趙志偉+張?zhí)N莉

【摘要】 目的：探討真菌性角膜炎快速而有效的臨床實(shí)驗(yàn)室診斷方法。方法：對(duì)2012年6-12月53例臨床疑似真菌性角膜炎患者送檢的角膜刮片標(biāo)本，同時(shí)進(jìn)行墨汁-KOH濕片法鏡檢、熒光染色鏡檢和真菌培養(yǎng)。以真菌培養(yǎng)為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)墨汁-KOH濕片法與熒光染色法進(jìn)行方法學(xué)比較。結(jié)果：32例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%，熒光染色28例陽性，陽性率為87.5%，兩者陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）；兩種涂片鏡檢共為陽性的20例，共為陰性的4例。結(jié)論：熒光染色法鏡檢可以提高真菌性角膜炎的陽性診斷率，是真菌性角膜炎快速、簡(jiǎn)單、有效的臨床實(shí)驗(yàn)室診斷方法。

【關(guān)鍵詞】 真菌性角膜炎； 墨汁-KOH濕片法； 熒光染色法

Analysis of Laboratory Rapid Diagnostic Method of Fungal Keratitis/ZHAO Zhi-wei，ZHANG Yun-li.//Medical Innovation of China，2014，11（01）：075-077

【Abstract】 Objective：To study the rapid and effective clinical laboratory diagnostic methods of fungal keratitis.Method：Specimens of 53 clinical suspected patients with fungal keratitis from June 2012 to December 2012 were selected， for the ink - KOH wet method microscopy， fluorescence staining microscopy and fungal culture at the same time. Fungus culture as the diagnostic gold standard， the results of ink - KOH wet method microscopy and fluorescent staining microscopy were compared.Result：In 32 cases of positive specimens of fungal culture， 20 cases were positive in ink - KOH wet microscopy， the positive rate was 62.5%， 28 cases were positive in fluorescent staining microscopy， the positive rate was 87.5%， Two positive rate comparisons difference was statistically significant （字2=6.125， P=6.125）. There were 20 cases both kinds of smear microscopy were positive， 4 cases were both negative.Conclusion：The fluorescence staining microscopy can improve the positive diagnosis rate of fungal keratitis， it is a kind of rapid， simple and effective method of clinical laboratory diagnosis.

【Key words】 Fungal keratitis； Ink-KOH wet method； Fluorescent staining method

First-authors address：The Central Hospital of Jinzhou City，Jinzhou 121000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.01.036

真菌性角膜炎是由鐮刀菌、曲霉菌、頭芽孢菌和酵母菌等致病性真菌引起的感染性眼病，常伴有角膜潰瘍及視力下降，由于早期不易診斷，常造成誤診、漏診，導(dǎo)致患者因治療不當(dāng)而失明[1-3]。因此，采用快速而有效的實(shí)驗(yàn)室方法來確定病因，對(duì)指導(dǎo)臨床正確與及時(shí)的治療至關(guān)重要。錦州地處遼寧西部，氣候干燥，玉米是當(dāng)?shù)刂饕r(nóng)作物，夏秋農(nóng)忙季節(jié)由于農(nóng)作物枝葉刮傷造成的真菌性角膜炎比較常見。現(xiàn)將2012年6-12月眼科送檢的53例疑似真菌性角膜炎患者標(biāo)本使用墨汁-KOH濕片法鏡檢、熒光染色法鏡檢和真菌培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，具體情況報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 53份標(biāo)本來自2012年6-12月本院眼科就診的經(jīng)臨床診斷為疑似真菌感染角膜炎的患者。

1.2 標(biāo)本采集 患者眼部布比可因（貝諾喜）表面麻醉后，在裂隙燈下先用無菌棉簽擦去表面壞死組織，再用無菌手術(shù)刀片刮取角膜潰瘍基底部組織，置于清潔載玻片上，加一滴無菌生理鹽水后在其上再加蓋一張載玻片，另取一份標(biāo)本置無菌管中，標(biāo)本采集后立即送檢。

