姚方成 （山東省臨沂市平邑縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東平邑 273300）

·綜述·

臨床免疫診斷研究進(jìn)展

姚方成 （山東省臨沂市平邑縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東平邑 273300）

臨床免疫診斷是現(xiàn)代發(fā)展極其迅速的一門應(yīng)用科學(xué)，涉及檢驗(yàn)學(xué)中的腫瘤免疫學(xué)、變態(tài)反應(yīng)性疾病、自身免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)、傳染病等眾多領(lǐng)域．與生物各子學(xué)科的關(guān)系變得越來越密切，同時(shí)由于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科技的飛速發(fā)展與進(jìn)步，以及免疫學(xué)基礎(chǔ)研究成果的不斷突破與革新，臨床免疫診斷也有了質(zhì)的飛躍，其應(yīng)用在不斷深入與拓廣，現(xiàn)在幾乎應(yīng)用于各科臨床疾患的診斷，包括免疫器官本身的疾病抑或是與免疫直接相關(guān)性疾病．本文就臨床免疫診斷的研究與進(jìn)展進(jìn)行深入探討，做出簡要綜述．

免疫學(xué)；臨床免疫診斷；研究進(jìn)展

免疫標(biāo)記技術(shù)的逐步發(fā)展和完善促進(jìn)了臨床免疫診斷相應(yīng)進(jìn)步．從 20世紀(jì)中期開始，多項(xiàng)免疫標(biāo)記技術(shù)的逐步建立對(duì)免疫檢測敏感性的提高有著很大的促進(jìn)作用．1941年Coons等通過異氰酸蒽熒光素標(biāo)記抗體的方法，檢測小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌莢膜多糖抗原，并在此基礎(chǔ)上創(chuàng)立了熒光免疫技術(shù)，使得抗原能夠被定位檢測．1959年 Yalow和Berson開創(chuàng)了放射免疫分析技術(shù)，將其用于糖尿病人胰島素的含量測定，使之成為糖尿病的診斷方法之一．1971年 Engvall等把放射性核素用酶替代從而制備了酶標(biāo)記試劑，至此酶免疫技術(shù)得以創(chuàng)立，這大大推動(dòng)了非放射性標(biāo)記免疫技術(shù)的發(fā)展．1983年Czerkinsky、Sedgwick和 Holt通過建立在 ELISA技術(shù)的基礎(chǔ)上開創(chuàng)了 ELISPOT技術(shù)，此技術(shù)可用于檢測免疫應(yīng)答細(xì)胞分泌的產(chǎn)物，并且分析免疫細(xì)胞功能，其特點(diǎn)是具有高度的敏感性．20世紀(jì)70年代初期，F(xiàn)aulk和 Taylor創(chuàng)立了膠體金免疫技術(shù)，其具有操作簡便、采樣方便、用量少、結(jié)果直觀等優(yōu)點(diǎn)，在感染性疾病、風(fēng)濕病、自身免疫疾病等的抗原、抗體檢測以及診斷中是非常重要的方法．各方法靈敏度由大到小次序?yàn)榉派涿庖邷y定，熒光免疫測定，酶免疫測定，膠體金測 定［1］．

臨床免疫診斷的發(fā)展需要依靠免疫學(xué)技術(shù)的不斷革新，而免疫學(xué)技術(shù)的革新又是建立在其他科學(xué)技術(shù)發(fā)展的基礎(chǔ)上．免疫學(xué)外的科學(xué)技術(shù)的的發(fā)展，使得臨床免疫診斷發(fā)生了深刻的變革．隨著單克隆抗體技術(shù)以及電子自動(dòng)化等技術(shù)的相互發(fā)展與融合，新型免疫標(biāo)記技術(shù)也相繼問世，如電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（ECL）、時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）、免疫PCR、以及蛋白芯片標(biāo)記免疫技術(shù)等，可檢測出一切具有抗原性或半抗原性的物質(zhì)，成為目前臨床免疫診斷應(yīng)用的主要技術(shù)．

電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECL）是上世紀(jì)末開始興起的一種新型發(fā)光免疫技術(shù)，其與化學(xué)發(fā)光有一定的差異，體現(xiàn)在該法為在電極表面借助電化學(xué)反應(yīng)而引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，主要有電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過程．電化學(xué)發(fā)光為電促放光，其激發(fā)的光具有高效、穩(wěn)定連續(xù)的特點(diǎn)，同時(shí)檢測步驟與之前的方法相比變得非常簡便．其因?yàn)樵硇路f、不易被干擾、靈敏度高、特異性強(qiáng)、標(biāo)準(zhǔn)物穩(wěn)定、出結(jié)果迅速、易重復(fù)等特點(diǎn)，在臨床上的應(yīng)用范圍越來越廣，主要用于生長激素、腫瘤標(biāo)志物、甲狀腺激素、C-肽、生長激素、絨毛膜促性腺激素、促黃體生成素、催乳素等檢測，并有較好的發(fā)展前景［2］．

