張 勇，黃愛文，宋洪濤

(中國人民解放軍南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福建 福州 350025)

多效胃鏡乳是我院研制的一種一次性給藥即可同時(shí)達(dá)到局部麻醉、解痙、消泡、潤滑和減少分泌效果的胃鏡乳，是由鹽酸達(dá)克羅寧、消旋山莨菪堿、二甲基硅油、西黃蓍膠等在80 ℃條件下乳化制成的復(fù)方制劑。鹽酸達(dá)克羅寧化學(xué)名稱為對(duì)-丁氧-β-哌啶苯基乙基酮，是一種起效快、作用時(shí)間長、不良反應(yīng)小、安全性高的局部麻醉藥[1-2]。原標(biāo)準(zhǔn)中鹽酸達(dá)克羅寧的含量測定方法為紫外-可見分光光度法(UV 法)的一階導(dǎo)數(shù)法，實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)其測定結(jié)果較實(shí)際含量高，且原標(biāo)準(zhǔn)中沒有收錄消旋山莨菪堿的含量測定方法[3-4]。為了保證該制劑的臨床療效和控制其質(zhì)量，本試驗(yàn)中建立了測定制劑中鹽酸達(dá)克羅寧和消旋山莨菪堿含量的高效液相色譜(HPLC)法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。多效胃鏡乳(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院制劑室，批號(hào)為130922，130923，130924);鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100423-201102);消旋山莨菪堿對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100249 -200902);甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸達(dá)克羅寧含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Ecilent XDB-CN 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫公司);流動(dòng)相:0.01 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(含0.15% 三乙胺溶液，用磷酸調(diào)pH 至6.5)-甲醇(20 ∶80);檢測波長:282 nm;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:30 ℃。

2.1.2 溶液制備

振搖供試品2 min，取約2.5 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸10 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品貯備液;精密量取5 mL 貯備液，置100 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL 中約含25 μg 的溶液，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品約50 mg，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸10 mL，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液;精密量取2.5 mL 貯備液，置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，作為對(duì)照品溶液。按處方量除不加鹽酸達(dá)克羅寧外其他成分制備陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取2.1.2 項(xiàng)下3 種溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，方中其他成分及輔料對(duì)鹽酸達(dá)克羅寧的測定無干擾，方法專屬性好，鹽酸達(dá)克羅寧的保留時(shí)間約為5.2 min，分離度為8.38，理論板數(shù)為11 875。

圖1 鹽酸達(dá)克羅寧高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品貯備液0.75，1.50，2.50，5.00，7.50 mL，分別置100 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。以鹽酸達(dá)克羅寧質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)、相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程Y=29.18 X+12.114，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸達(dá)克羅寧質(zhì)量濃度在7.5 ～75.0 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6 次，按鹽酸達(dá)克羅寧色譜條件測定其含量。結(jié)果的RSD 為0.098%(n=6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):按處方量比例稱取處方中除鹽酸達(dá)克羅寧外所有組分(約相當(dāng)于多效胃鏡乳0.125 g )共9 份，置25 mL 容量瓶中，3 份為一組，各組分別精密加入鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品貯備液(976.044 μg/mL)0.75，0.625，0.500 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制得所需溶液，按鹽酸達(dá)克羅寧色譜條件測定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品6 份，依法制備供試品溶液，按鹽酸達(dá)克羅寧色譜條件測定含量。結(jié)果的RSD 為0.43%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h 時(shí)測定鹽酸達(dá)克羅寧的峰面積。結(jié)果的RSD為0.33%(n=8)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.4 樣品含量測定

精密稱取樣品適量，按供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，取10 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品適量，制成每1 mL 中約含鹽酸達(dá)克羅寧25 μg 溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。3 批樣品中鹽酸達(dá)克羅寧含量測定結(jié)果見表2?？梢?，3 批樣品中鹽酸達(dá)克羅寧含量均為標(biāo)示含量的90.0% ～110.0%，符合規(guī)定。

另配制3 批多效胃鏡乳及不含鹽酸達(dá)克羅寧的陰性對(duì)照品，分別以新建立的HPLC 法和原標(biāo)準(zhǔn)中UV 法進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表2。原UV 法為，振搖供試品2 min，精密量取供試品1 mL，置100 mL 容量瓶中，加入0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，振搖使溶解;精密量取10 mL，置50 mL 容量瓶中，用0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，搖勻，用0.45 μm 水性微孔濾膜濾過;濾液按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法測定吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。結(jié)果表明，3 批樣品中，2 種方法對(duì)比，UV 法測得值均比HPLC 法高約4%。

2.2 消旋山莨菪堿含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Ecilent XDB-CN 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫公司);流動(dòng)相:0.01 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(含0.15%三乙胺溶液，用磷酸調(diào)pH 至6.5)-甲醇(75 ∶25);檢測波長:220 nm;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:30 ℃。

