■李雅茹 高印林 全世元 張敏

（1.敦化市畜牧局，吉林敦化 133700；2.敦化市動物檢疫站，吉林敦化133700；3.延邊大學(xué)，吉林延吉 133000）

由于抗生素、激素、高鋅和高銅添加劑在養(yǎng)殖業(yè)和生態(tài)環(huán)境中引起的負(fù)面影響，各國相繼推出對這些飼料組分限制使用的法規(guī)。開發(fā)具有替代抗生素效果的飼料，同時(shí)又能保護(hù)生態(tài)環(huán)境是動物營養(yǎng)與飼料領(lǐng)域研究的熱門話題。因此，飼料研究領(lǐng)域開發(fā)了許多新型的綠色添加劑，其中包括酶制劑、寡糖制劑、益生素、合生元、中藥制劑和納米礦物質(zhì)等，這些添加劑都在不同程度上促進(jìn)了動物對營養(yǎng)素的吸收利用，刺激動物自身免疫力的提高，改善畜產(chǎn)品質(zhì)量。研究資料證明，本試驗(yàn)使用的負(fù)離子添加劑是采用納米技術(shù)生產(chǎn)的新型添加劑，與普通添加劑相比具有特殊功能，能夠替代飼料中的抗生素，可以清除動物組織中的殘留藥物，促進(jìn)動物機(jī)體免疫力的提高，降低動物養(yǎng)殖過程的死亡率[1-3]。為研究負(fù)離子添加劑對肉雞血液常規(guī)指標(biāo)和肉雞免疫能力的影響，我們進(jìn)行了關(guān)于血液指標(biāo)和免疫指標(biāo)的分析，以驗(yàn)證負(fù)離子添加劑在肉雞養(yǎng)殖業(yè)中的可應(yīng)用性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用負(fù)離子添加劑組成

負(fù)離子添加劑組成：由硫磺礦物粉（為納米技術(shù)處理）、電氣石粉、鍺礦粉、鐵礦粉、硒礦粉、硅粉和稀釋劑通過特殊的加工工藝配制而成。

普通添加劑組成：以市售的禽通用型微量礦物元素為主與稀釋劑配制而成。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及供試動物的選擇

試驗(yàn)自2012年12月1日起至2013年1月11日止在敦化肉雞場進(jìn)行，飼養(yǎng)試驗(yàn)為期42 d。試驗(yàn)選擇健康的1日齡AA肉仔雞(公雞)360只，按體重隨機(jī)分成兩組，分別為硫磺負(fù)離子礦物質(zhì)組和普通礦物質(zhì)組（即對照組），分別添加0.2%負(fù)離子添加劑和0.2%市售添加劑，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。每組試驗(yàn)雞180只，組內(nèi)設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)組60只。經(jīng)方差分析各組肉雞平均初始體重差異均不顯著（P＞0.05）。

雞舍在入雛前15 d先用生石灰撒于地面消毒，入雛前10 d開始每兩天用5%百毒殺消毒液對平網(wǎng)、料槽、水槽、雞舍墻壁和地面進(jìn)行噴霧消毒1次，前4 d給雞舍供暖，用高錳酸鉀進(jìn)行24 h熏蒸消毒（注意：把所有的窗口、通氣口堵嚴(yán)，熏蒸時(shí)舍溫要求在25℃以上，濕度應(yīng)在75%以上），熏蒸后及時(shí)放出有害氣體。所有雞只全部采用網(wǎng)上平養(yǎng)。全期采用常規(guī)管理制度，以干粉料飼喂，保證自由采食和飲水，進(jìn)行常規(guī)免疫和消毒。每周帶雞消毒兩次，免疫期間不帶雞消毒。入雛后前3 d保持24 h光照，3 d后改為23 h光照，即晚間關(guān)燈1 h。

1.3 樣品采集與測定方法

1.3.1 血液指標(biāo)分析

40日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)組取10只雞（每組10×3=30只雞），用一次性注射器進(jìn)行翼下靜脈采血，采血量為5 ml/只。采血后靜置12 h，用XYJ80-2型電動離心機(jī)離心10 min（3 500 r/min），取血清樣置于低溫冰箱（-80℃）中保存。

表1 AA肉雞日糧組成及營養(yǎng)水平

血清總蛋白含量的測定采用微量凱氏（Kjeldahl）定氮法；血清尿素氮、甘油三酯、膽固醇含量的測定采用比色法；血清葡萄糖濃度(GLU)采用葡糖糖氧化酶法；血清鈣、鉀濃度的測定采用比色法；谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定采用改良金氏（King）法；血中免疫球蛋白含量采用半自動生化分析儀測定，其全部指標(biāo)值的測定均在延邊醫(yī)院完成。

1.3.2 免疫器官指數(shù)

剝離脾臟、法氏囊和左側(cè)胸腺(去除周圍的脂肪)，迅速稱其鮮重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件處理，差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 負(fù)離子添加劑對肉雞血清蛋白和肝功的影響（見表2）