1.3 儀器和試劑 墨汁-KOH消化液為實(shí)驗(yàn)室自行配制，墨汁和10%KOH按1：9比例混合。真菌熒光染色試劑為美國(guó)Polysciences公司的Fungi-Fluor真菌熒光染色檢測(cè)試劑盒。真菌培養(yǎng)基為沙保羅斜面，為實(shí)驗(yàn)室自行配制。普通光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡為日本產(chǎn)奧林巴斯。

1.4 檢查方法

1.4.1 墨汁-KOH濕片法鏡檢 將夾有角膜組織的一張載玻片滴加一滴1：9的墨汁-KOH（10%）混合液，蓋上蓋玻片壓緊后普通光學(xué)顯微鏡鏡檢。

1.4.2 熒光染色法鏡檢 夾有角膜組織的另一張載玻片，直接滴加熒光染色液，加蓋片2 min后熒光顯微鏡鏡檢。

1.4.3 真菌培養(yǎng) 生物安全柜內(nèi)將無菌管內(nèi)角膜組織接種于沙氏培養(yǎng)基斜面，25 ℃培養(yǎng)2周。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢查方法染色鏡檢效果 墨汁-KOH濕片法染色后，在光學(xué)顯微鏡低倍視野下可以觀察到角膜壞死組織已經(jīng)溶解，真菌菌絲及孢子清晰顯現(xiàn)。高倍鏡下真菌菌絲及孢子呈折光反應(yīng)，與墨汁形成的黑色背景形成反差（圖1）。經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡下可以觀察到真菌菌絲及孢子呈現(xiàn)綠色，背景為暗紅色（圖2）。

圖1 墨汁-KOH濕片法（×400）

圖2 熒光染色法（×400）

注：真菌菌絲及孢子呈折光反應(yīng)，與墨汁形成的黑色背景形成反差（圖1）；經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡下可以觀察到真菌菌絲及孢子呈現(xiàn)綠色，背景為暗紅色（圖2）

2.2 診斷結(jié)果比較 53例疑似真菌感染角膜炎患者送檢標(biāo)本中，32例真菌培養(yǎng)陽性，陽性率為60.4%。以真菌培養(yǎng)為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，分析墨汁-KOH濕片法和熒光染色法結(jié)果；真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%；熒光染色法陽性28例，陽性率為87.5%；兩種涂片鏡檢方法結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）。兩者染色均為陽性的20例，均為陰性的4例，見表1。

表1 兩種涂片鏡檢方法結(jié)果 例

墨汁-KOH 熒光白染色法 合計(jì)

﹢ ﹣

﹢ 20 0 20

﹣ 8 4 12

合計(jì) 28 4 32

3 討論

真菌性角膜炎通常是由角膜外傷引起的比較嚴(yán)重的致盲性眼病，病因較多，尤以植物性外傷感染為主[4-5]。此類眼病?？梢鸹颊呓悄さ臐兩踔潦?，因此真菌性角膜炎早期的快速而有效的診斷對(duì)臨床治療非常重要。盡管典型的臨床癥狀和外傷史有助于診斷，但準(zhǔn)確可靠的診斷依然取決于實(shí)驗(yàn)室技術(shù)[6]。

傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法，主要以KOH濕片法和真菌培養(yǎng)為主。本室采用的墨汁-KOH濕片法鏡檢，雖然具有簡(jiǎn)單、快速、鏡下對(duì)比度強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但其陽性率較低，且有一定的假陽性存在，從而容易造成漏診和誤診[7]。真菌培養(yǎng)雖準(zhǔn)確可靠，但因培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)（1～2周），故不能做出快速診斷從而影響患者的及時(shí)治療[8]。

隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，一些新的診斷儀器和方法在臨床中不斷得到應(yīng)用，并在應(yīng)用中日臻完善。共焦掃描顯微鏡是一種新型、無創(chuàng)性角膜影像學(xué)檢查儀器，它可在活體上對(duì)角膜從四維（三維空間和時(shí)間）水平進(jìn)行掃描成像，提供高清晰度的角膜各層結(jié)構(gòu)圖像，因而可以從細(xì)胞水平對(duì)活體角膜的病理生理進(jìn)行直接觀察研究，具有檢出率高、快速、安全無創(chuàng)以及可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，但其對(duì)角膜潰瘍面積較小或位置較淺的病例易漏診，且費(fèi)用較貴[9]。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是引物介導(dǎo)的生物體外特定基因的連續(xù)擴(kuò)增方法，這一技術(shù)可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成目的DNA或RNA合成和擴(kuò)增，如應(yīng)用臨床可以實(shí)現(xiàn)病原的早期診斷，但因此方法實(shí)驗(yàn)室要求高，試劑價(jià)格昂貴而不易推廣[10]。

現(xiàn)今，在大多數(shù)醫(yī)院中角膜刮片染色鏡檢仍是臨床應(yīng)用最為廣泛的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，染色鏡檢具有取材方便、檢測(cè)快速及對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。這些染色方法包括革蘭染色、姬姆薩染色、熒光染色以及糖原染色等[11]。

在本研究中，53例疑似真菌感染角膜炎患者送檢標(biāo)本中，32例真菌培養(yǎng)陽性，陽性率為60.4%。此結(jié)果，部分原因可能是患者在就診檢查前已經(jīng)使用抗真菌藥物，另一方面，臨床癥狀和外傷史不是真菌性角膜炎確診的絕對(duì)依據(jù)，如僅憑臨床癥狀和外傷史診斷，有一定的誤診率。臨床32例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本，熒光染色法陽性28例，陽性率為87.5%，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%，兩者差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）。這一結(jié)果表明，檢測(cè)真菌性角膜炎熒光染色法的陽性率明顯高于墨汁-KOH濕片法。且熒光染色在熒光顯微鏡下對(duì)比明顯容易檢出，熒光染色法相對(duì)于其他新的檢測(cè)方法來說費(fèi)用相對(duì)不高，又可以做到對(duì)真菌性角膜炎的簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的早期診斷。因此，熒光染色法可以在臨床實(shí)驗(yàn)室中取代墨汁-KOH濕片法作為真菌性角膜炎早期診斷的首選方法。

參考文獻(xiàn)

[1]姚寶珠，陳季生.65例真菌性角膜潰瘍臨床治療分析[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2011，9（19）：105-106.

[2]高新蕊，蘇晶，崔紅平.真菌性角膜炎發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)療前沿，2007，2（21）：38-40.

[3]劉立春.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室診斷及藥物敏感試驗(yàn)分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008，2（20）：75.

[4]曾慶延，牛曉光，吳尚操.長(zhǎng)江中下游地區(qū)真菌性角膜炎發(fā)病特征及轉(zhuǎn)歸分析[J].國(guó)際眼科雜志，2010，10（10）：1947-1949.

[5]馬靈軍，張麗娟，賀丹，等.吉林省真菌性角膜炎病原學(xué)分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（1）：106-107.

[6]張偉宏，王麗婭，韓雷，等.真菌性角膜炎的早期診斷技術(shù)[J].醫(yī)學(xué)與臨床（臨床決策論壇版），2009，30（6）：65-66.

[7]魏文利，張蕊石，周向京.聯(lián)合試驗(yàn)在真菌性角膜炎診斷中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（1）：113-115.

[8]張進(jìn)，韓敏杰，駱駿.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室診斷[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，7（1）：270-273.

[9]王學(xué)勇，王緒梅.共聚焦顯微鏡在真菌性角膜炎中的應(yīng)用[J].國(guó)際眼科雜志，2011，11（2）：311-312.

[10]楊連娟，徐紅，溫海.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室診斷[J].中國(guó)真菌學(xué)雜志，2007，2（2）：122-125.

[11]李淼，張林.真菌性角膜炎的研究進(jìn)展[J].國(guó)際眼科雜志，2008，8（2）：384-387.

