謝治軍 薛重重 楊麗萍 黃繼賢 韋 湘 廖建軍

粵北人民醫(yī)院血液內(nèi)科，廣東韶關(guān) 512026

B細(xì)胞血液腫瘤患者外周血CD40、CD154的表達(dá)及意義

謝治軍 薛重重 楊麗萍 黃繼賢 韋 湘 廖建軍

粵北人民醫(yī)院血液內(nèi)科，廣東韶關(guān) 512026

目的分析B細(xì)胞血液腫瘤外周血淋巴細(xì)胞CD40、CD154表達(dá)率的特點(diǎn)。方法28例B細(xì)胞血液腫瘤患者分為多發(fā)性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）17例，B細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）11例；選取30例健康體檢人員作為對(duì)照組。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)B細(xì)胞血液腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞（Peripheral Blood Lymphocytes，PBL）CD40、CD154的表達(dá)率。結(jié)果①M(fèi)M組：CD40表達(dá)率為（17.50±8.32）%，CD154表達(dá)率為（1.00±3.26）%；B-NHL組：CD40表達(dá)率為（29.84±15.61）%，CD154表達(dá)率為（2.01±0.59）%；對(duì)照組：CD40表達(dá)率為（6.48±3.34）%，CD154表達(dá)率為（3.25±1.04）%。②化療后B-NHL患者外周血淋巴細(xì)胞CD40表達(dá)低于化療前,P＜0.05。③MM患者III期組PBLCD40表達(dá)率高于I～I(xiàn)I期組,P＜0.05。B-NHL患者PBL CD154表達(dá)率III～I(xiàn)V期低于I～I(xiàn)I期組,P＜0.05。結(jié)論①M(fèi)M患者、B-NHL患者均存在PBL CD40高表達(dá)，B-NHL患者同時(shí)存在PBL CD154低表達(dá)；CD40高表達(dá)提示MM預(yù)后差，CD154低表達(dá)與B-NHL預(yù)后有關(guān)。②化療降低了B-NHL患者PBL CD40表達(dá)率。為臨床上進(jìn)行B細(xì)胞血液腫瘤診斷與治療提供一定的依據(jù)。

B細(xì)胞；血液腫瘤；CD40；CD154

大部分的 B淋巴細(xì)胞血液腫瘤表達(dá) CD40分子，CD40、 CD154與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)意義非常復(fù)雜，國(guó)內(nèi)外有關(guān)其與實(shí)體腫瘤和B細(xì)胞血液腫瘤的表達(dá)的研究眾多，但結(jié)果不盡相同[1-2]。

鑒于上述情況該課題將就這一問題進(jìn)行探討，初步了解CD40、CD154與B細(xì)胞血液腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，為臨床B細(xì)胞血液腫瘤患者治療時(shí)機(jī)、方法及預(yù)后評(píng)估依據(jù)，以2011年7月—2013年3月的28例B淋巴血液腫瘤患者為研究對(duì)象，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

粵北人民醫(yī)院血液內(nèi)科收治的28例B淋巴細(xì)胞血液腫瘤患者，男18例，女10例，年齡39～81歲。28例B淋巴細(xì)胞血液腫瘤患者張之南主編《血液病診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]分兩組：MM組17例，其中男11例，女6例，按照Durie和Salmon分期標(biāo)準(zhǔn)分為I～I(xiàn)I期8例，III期9例；B-NHL組11例，其中男7例，女4例，按照Ann/Arbor制定的分期標(biāo)準(zhǔn)，分為 I～I(xiàn)I期4例，III～I(xiàn)V期 7例。 對(duì)照組為該院門診體檢健康人員，男19例，女11例，年齡25～67歲。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器、試劑 FACS-Calibuer流式細(xì)胞儀、紅細(xì)胞裂解液（美國(guó)Becton-Dickinson(BD)公司）；ROCHE 7600全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)羅氏公司）；流式細(xì)胞熒光標(biāo)記抗體CD45-Per-CP、CD40-PE、CD145-PE，流式細(xì)胞熒光標(biāo)記抗體陰性對(duì)照為IgG1-PE和IgG1-FITC（美國(guó)Beckman公司）。