由表2可知，試驗(yàn)組的血清總蛋白含量相對于對照組提高21.85%，差異極顯著（P＜0.01）。試驗(yàn)組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶酶活比對照組提高1.76%和0.14%（P＞0.05）。

表2 負(fù)離子添加劑對肉雞血清蛋白和肝功的影響

血清總蛋白一般分為清蛋白和球蛋白兩大類，主要作用是維持動物血管內(nèi)正常膠體滲透壓和酸堿度、運(yùn)輸多種組織代謝物、調(diào)節(jié)被運(yùn)輸物質(zhì)等多種生理功能；同時(shí)與肉雞機(jī)體免疫功能有著極為密切的關(guān)系。血清總蛋白水平主要反映肉雞肝臟的合成功能和腎臟病變引起蛋白質(zhì)丟失的情況，也可以通過血清總蛋白間接了解肉雞機(jī)體的營養(yǎng)水平，判斷肉雞日糧中營養(yǎng)素的代謝狀況。納米硫磺負(fù)離子和鍺負(fù)離子均具有促進(jìn)血清總蛋白含量提高的作用。鐵礦粉中的亞鐵離子是合成血紅蛋白的重要成分，因此對血清總蛋白含量的提高也具有一定的促進(jìn)作用。谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶在正常情況下，主要存在于肝細(xì)胞中，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，這兩種酶會被釋放到血液中，通過血液檢查谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶酶活可判斷肉雞的肝臟功能。通常在肉雞患有肝臟疾病時(shí)這兩種酶會超出正常值范圍而極劇升高。負(fù)離子添加劑組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶與對照組相比變化不明顯，說明負(fù)離子添加劑對肉雞肝臟無明顯損傷。

負(fù)離子添加劑具有促進(jìn)血清總蛋白含量提高作用，而對于血中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶酶活無顯著影響。

2.2 負(fù)離子添加劑對肉雞甘油三酯和膽固醇含量的影響（見表3）

表3 負(fù)離子添加劑對肉雞甘油三酯和膽固醇含量的影響（mmol/l）

由表3可知，試驗(yàn)組的甘油三酯和膽固醇含量分別比對照組降低53.57%和64.53%，差異極顯著（P＜0.01）。

甘油三酯（TG）是長鏈脂肪酸與甘油縮合脫去三個(gè)水分子而形成的。甘油三酯是肉雞體內(nèi)的主要貯存能量的形式，血中的甘油三酯與肝臟中蓄積脂肪量是正相關(guān)關(guān)系，當(dāng)血中甘油三酯降低時(shí)，意味著肝臟中的甘油三酯也會降低。膽固醇是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇廣泛存在于肉雞的腦和神經(jīng)組織中，同時(shí)在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也比較高，作為肉雞細(xì)胞膜的組成成分，也是合成膽汁酸、維生素D以及甾體激素的重要原料，主要溶解于脂溶性溶劑。膽固醇雖然在人和動物體內(nèi)具有廣泛的生理作用，但高膽固醇血癥會導(dǎo)致人類的動脈粥樣硬化、靜脈血栓形成與膽石癥，因此含膽固醇高的動物性食品也是導(dǎo)致這些疾病在現(xiàn)代人類社會迅速增長的主要原因。當(dāng)肉雞血中膽固醇含量降低時(shí)，在雞肉中沉積的膽固醇的含量會降低，并減少了肉雞皮下脂肪和臟器周圍的脂肪，雞肉產(chǎn)品更符合目前百姓的消費(fèi)理念。負(fù)離子添加劑具有降低血中甘油三酯和膽固醇的作用。

2.3 負(fù)離子添加劑對肉雞尿素氮含量和其他血液指標(biāo)的影響（見表4）

表4 負(fù)離子添加劑對肉雞尿素氮含量和其他血液指標(biāo)的影響（mmol/l）

從表4可知，試驗(yàn)組血中尿素氮和血糖含量分別比對照組降低了31.22%和20.66%，差異顯著（P＜0.05）。試驗(yàn)組血清鈣相對于對照組提高50.27%，差異極顯著（P＜0.01）。

