK2的洗板機(jī)。

1.4 方法

試劑1和試劑2分別檢測(cè)初檢標(biāo)本和復(fù)檢標(biāo)本，使用檢測(cè)試劑時(shí)嚴(yán)格按照試劑的說明書進(jìn)行，首先在全自動(dòng)的樣本處理系統(tǒng)控制微機(jī)上進(jìn)行編程，所編程序包括初檢、復(fù)檢的加樣程序，2012年采用永久性加樣探針，加樣的過程中，將不同的血液標(biāo)本和液體試劑進(jìn)行吸收和分配，程序設(shè)定中需要將加樣探針進(jìn)行清洗，清洗次數(shù)為3次，然后擦拭1次，2012年之后的所有檢測(cè)都使用一次性加樣探針，相應(yīng)的在程序設(shè)定是也應(yīng)該將洗滌和擦拭步驟去除。等加樣程序完畢，然后將微板移到全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行溫育，洗板，顯色，結(jié)果判讀等。

96孔酶標(biāo)板的縱裂采用A-H來表示，酶標(biāo)板的橫列1-12表示，于是標(biāo)本的在酶標(biāo)板的位置可以表示為：A1-A12，以此類推，詳見表1.如果在微板上發(fā)現(xiàn)A-H排中任意一排連續(xù)出現(xiàn)2個(gè)或者2個(gè)以上的孔顯示的是陽性，那么結(jié)果很可能就是拖帶假陽性現(xiàn)象，這種情況時(shí)首先將統(tǒng)一檢測(cè)的初檢復(fù)檢結(jié)果進(jìn)行比較，然后在使用備用的血袋導(dǎo)管標(biāo)本、初檢標(biāo)本、復(fù)檢標(biāo)本采用2種試劑行3孔復(fù)檢。

表1 拖帶現(xiàn)象的位置詳解

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用excel表格進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理和統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示。

2 結(jié)果

在檢測(cè)中2012年8～12月份的血液標(biāo)本中出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象的2次，2013年1月—2014年4月所檢測(cè)的血液標(biāo)本中沒有出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象。詳見表2、3。

表2 第一例拖帶陽性檢測(cè)結(jié)果

表3 第二例拖帶陽性檢測(cè)結(jié)果

第1例出現(xiàn)在酶標(biāo)板H2……H7的位置，H2標(biāo)本檢測(cè)OD值分別為2.759和2.543都是強(qiáng)陽性，H3標(biāo)本OD值為0.403和0.456弱陽性。第二例出現(xiàn)在同一塊酶標(biāo)板的E9……E12，其中E9，檢測(cè)OD值3.187和3.112顯示為強(qiáng)陽性。其他均顯示為陰性。

3 討論

本次研究結(jié)果顯示，再使用一次性探針之后沒有出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象，而使用了永久性探針時(shí)則出現(xiàn)了2次拖帶假陽性污染現(xiàn)象，探針的選擇會(huì)影響ELISE檢測(cè)結(jié)果。全自動(dòng)加樣系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)很多，因此很多血站都在使用。前幾年人們?cè)跈z測(cè)血液樣本時(shí)采用的是永久性加樣探針，雖然這種檢測(cè)方法會(huì)出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象，但是由于資金或者技術(shù)的限制，因此一部分血站仍在使用，由于血液標(biāo)本和試劑加樣后，按照預(yù)先設(shè)置的程序?qū)嵤_洗和擦拭，在進(jìn)行使用，因此在加樣過程中的運(yùn)行方向由左至右各個(gè)孔之間時(shí)，會(huì)不可避免的拖帶，在加樣探針剛完成一個(gè)強(qiáng)陽性的標(biāo)本加樣之后，而標(biāo)本中有纖維蛋白凝塊殘留，在程序沖洗和擦拭之后沒有沖洗未達(dá)標(biāo)，那么就會(huì)造成拖帶假陽性的現(xiàn)象。本次研究中2例拖帶假陽性污染現(xiàn)象的出現(xiàn)都是由于在處理標(biāo)本時(shí)方法不得當(dāng)所致，永久性鋼針存在不科學(xué)合理的情況，由此導(dǎo)致加樣量有誤差、加樣針上存在掛珠、清洗探針槽不干凈、鋼針內(nèi)壁外壁的密封性不好、溢液通道不夠通暢、探針內(nèi)栓漏氣等等情況，最終就會(huì)出現(xiàn)拖帶假陽性現(xiàn)象的出現(xiàn)。本次研究結(jié)果和閆曉鵬,李雪英,王文莉[1]等人的研究結(jié)果保持一致。