1.2.2 CD40、CD145檢測(cè) 空腹8 h后外周靜脈采血 2 mL入EDTA抗凝管 （安徽赫爾生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科技有限公司），混勻，EPICS-XL型流式細(xì)胞儀 （Beckman-Coulter公司）進(jìn)行CD40、CD154熒光抗體標(biāo)記檢測(cè)。檢測(cè)鼠Ig G1陰性對(duì)照，并以陰性對(duì)照為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)CD40、CD154的百分比，分析數(shù)據(jù)并打印出二維散點(diǎn)圖，以熒光抗體染色陽(yáng)性的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)記錄結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 B細(xì)胞血液腫瘤患者PBL CD40、CD154表達(dá)情況

MM組PBL CD40表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組 （t=3.018,P＜0.01），但其CD145表達(dá)水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 0.803,P＞0.05）；B-NHL組PBL CD40表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（t=7.882,P＜0.01），其CD145表達(dá)水平低于對(duì)照組 （t=2.401,P＜0.05）。見表1。

表1 CD40、CD154在B細(xì)胞血液腫瘤組和正常對(duì)照組的表達(dá)水平[(),%]

表1 CD40、CD154在B細(xì)胞血液腫瘤組和正常對(duì)照組的表達(dá)水平[(),%]

組別CD40CD145 MM組（n=17）B-NHL組（n=11）對(duì)照組（n=30）17.50±8.31 29.84±15.60 6.48±3.34 3.00±1.00 2.41±0.58 3.25±1.04

2.2 B細(xì)胞血液腫瘤患者化療前后PBL CD40、CD154表達(dá)水平的變化

MM組有7例患者，B-NHL組有5例患者進(jìn)行化療，化療前后僅有B-NHL患者PBL CD40表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.997, P＜0.05），化療后表達(dá)水平低于化療前，其余表達(dá)水平化療前后無(wú)明顯變化。見表2。

表2 化療前后外周血淋巴細(xì)胞CD40、CD154表達(dá)水平()

表2 化療前后外周血淋巴細(xì)胞CD40、CD154表達(dá)水平()

項(xiàng)目CD40 CD154 MM組 化療前（n=7）化療后（n=7）B-NHL組化療前（n=5）化療后（n=5）18.42±10.54 13.65±5.90 37.35±11.72 19.74±5.94 2.72±1.90 2.62±2.01 1.21±2.05 2.33±2.01

2.3 MM和B-NHL患者PBL CD40、CD154表達(dá)水平在不同疾病分期的比較

MM患者PBL CD40表達(dá)率在I～I(xiàn)I期組和III期組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。B-NHL患者PBL CD154表達(dá)率在I～I(xiàn)I期組、III～I(xiàn)V期組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05，見表4。

表3 MM患者各分期PBLCD40、CD154表達(dá)水平()

表3 MM患者各分期PBLCD40、CD154表達(dá)水平()

注：△表示兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

組別（MM）CD40CD154 I～I(xiàn)I期組（n=8）III期組（n=9）tP 16.15±5.26 28.45±10.10 2.612 0.045△2.97±2.91 1.67±2.06 1.952 0.163

表4 B-NHL各分期PBL CD40、CD154表達(dá)水平()

表4 B-NHL各分期PBL CD40、CD154表達(dá)水平()

注：△表示兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

組別（B-NHL）CD40CD154 I～I(xiàn)I期組（n=4）III～I(xiàn)V期組（n=7）tP 21.77±7.23 34.46±17.64 1.671 0.131 2.54±1.68 1.21±0.17 2.563 0.044△

3 討論

國(guó)內(nèi)外關(guān)于CD40及CD154在惡性腫瘤患者的臨床研究已有報(bào)道，有文獻(xiàn)[4-7]報(bào)告在卵巢癌、小細(xì)胞肺癌、胃癌和乳腺癌等多種腫瘤患者的外周血和腫瘤局部CD40表達(dá)率增加。該研究中B淋巴細(xì)胞血液腫瘤患者PBL CD40表達(dá)率高于健康人群，這與國(guó)內(nèi)外研究數(shù)據(jù)基本一致[8-10]，另外，該研究還提示B-NHL患者同時(shí)存在PBL CD154低表達(dá)。