尿素氮是肉雞蛋白質(zhì)代謝的最終產(chǎn)物。氨基酸脫掉的NH3在肝臟中與CO2合成尿素。腎臟是排泄尿素的主要器官，尿素從腎小管經(jīng)過時(shí)，各段均可重吸收，當(dāng)腎功能損害時(shí)，血中的尿素濃度就會增加。當(dāng)肉雞體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成速度大于分解速度時(shí)，血中的尿素濃度就會降低。負(fù)離子添加劑具有降低血中尿素氮濃度的作用，說明負(fù)離子添加劑具有促進(jìn)肉雞體內(nèi)蛋白質(zhì)合成作用，對腎臟也無損傷。肉雞血液中的糖大部分是葡萄糖。肉雞體內(nèi)各個(gè)組織器官細(xì)胞的活動所需要的能量都是由葡萄糖供給。當(dāng)血糖高出或低于正常生理常數(shù)時(shí)，說明血糖無法在肉雞體內(nèi)轉(zhuǎn)化和代謝，胰島素和胰高血糖素分泌紊亂。負(fù)離子添加劑具有降低血糖作用，且不低于正常值。鈣是肉雞體內(nèi)含量最多的陽離子，99%以上鈣存在于骨骼中，少量的鈣在細(xì)胞外液中維持神經(jīng)肌肉的正常興奮性。非疾病狀態(tài)下，血中鈣濃度升高說明肉雞從消化道中吸收入血的鈣離子增多，有利于鈣在骨骼中的沉積，維持神經(jīng)肌肉組織的正常興奮性[4-5]。本試驗(yàn)中血鈣濃度升高，說明負(fù)離子添加劑具有促進(jìn)飼料中鈣離子吸收的作用，有利于肉雞的正常生長，并維持神經(jīng)肌肉組織的正常功能。

試驗(yàn)組血清鉀離子略高于對照組，但統(tǒng)計(jì)分析表明各組之間差異不顯著（P＞0.05），說明使用負(fù)離子添加劑不會影響血中鉀離子濃度，對動物的鉀離子代謝不會有不良影響。

2.4 負(fù)離子添加劑對肉雞免疫球蛋白含量的影響（見表5）

表5 負(fù)離子添加劑對肉雞免疫球蛋白含量的影響（g/l）

由表5可知，試驗(yàn)組的IgG含量為2.96 g/l，對照組為0.90 g/l，相對提高228.89%，差異極顯著（P＜0.01）。試驗(yàn)組的IgA和IgM相對于對照組分別提高154.54%和110.34%，差異極顯著（P＜0.01）。

免疫球蛋白G（IgG）是肉雞免疫球蛋白的主要成分，一般占肉雞總免疫球蛋白含量的75%以上，是肉雞體內(nèi)初級免疫應(yīng)答中最持久、最重要的免疫球蛋白，無論是對肉雞的主動免疫還是被動免疫都起重要作用。肉雞的IgA可分為血清型和分泌型兩種，血清型IgA具有介導(dǎo)調(diào)理吞噬ADCC功能；分泌型IgA是肉雞機(jī)體黏膜防御系統(tǒng)的主要成分，主要覆蓋在鼻、咽、氣管、腸和膀胱黏膜的表面，它能抑制病菌和病毒在呼吸道上皮附著，能夠更加有效地減緩病毒繁殖，是黏膜極為重要的屏障。免疫球蛋白M（IgM）是肉雞產(chǎn)生的三個(gè)重要抗體類型之一。IgM抗體結(jié)合的抗原分子，有中和破壞抗原的免疫應(yīng)答作用[4-6]。肉雞免疫系統(tǒng)是防止細(xì)菌和病毒入侵肉雞體內(nèi)的第一道屏障。負(fù)離子添加劑具有促進(jìn)血清中三種免疫球蛋白含量提高的作用，說明負(fù)離子添加劑對肉雞自身免疫力提高具有積極的促進(jìn)作用。

2.5 負(fù)離子添加劑對肉雞免疫器官指數(shù)的影響（見表6）

表6 負(fù)離子添加劑對肉雞免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表6可知，試驗(yàn)組的法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)分別比對照組提高13.07%、21.16%和12.88%（P＜0.05）。法氏囊是肉雞體液免疫器官,在肉雞整體免疫機(jī)制上起著重要的作用。法氏囊指數(shù)的提高說明肉雞抵抗疾病的能力提高了。在基礎(chǔ)日糧中負(fù)離子添加劑具有促進(jìn)胸腺指數(shù)提高的作用，從組織學(xué)角度看，負(fù)離子添加劑提高了肉雞的抗病力。肉雞的脾臟是最大的周圍淋巴樣器官，肉雞脾臟由紅髓和白髓構(gòu)成，具有造血和血液過濾作用，同時(shí)也是肉雞淋巴細(xì)胞遷移和接受抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答、及時(shí)產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子的重要場所[7-8]。脾臟指數(shù)提高也說明了在基礎(chǔ)日糧中添加負(fù)離子添加劑具有提高肉雞免疫力的作用。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，負(fù)離子添加劑提高了血清總蛋白含量、免疫球蛋白含量、免疫器官指數(shù)和血鈣含量；降低了血中的甘油三酯、膽固醇、血糖和尿素含量。負(fù)離子添加劑具有提高肉雞免疫力的作用。負(fù)離子添加劑可以在肉雞養(yǎng)殖業(yè)大面積推廣，在一定程度上可以替代抗生素在肉雞飼料中的使用，使雞肉產(chǎn)品安全可靠，符合目前市場上的需求。