我們經(jīng)過認(rèn)真分析和研究探討，建議在進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)為了避免拖帶假陽性現(xiàn)象應(yīng)該做出如下改進(jìn)：①不同廠家的試劑分別設(shè)置科學(xué)合理的幾樣參數(shù)，在血液標(biāo)本和試劑之間做好處理工作，防止二者污染。②使用全自動(dòng)的設(shè)備，拒絕使用永久性加樣探針，取締會(huì)造成加樣污染的洗滌步驟，確保血液標(biāo)本能夠在高精度的前提下完成檢測(cè)。③定期的對(duì)于檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和校正，同時(shí)成立監(jiān)管部門，對(duì)于非常重要的設(shè)備，要進(jìn)行專項(xiàng)管理，將責(zé)任分配到人，嚴(yán)格管理，時(shí)刻使得儀器保持最佳的工作狀態(tài)。④血液標(biāo)本的采集及檢測(cè)，整個(gè)過程都要嚴(yán)密監(jiān)視，規(guī)范管理，建立完善的采集-運(yùn)輸-接收-處理機(jī)制，督促相關(guān)人員嚴(yán)格執(zhí)行，從而從根本上消除標(biāo)本污染變質(zhì)的問題。

[1]閆曉鵬,李雪英,王文莉.ELISA檢測(cè)中全自動(dòng)加樣引起拖帶污染現(xiàn)象的原因分析及對(duì)策[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2011,11(13):301-302.

[2]潘志勇.ELISA檢測(cè)中全自動(dòng)加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的對(duì)策分析[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2011,5(27):455-456.

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Analysis of ELISA detection in automatic sampling cause false positive phenomena of tow

HE Yi
Jilin Province Siping City，Jilin 136000，China

ObjectiveCountermeasures ELISA detection in automatic sampling caused the false positive phenomena of towing the cause and take.MethodsUsing reagent 1,reagent 2 screening of blood samples,and then according to the detection reagent specifications,in the control computer editing program automatic sample processing system,program including the initial inspection and re examination.Using a sample probe is taking 2012 as the boundary,sample probe before 2012 is permanent,and all use disposable sample probe,so in the setting process should be banned washing process.If in the interpretation of the results of ELISA micro plate A,B,C,D,E,F,G,H row of a needle continuous sample appeared in 2 or more than 2 holes showed positive, so is the so-called towing false positive.In this case should be compared to the initial inspection and re examination results will be unified test items,and 1 branch blood bag catheter specimens,and the initial inspection retest specimens,2 specimens were used in 3 hole reinspection,again to determine whether the towing pollution phenomenon caused by the strong positive.ResultsThe whole detection process,using HIV detection as a false positive phenomenon towing appeared 7324 blood test cases detected in 2 cases,and in 2013 January-2014 year in May 66085 blood samples were detected,no false positive phenomena towing.ConclusionThe use of disposable sample probe can be very good to reduce or even eliminate the phenomenon of false positive pollution occurs in tow,the detection process of the agents of different manufacturers distinction,in the design of sampling parameters should follow the scientific principles,instrumentation to regular inspection repair,calibration,and for blood samples to strict quality control,improve the accuracy and safety detection,the automatic testing equipment advantage.

ELISA;Sampling probe;Towing false positive

R446.6

A

1672-5654（2014）11（b）-0020-02

2014-08-28）

何怡（1963-），女，山東省，大專，職稱：主管檢驗(yàn)師，研究方向：臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。