（收稿日期：2013-06-28） （本文編輯：蔡元元）

1.4.2 熒光染色法鏡檢 夾有角膜組織的另一張載玻片，直接滴加熒光染色液，加蓋片2 min后熒光顯微鏡鏡檢。

1.4.3 真菌培養(yǎng) 生物安全柜內(nèi)將無菌管內(nèi)角膜組織接種于沙氏培養(yǎng)基斜面，25 ℃培養(yǎng)2周。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢查方法染色鏡檢效果 墨汁-KOH濕片法染色后，在光學(xué)顯微鏡低倍視野下可以觀察到角膜壞死組織已經(jīng)溶解，真菌菌絲及孢子清晰顯現(xiàn)。高倍鏡下真菌菌絲及孢子呈折光反應(yīng)，與墨汁形成的黑色背景形成反差（圖1）。經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡下可以觀察到真菌菌絲及孢子呈現(xiàn)綠色，背景為暗紅色（圖2）。

圖1 墨汁-KOH濕片法（×400）

圖2 熒光染色法（×400）

注：真菌菌絲及孢子呈折光反應(yīng)，與墨汁形成的黑色背景形成反差（圖1）；經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡下可以觀察到真菌菌絲及孢子呈現(xiàn)綠色，背景為暗紅色（圖2）

2.2 診斷結(jié)果比較 53例疑似真菌感染角膜炎患者送檢標(biāo)本中，32例真菌培養(yǎng)陽性，陽性率為60.4%。以真菌培養(yǎng)為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，分析墨汁-KOH濕片法和熒光染色法結(jié)果；真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%；熒光染色法陽性28例，陽性率為87.5%；兩種涂片鏡檢方法結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）。兩者染色均為陽性的20例，均為陰性的4例，見表1。

表1 兩種涂片鏡檢方法結(jié)果 例

墨汁-KOH 熒光白染色法 合計(jì)

﹢ ﹣

﹢ 20 0 20

﹣ 8 4 12

合計(jì) 28 4 32

3 討論

真菌性角膜炎通常是由角膜外傷引起的比較嚴(yán)重的致盲性眼病，病因較多，尤以植物性外傷感染為主[4-5]。此類眼病?？梢鸹颊呓悄さ臐兩踔潦?，因此真菌性角膜炎早期的快速而有效的診斷對(duì)臨床治療非常重要。盡管典型的臨床癥狀和外傷史有助于診斷，但準(zhǔn)確可靠的診斷依然取決于實(shí)驗(yàn)室技術(shù)[6]。

傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法，主要以KOH濕片法和真菌培養(yǎng)為主。本室采用的墨汁-KOH濕片法鏡檢，雖然具有簡(jiǎn)單、快速、鏡下對(duì)比度強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但其陽性率較低，且有一定的假陽性存在，從而容易造成漏診和誤診[7]。真菌培養(yǎng)雖準(zhǔn)確可靠，但因培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)（1～2周），故不能做出快速診斷從而影響患者的及時(shí)治療[8]。

隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，一些新的診斷儀器和方法在臨床中不斷得到應(yīng)用，并在應(yīng)用中日臻完善。共焦掃描顯微鏡是一種新型、無創(chuàng)性角膜影像學(xué)檢查儀器，它可在活體上對(duì)角膜從四維（三維空間和時(shí)間）水平進(jìn)行掃描成像，提供高清晰度的角膜各層結(jié)構(gòu)圖像，因而可以從細(xì)胞水平對(duì)活體角膜的病理生理進(jìn)行直接觀察研究，具有檢出率高、快速、安全無創(chuàng)以及可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，但其對(duì)角膜潰瘍面積較小或位置較淺的病例易漏診，且費(fèi)用較貴[9]。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是引物介導(dǎo)的生物體外特定基因的連續(xù)擴(kuò)增方法，這一技術(shù)可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成目的DNA或RNA合成和擴(kuò)增，如應(yīng)用臨床可以實(shí)現(xiàn)病原的早期診斷，但因此方法實(shí)驗(yàn)室要求高，試劑價(jià)格昂貴而不易推廣[10]。

