陳佰清 葉 鋒 朱 杰 宋笑玲 李意平

(杭州市余杭區(qū)中醫(yī)院肛腸科，浙江 杭州 311106)

結(jié)腸癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病率出現(xiàn)了增高的趨勢(shì)〔1〕。T-box2(TBX2)是T-Box基因家族成員之一，其編碼蛋白TBX2是一個(gè)指導(dǎo)胚胎、組織器官軸向發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子，屬于發(fā)育調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因。有研究〔2〕發(fā)現(xiàn)TBX2在多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，可視為新的腫瘤標(biāo)志物，其促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用日益受到關(guān)注。本研究旨在研究結(jié)腸癌患者TBX2蛋白的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 選取2008～2012年浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科的存檔標(biāo)本100例，其中40例為正常結(jié)腸黏膜〔結(jié)腸腺瘤旁確診為正常的結(jié)腸黏膜組織，平均年齡(54.1±3.7)歲〕，60例為結(jié)腸癌〔平均年齡(55.2±4.8)歲〕，全部病例在術(shù)前均未接受放療及化療，臨床及病理資料完整。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟修訂TNM分期法，其中0～Ⅰ期32例、Ⅱ～Ⅳ期28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例；組織學(xué)分型：24例未侵及漿膜和36例侵及漿膜。

1.2TBX2蛋白在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌組織的檢測(cè) 采用ELISA法檢測(cè)，ELISA試劑盒購(gòu)于南京建成生物有限公司，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3TBX2蛋白在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌組織表達(dá)灰度值的檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，鼠抗人TBX2單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)有限公司。常規(guī)石蠟切片，4 μm，60℃烤箱烘片4 h，然后脫蠟至梯度酒精至水洗，采用檸檬酸抗原修復(fù)液煮沸1 min進(jìn)行抗原修復(fù)，抗體稀釋液濃度均為1∶100，其余步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，DAB顯色后，用蘇木精復(fù)染，封片。采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析儀分析，灰度值越大基因表達(dá)越低，灰度值越小基因表達(dá)越高。

1.4TBX2基因在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌組織陽(yáng)性率的檢測(cè) 陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒樣物質(zhì)。在200倍鏡下觀察全片，按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比及著色程度進(jìn)行結(jié)果判定。按陽(yáng)性細(xì)胞比例判定：陽(yáng)性細(xì)胞≤10%計(jì)1分，10%～50%計(jì)2分，>50%計(jì)3分。按染色程度判定：陰性為0分，淡黃色為1分，中度黃色2分，棕黃色3分。按陽(yáng)性細(xì)胞得分×染色程度計(jì)總分，總分<3為陰性，≥3為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.1TBX2蛋白在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌中含量的比較 與正常結(jié)腸黏膜〔(2.30±0.16)pg/ml〕比較，TBX2蛋白在結(jié)腸癌中的含量〔(7.83±1.05)pg/ml〕顯著升高(P<0.01)。

2.2TBX2蛋白在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌中免疫組化灰度值的比較 TBX2的陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色；與正常結(jié)腸黏膜灰度值(135.29±3.17)比較，TBX2蛋白灰度值在結(jié)腸癌中(95.62±2.51)顯著降低(P<0.01)。

2.3TBX2基因在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌中陽(yáng)性表達(dá)率的比較 TBX2基因在正常結(jié)腸黏膜陽(yáng)性表達(dá)率為25.00%(10例)，與結(jié)腸癌(85.00%，51例)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。

2.4TBX2與臨床病理特征的關(guān)系 TBX2的陽(yáng)性表達(dá)率在結(jié)腸癌組織隨組織病理分級(jí)的升高而升高〔0～Ⅰ期為14例(43.75%)、Ⅱ～Ⅳ期為21例(75.00%)〕(P<0.01)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的〔17例(80.95%)〕高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移〔14例(35.89%)〕(P<0.01)，浸及漿膜組〔28例(77.78%)〕高于未浸及漿膜組〔8例(33.33%)〕(P<0.01)。

3 討 論

TBX2在多種腫瘤中高表達(dá)，并且與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤細(xì)胞增殖以及細(xì)胞凋亡等有關(guān)〔3〕，TBX2能直接參與細(xì)胞周期進(jìn)程中DNA的復(fù)制及腫瘤化療藥物耐藥性的產(chǎn)生，其編碼蛋白TBX2主要通過(guò)其C末端的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用〔4〕。英國(guó)學(xué)者Bilican等〔5〕提出TBX2基因失效可使癌細(xì)胞休眠。一般而言，人體能使那些已經(jīng)發(fā)生突變的細(xì)胞處于一種休眠狀態(tài)，阻止其分裂和生長(zhǎng)。但如果這種突變是癌變，人體的這種功能會(huì)受到抑制，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞快速擴(kuò)散。研究人員在對(duì)致命的惡性黑色素瘤的研究〔6〕中發(fā)現(xiàn)，在破壞人體抑制細(xì)胞分裂功能的過(guò)程中，TBX2基因一旦失效，黑色素瘤細(xì)胞便失去分裂能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TBX2基因是與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因，這為腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了新的線索，同時(shí)為早期診斷及早期治療腫瘤提供了靶基因。

4 參考文獻(xiàn)

1張偉健,車小群,鐘 倩,等.Survivin與Bax蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國(guó)醫(yī)藥指南，2011；9(3)：11-2.

2陳 平,田德安,劉 梅,等.TBX2蛋白在胰腺癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)及其意義〔J〕.臨床內(nèi)科雜志,2007；24(5):341-3.

3宋一村,王曉菲,包虹旭,等.MDM2基因和TBX2在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012；12(31):6127-30.

4Rowley M，Grothey E，Couch FJ.The role of TBX2and Tbx3 in mammary development and tumorigenesis〔J〕.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2004；9(2)：109-18.

5Bilican B，Goding CR.Cell cycle regulation of the T-box transcription factor TBX2〔J〕.Exp Cell Res，2006；312(33)：2358-66.

6Vacce KW,Carreira S,Brosch G，etal.TBX2is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senescence in melanomas〔J〕.Cancer Res,2005；65(16)：2260-8.