時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）屬于非放射免疫分析技術(shù)，在近幾十年來是最具發(fā)展前途的一項(xiàng)技術(shù)，由于鑭系稀土元素的熒光壽命比較長，因此是抗原、抗體、激素等的合適標(biāo)記物，而且利用時(shí)間分辨熒光分析儀延緩測量時(shí)間，使之排除非特異性本底熒光的干擾，保證所得信號(hào)都為特異熒光．因此此法靈敏度高、特異性好，明顯高于其他若干分析方法．TRFIA技術(shù)在國外已廣泛應(yīng)用于臨床檢測，在其基礎(chǔ)上不斷有新的技術(shù)延伸出來．在國內(nèi)也正逐步得到重視，該技術(shù)不斷得到推廣［3］．

免疫PCR是將免疫反應(yīng)的特異性與 PCR的敏感性相結(jié)合的免疫學(xué)檢測技術(shù)．該方法是通過連接分子把DNA與抗體相連接，再與吸附在固相載體上的待測抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-DNA復(fù)合物，最后用特異性引物對(duì) DNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，并且對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測．該方法能夠定量測定與 DNA標(biāo)記抗體相對(duì)應(yīng)的抗原［4］．

蛋白芯片標(biāo)記免疫技術(shù)是通過微加工和微電子技術(shù)將大量的探針蛋白高密度排列在固相支持物表面，抗體、抗原、受體、酶則作為靶蛋白將探針蛋白特異性地捕獲，然后將未結(jié)合的其它蛋白洗去，運(yùn)用相應(yīng)檢測系統(tǒng)對(duì)靶蛋白進(jìn)行定準(zhǔn)確、快速、高通量、集成化的分析．蛋白芯片標(biāo)記免疫技術(shù)在感染性疾病、腫瘤、自身免疫疾病等疾病的診斷中有著非常廣泛的應(yīng)用．

綜上所述，抗原抗體的特異性結(jié)合能夠檢測某一待測物存在的原理，是早期臨床免疫診斷方法的基礎(chǔ)，也會(huì)是未來各種新方法及新儀器的重要結(jié)合部分．在21世紀(jì)，隨著基因工程、蛋白芯片技術(shù)及其他科學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，臨床免疫診斷也必將會(huì)進(jìn)行一次又一次的革新，越來越廣泛、越來越深入的應(yīng)用到臨床的各類疾病的診斷中．

［1］曹雪濤．免疫學(xué)研究的發(fā)展趨勢及我國免疫學(xué)研究的現(xiàn)狀與展望［J］．中國免疫學(xué)雜志，2009，25（1）：10－23．

［2］周建光，楊 梅．電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)與臨床應(yīng)用［J］．醫(yī)療裝備，2010，23（5）：23－24．

［3］武學(xué)成，何 林，周克元．時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)及臨床應(yīng)用［J］．醫(yī)學(xué)綜述，2006，12（7）：434－436．

［4］黃 杰，李金明．免疫PCR技術(shù)及其應(yīng)用研究進(jìn)展［J］．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（8）：709－712．

Discussion on research and development of clinical immunology diagnosis

YAO Fang-Cheng
Department of Clinical Laboratory，Pingyi People's Hospital of Shandong Province，Pingyi 273300，China

Clinical Immunology diagnosis is an applied science which develops extremely rapidly in modern times，involving many areas of the laboratory science，such as tumor immunology，allergic diseases，autoimmune diseases，transplant rejection reactions and other infectious diseases．And biochemistry，molecular genetics，molecular biology，cell biology become close．With the rapid development of science and technology of modern medicine，and constant breakthroughs of the immunology in basic research and innovation，clinical immunodiagnostic has also a qualitative leap in its wide application in deepening and extending，now used in almost all subjects in clinical disorders diagnostics，including immune organ itself and immune diseases or directly related diseases．In this paper，a brief overview has been made in respect of the deep research of the clinical immunology diagnostics．

immunology；diagnostic clinical immunology；research and development

2095-6894（2014）05-149-02

R446．1

A

在免疫學(xué)發(fā)展的早期，Emil von Behring和 Kitasato通過對(duì)白喉或破傷風(fēng)毒素免疫動(dòng)物的研究確定了抗體（antibody，Ab）、抗原（antigen，Ag）的概念，使得免疫和醫(yī)學(xué)免疫診斷開始變得密不可分．十九世紀(jì)末 Kraus通過大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了沉淀反應(yīng)．同年Ehrlich首次提出了中和反應(yīng)．次年 Bordet又建立了補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，Wassermann等很快將此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于梅毒的診斷中．1900年 Landsteiner發(fā)現(xiàn)人 ABO血型，此后血型鑒定成為臨床檢驗(yàn)中的重要項(xiàng)目．1945 年Coombs等建立的抗球蛋白試驗(yàn)，應(yīng)用于溶血性貧血時(shí)紅細(xì)胞不完全抗體的檢測．次年Oudin向外界公布了其研發(fā)的試管免疫擴(kuò)散技術(shù)．這些經(jīng)典的血清學(xué)方法，提供了為血清抗體檢查以及病原菌鑒定的方法，而被廣泛應(yīng)用于傳染病的診斷．

2014-08-12；接受日期：2014-08-23

姚方成．本科．Tel：0539-4689085 E-mail：2069461272＠163．com