現(xiàn)今，在大多數(shù)醫(yī)院中角膜刮片染色鏡檢仍是臨床應(yīng)用最為廣泛的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，染色鏡檢具有取材方便、檢測(cè)快速及對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。這些染色方法包括革蘭染色、姬姆薩染色、熒光染色以及糖原染色等[11]。

在本研究中，53例疑似真菌感染角膜炎患者送檢標(biāo)本中，32例真菌培養(yǎng)陽性，陽性率為60.4%。此結(jié)果，部分原因可能是患者在就診檢查前已經(jīng)使用抗真菌藥物，另一方面，臨床癥狀和外傷史不是真菌性角膜炎確診的絕對(duì)依據(jù)，如僅憑臨床癥狀和外傷史診斷，有一定的誤診率。臨床32例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本，熒光染色法陽性28例，陽性率為87.5%，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%，兩者差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）。這一結(jié)果表明，檢測(cè)真菌性角膜炎熒光染色法的陽性率明顯高于墨汁-KOH濕片法。且熒光染色在熒光顯微鏡下對(duì)比明顯容易檢出，熒光染色法相對(duì)于其他新的檢測(cè)方法來說費(fèi)用相對(duì)不高，又可以做到對(duì)真菌性角膜炎的簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的早期診斷。因此，熒光染色法可以在臨床實(shí)驗(yàn)室中取代墨汁-KOH濕片法作為真菌性角膜炎早期診斷的首選方法。

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[8]張進(jìn)，韓敏杰，駱駿.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室診斷[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，7（1）：270-273.

[9]王學(xué)勇，王緒梅.共聚焦顯微鏡在真菌性角膜炎中的應(yīng)用[J].國(guó)際眼科雜志，2011，11（2）：311-312.

[10]楊連娟，徐紅，溫海.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室診斷[J].中國(guó)真菌學(xué)雜志，2007，2（2）：122-125.

[11]李淼，張林.真菌性角膜炎的研究進(jìn)展[J].國(guó)際眼科雜志，2008，8（2）：384-387.

（收稿日期：2013-06-28） （本文編輯：蔡元元）

1.4.2 熒光染色法鏡檢 夾有角膜組織的另一張載玻片，直接滴加熒光染色液，加蓋片2 min后熒光顯微鏡鏡檢。

1.4.3 真菌培養(yǎng) 生物安全柜內(nèi)將無菌管內(nèi)角膜組織接種于沙氏培養(yǎng)基斜面，25 ℃培養(yǎng)2周。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢查方法染色鏡檢效果 墨汁-KOH濕片法染色后，在光學(xué)顯微鏡低倍視野下可以觀察到角膜壞死組織已經(jīng)溶解，真菌菌絲及孢子清晰顯現(xiàn)。高倍鏡下真菌菌絲及孢子呈折光反應(yīng)，與墨汁形成的黑色背景形成反差（圖1）。經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡下可以觀察到真菌菌絲及孢子呈現(xiàn)綠色，背景為暗紅色（圖2）。

圖1 墨汁-KOH濕片法（×400）

圖2 熒光染色法（×400）

注：真菌菌絲及孢子呈折光反應(yīng)，與墨汁形成的黑色背景形成反差（圖1）；經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡下可以觀察到真菌菌絲及孢子呈現(xiàn)綠色，背景為暗紅色（圖2）

2.2 診斷結(jié)果比較 53例疑似真菌感染角膜炎患者送檢標(biāo)本中，32例真菌培養(yǎng)陽性，陽性率為60.4%。以真菌培養(yǎng)為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，分析墨汁-KOH濕片法和熒光染色法結(jié)果；真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%；熒光染色法陽性28例，陽性率為87.5%；兩種涂片鏡檢方法結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）。兩者染色均為陽性的20例，均為陰性的4例，見表1。