表2 樣品含量測定結(jié)果(標(biāo)示量的%)

2.2.2 溶液制備

振搖供試品2 min，取約2.5 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸10 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL 中約含50 μg 的溶液，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取消旋山莨菪堿對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置200 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸20 mL，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，作為對(duì)照品溶液。按處方量除不加消旋山莨菪堿外的其他組分制備陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取2.2.2 項(xiàng)下3 種溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，色譜圖見圖2。結(jié)果表明，其他成分及輔料對(duì)測定無干擾，方法專屬性好，消旋山莨菪堿順、反式異構(gòu)體的保留時(shí)間分別約為9.1 min 和10.2 min，分離度分別為11.88 和2.24，理論板數(shù)分別為9 090 和8 858。

圖2 消旋山莨菪堿高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取消旋山莨菪堿對(duì)照品貯備液0.5，1.5，2.5，4.0，5.0 mL，分別置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。以消旋山莨菪堿質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)、消旋山莨菪堿順及反式異構(gòu)體的峰面積和為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程Y=6.190 1 X+5.413 9，r = 0.999 9(n = 5)。結(jié)果表明，消旋山莨菪堿質(zhì)量濃度在10 ～100 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積和線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6 次，按消旋山莨菪堿色譜條件測定其含量。結(jié)果的RSD=0.37%(n=6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):按處方量比例稱取處方中除消旋山莨菪堿外所有組分(約相當(dāng)于多效胃鏡乳1.25 g )共9 份，置25 mL 容量瓶中，3 份為一組，各組分別精密加入消旋山莨菪堿對(duì)照品貯備液(204 μg/mL)7.50，6.25，5.00 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制得所需溶液，按消旋山莨菪堿色譜條件測定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品6 份，依法制備供試品溶液，按消旋山莨菪堿色譜條件測定其含量。結(jié)果的RSD 為0.98%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，置室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h 時(shí)測定消旋山莨菪堿的峰面積。結(jié)果的RSD為1.03%(n=8)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.4 樣品含量測定

精密稱取樣品適量，按供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取消旋山莨菪堿對(duì)照品適量，制成每1 mL 中約含消旋山莨菪堿50 μg 溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。3 批樣品消旋山莨菪堿含量測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，3 批樣品中消旋山莨菪堿含量均為標(biāo)示含量的90.0% ～110.0%，符合規(guī)定。

3 討論

鹽酸達(dá)克羅寧和消旋山莨菪堿均有較強(qiáng)的水溶性，水溶液均在酸性條件下穩(wěn)定。鹽酸達(dá)克羅寧在282 nm 波長處有最大吸收;消旋山莨菪堿在220 nm 波長處有最大吸收，且在282 nm 波長處基本無吸收。經(jīng)試驗(yàn)，確定了文中的色譜條件，結(jié)果兩成分色譜峰均峰形對(duì)稱，分離度良好，柱效較高。

分別以HPLC 法和原標(biāo)準(zhǔn)中的UV 法對(duì)3 批樣品及不含鹽酸達(dá)克羅寧的陰性對(duì)照品進(jìn)行鹽酸達(dá)克羅寧的含量測定，結(jié)果表明，UV 法測得值均比HPLC 法高約4%。UV 法的二階導(dǎo)數(shù)法不能排除陰性溶液的干擾，專屬性差。HPLC 法專屬性好、分離度較好、簡便、準(zhǔn)確，可作為多效胃鏡乳的質(zhì)量控制方法。

多效胃鏡乳為我院自制非標(biāo)制劑，原標(biāo)準(zhǔn)收錄的含量測定項(xiàng)下只有鹽酸達(dá)克羅寧的UV 法的二階導(dǎo)數(shù)法，本試驗(yàn)將原有鹽酸達(dá)克羅寧含量測定方法改進(jìn)為HPLC 法，并增加了測定消旋山莨菪堿含量的HPLC 法。HPLC 法對(duì)以上兩成分具有良好的專屬性及穩(wěn)定性，擬收錄到非標(biāo)制劑標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定項(xiàng)下，以進(jìn)一步完善標(biāo)準(zhǔn)，更好地控制制劑質(zhì)量，確保臨床用藥安全、有效。

[1] 劉錫鈞. 實(shí)用藥物指南[M]. 北京:人民軍醫(yī)出版社，2000:127.

[2] 陳新謙，金有豫. 新編藥物學(xué)[M]. 第14 版. 北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:222.

[3] 王 玨，吳秀華，徐漢琴.HPLC 法同時(shí)測定復(fù)方達(dá)克羅寧含漱液中主要成分的含量[J]. 藥物分析雜志，2012，32(6):1 010 -1 012.

[4] 凌 宵，徐志洲. HPLC 法測定鹽酸消旋山莨菪堿注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 藥物分析雜志，2011，31(10):1 947 -1 949.