該研究中化療后B-NHL患者PBL CD40表達(dá)率低于化療后，B-NHL患者經(jīng)化療后PBL淋巴細(xì)胞亞群中B淋巴細(xì)胞百分比下降，B-NHL組的PBL CD40表達(dá)率與B細(xì)胞百分比存在正相關(guān)性，故其化療后PBLCD40表達(dá)率下降，但MM患者PBL CD40化療后表達(dá)率偏低，但與化療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與MM患者所采用的化療強(qiáng)度較低，而化療后PBL淋巴細(xì)胞亞群中B淋巴細(xì)胞百分比下降不明顯有關(guān)。

該研究提示MM預(yù)后與臨床分期密切相關(guān)，晚期的MM患者腫瘤負(fù)荷較高，外周血所含的骨髓瘤細(xì)胞較高，故CD40表達(dá)較高。B-NHL分期與CD154低表達(dá)有關(guān)，CD40-CD154結(jié)合可激活體內(nèi)特異性免疫反應(yīng)系統(tǒng)，參與機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，而在 CD154與 CD40結(jié)合后，CD154的表達(dá)率升高，CD154聯(lián)合IL-4、CpG可以高效促BCP-ALL細(xì)胞表面免疫分子的表達(dá)，從而有效提高機(jī)體T淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性效應(yīng)從而產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)[11-12]。如上所述，CD154的低表達(dá)反應(yīng)了CD154與CD40結(jié)合率較低，CD154與CD40結(jié)合率較低，導(dǎo)致機(jī)體的免疫缺陷，該研究中III～I(xiàn)V期組的B-ALL患者CD154表達(dá)率明顯低于I～I(xiàn)I期組。

綜上所述，CD40高表達(dá)與MM預(yù)后有關(guān)，CD154低表達(dá)與B-NHL預(yù)后有關(guān)，CD40、CD154表達(dá)水平可以作為MM、B-NHL這兩種B細(xì)胞血液腫瘤預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)之一。增加膜CD154效應(yīng)的相關(guān)抗體有望在B細(xì)胞血液腫瘤治療中取得成效，這為臨床B細(xì)胞血液腫瘤患者臨床綜合治療提供了參考。

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Expression and Significance of CD40,CD154 in Patients with B-cell Hematologic Malignancies

XIE Zhijun XUE Zhongzhong YANG Liping HUANG Jixian WEI Xiang LIAO Jianjun
Blood Internal Medicine,Yuebei People's Hospital,Shaoguan,Guangdong Province,512026,China

ObjectiveTo analyze the characteristics of expression rate of peripheral blood lymphocytes(PBL)CD40 and CD154 in patients with B-cell hematologic malignancies.Methods28 cases of patients with B-cell hematologic malignancies were divided into 17 cases with multiple myelom(MM)and 11 cases with B-cell non-Hodgkin's lymphoma(B-NHL);30 healthy people underwent healthy examination were selected as the control group.Flow cytometry was used to detect the expression rate of PBL CD40 and CD154 of patients with B-cell hematologic malignancies.Results1.MM group:the expression rate of CD40 was(17.50 ±8.32)%,and that of CD154 was(1.00±3.26)%;B-NHL group:the expression rate of CD40 was(29.84±15.61)%,and that of CD154 was (2.01±0.59)%;Control group:the expression rate of CD40 was (6.48±3.34)%,and that of CD154 was (3.25± 1.04)%.2.The expression rate of PBL CD40 of B-NHL patients after chemotherapy was lower than that before chemotherapy,P＜0.05.3.PBL CD40 expression rate of stage III subgroup in MM group was higher than that of stage I and stage II subgroups,P＜0.05.PBL CD154 expression rate of stage III and IV subgroups in B-NHL group was lower than that of stage I and II subgroup, P＜0.05.Conclusion1.Patients with MM and patients with B-NHL had high expression of PBL CD40,and B-NHL patients also had low expression of PBL CD154;high expression of CD40 was associated with poor prognosis in patients with MM;low expression of CD154 was associated with poor prognosis in patients with B-NHL.2.Chemotherapy reduced the expression rate of PBL CD40 in patients with B-NHL.It provides a basis for the diagnosis and treatment of B-cell hematologic malignancies.

B-cell;Hematologic malignancies;CD40;CD154

R732

A

1674-0742（2014）08（b）－0009-03

2014-05-06）

謝治軍（1981-），男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：血液病。