表1 兩種涂片鏡檢方法結(jié)果 例

墨汁-KOH 熒光白染色法 合計(jì)

﹢ ﹣

﹢ 20 0 20

﹣ 8 4 12

合計(jì) 28 4 32

3 討論

真菌性角膜炎通常是由角膜外傷引起的比較嚴(yán)重的致盲性眼病，病因較多，尤以植物性外傷感染為主[4-5]。此類眼病?？梢鸹颊呓悄さ臐兩踔潦?，因此真菌性角膜炎早期的快速而有效的診斷對(duì)臨床治療非常重要。盡管典型的臨床癥狀和外傷史有助于診斷，但準(zhǔn)確可靠的診斷依然取決于實(shí)驗(yàn)室技術(shù)[6]。

傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法，主要以KOH濕片法和真菌培養(yǎng)為主。本室采用的墨汁-KOH濕片法鏡檢，雖然具有簡(jiǎn)單、快速、鏡下對(duì)比度強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但其陽性率較低，且有一定的假陽性存在，從而容易造成漏診和誤診[7]。真菌培養(yǎng)雖準(zhǔn)確可靠，但因培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)（1～2周），故不能做出快速診斷從而影響患者的及時(shí)治療[8]。

隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，一些新的診斷儀器和方法在臨床中不斷得到應(yīng)用，并在應(yīng)用中日臻完善。共焦掃描顯微鏡是一種新型、無創(chuàng)性角膜影像學(xué)檢查儀器，它可在活體上對(duì)角膜從四維（三維空間和時(shí)間）水平進(jìn)行掃描成像，提供高清晰度的角膜各層結(jié)構(gòu)圖像，因而可以從細(xì)胞水平對(duì)活體角膜的病理生理進(jìn)行直接觀察研究，具有檢出率高、快速、安全無創(chuàng)以及可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，但其對(duì)角膜潰瘍面積較小或位置較淺的病例易漏診，且費(fèi)用較貴[9]。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是引物介導(dǎo)的生物體外特定基因的連續(xù)擴(kuò)增方法，這一技術(shù)可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成目的DNA或RNA合成和擴(kuò)增，如應(yīng)用臨床可以實(shí)現(xiàn)病原的早期診斷，但因此方法實(shí)驗(yàn)室要求高，試劑價(jià)格昂貴而不易推廣[10]。

現(xiàn)今，在大多數(shù)醫(yī)院中角膜刮片染色鏡檢仍是臨床應(yīng)用最為廣泛的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，染色鏡檢具有取材方便、檢測(cè)快速及對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。這些染色方法包括革蘭染色、姬姆薩染色、熒光染色以及糖原染色等[11]。

在本研究中，53例疑似真菌感染角膜炎患者送檢標(biāo)本中，32例真菌培養(yǎng)陽性，陽性率為60.4%。此結(jié)果，部分原因可能是患者在就診檢查前已經(jīng)使用抗真菌藥物，另一方面，臨床癥狀和外傷史不是真菌性角膜炎確診的絕對(duì)依據(jù)，如僅憑臨床癥狀和外傷史診斷，有一定的誤診率。臨床32例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本，熒光染色法陽性28例，陽性率為87.5%，墨汁-KOH濕片法20例陽性，陽性率為62.5%，兩者差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.125，P=0.025）。這一結(jié)果表明，檢測(cè)真菌性角膜炎熒光染色法的陽性率明顯高于墨汁-KOH濕片法。且熒光染色在熒光顯微鏡下對(duì)比明顯容易檢出，熒光染色法相對(duì)于其他新的檢測(cè)方法來說費(fèi)用相對(duì)不高，又可以做到對(duì)真菌性角膜炎的簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的早期診斷。因此，熒光染色法可以在臨床實(shí)驗(yàn)室中取代墨汁-KOH濕片法作為真菌性角膜炎早期診斷的首選方法。

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（收稿日期：2013-06-28） （本文編輯：蔡元元）