李 柰, 王昌濤, 孫寶國

(1.北京工商大學(xué)食品學(xué)院,北京 100048;2.北京工商大學(xué)理學(xué)院,北京 100048)

沙棘葉中黃酮提取及大孔樹脂分離純化槲皮素

李 柰1, 王昌濤2,*, 孫寶國1

(1.北京工商大學(xué)食品學(xué)院,北京 100048;2.北京工商大學(xué)理學(xué)院,北京 100048)

采用響應(yīng)面的方法對熱堿水提取沙棘葉中黃酮的條件進(jìn)行優(yōu)化,較佳工藝條件為pH值 11.4,溫度75.5℃,質(zhì)量濃度28.6mg/m L,提取2.0 h,產(chǎn)率為1.23%.磷酸沉淀后采用大孔樹脂進(jìn)行純化,比較了3種大孔樹脂AB-8、DM301、HPD-100對沙棘黃酮的純化效果,最終選出較佳大孔樹脂為AB-8,且當(dāng)上樣液濃度為1.0mg/mL、pH值為6.0、吸附1.0 h后,樹脂的吸附率達(dá)到最大值.最后用3倍柱體積蒸餾水洗脫除去雜質(zhì),用不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液(30%,50%,70%,80%, 90%)進(jìn)行梯度洗脫,并將解吸液用高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示80%和90%乙醇解吸液中槲皮素純度均可到達(dá)97%以上.

沙棘葉;黃酮;熱水堿提;大孔樹脂;槲皮素

沙棘(HippophaerhamnoidesLinn.)是被子植物門(Angiospermae)木蘭綱(Magnoliopsida)薔薇亞綱(Rosidae)山龍眼目(Proteales)胡頹子科(Elaeagnaceae)沙棘屬(Hippophae)植物,又名醋柳,酸刺兒.據(jù)報道沙棘中富含多種化學(xué)成分及生物活性物質(zhì),對兒童生長發(fā)育、中青年緩解疲勞以及老年人調(diào)節(jié)新陳代謝、減緩衰老均具有顯著效果[1].目前,用沙棘生產(chǎn)的食品有果汁飲料、汽水、香檳、啤酒、果醬、冰淇淋、明膠軟糖、沙棘餅干、果脯等.沙棘嫩葉可以制茶,它具有抗癌、消炎、抗氧化等功效,而且其咖啡堿含量低,適用于老人、小孩、高血壓等神經(jīng)衰弱患者[2].當(dāng)用沙棘葉和沙棘殘渣作為補(bǔ)充飼料時,可使斷奶仔豬增重9.38%～21.72%,奶山羊奶量增加6.24% ～6.88%,蛋雞產(chǎn)蛋率提高8.1% ～11.3%,產(chǎn)蛋量增加24.9% ～28.7%,并能明顯增加蛋黃中胡蘿卜素含量,降低膽固醇含量[3].沙棘黃酮是沙棘中一類重要的活性成分,在沙棘葉中含量最高,具有生物抗氧化、清除自由基、抗衰老[4-5]、降血脂、降血壓、降血糖、治療心腦血管疾病[6-7]以及消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌和增強(qiáng)免疫力等作用[8-9].目前,沙棘黃酮的提取分離方法有超聲波提取法、微波提取法、水浸提法、堿性助提劑提取法、硅膠柱色譜法、大孔吸附樹脂法等[10].沙棘葉中總黃酮主要以苷的形式存在,采用熱水浸提法提取成本低、生產(chǎn)過程安全、設(shè)備簡單是替代乙醇萃取劑的首選溶劑.近年來,吸附樹脂法因其操作簡單、成本低、環(huán)境友好、純化效率高等優(yōu)點,在天然植物有效成分的純化以及工業(yè)化制備中發(fā)揮了越來越大的作用.本文采用熱水堿提法提取沙棘葉中黃酮并采用大孔吸附樹脂進(jìn)行分離純化.

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料

沙棘葉,干燥葉片,實驗前粉碎,由新疆藥物研究所提供;大孔吸附樹脂(AB-8、DM301、HPD-100),購于上海華羚樹脂有限公司.

1.2 試劑

氫氧化鈉(分析純)、85%磷酸(分析純)、無水乙醇(分析純)購于北京化工廠;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純)、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純),SIGMA公司;甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、乙酸(色譜純),Fisher公司.

1.3 儀器

TB-214型電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;RJ-TDL-5A型低速大容量離心機(jī),無錫市瑞江分析儀器有限公司;DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋,天津市泰斯特儀器有限公司;T6新世紀(jì)型紫外可見分光光度計,北京普析通用儀器有限公司;SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵及RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠;pHS-3D型pH計,上海三信儀表廠; YS-04型小型高速粉碎機(jī),北京燕山正德機(jī)械設(shè)備有限公司;Agilent 1260型高效液相色譜儀(配有四元梯度泵、自動進(jìn)樣器、二極管陣列檢測器、Chem Station色譜工作站等),Agilent ZORBAX SB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),美國安捷倫科技有限公司;大孔樹脂吸附層析柱系統(tǒng)(層析柱:1.6 cm×30 cm,DHL-A型電腦恒流泵,DBS-100型電腦全自動部分收集器),上海滬西儀器廠有限公司.

2 實驗方法

2.1 沙棘黃酮的測定方法

2.1.1 紫外分光度測定

以蘆丁為對照品,在510 nm下采用Al3+顯色法測定黃酮含量[11].

1)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制.準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品后逐級稀釋至不同濃度,測定不同質(zhì)量濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液,以吸光度y為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)(mg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程 y=11.314x-0.000 6, R2=0.999 4.

2)樣品黃酮含量測定.取適量樣品提取液,稀釋后,根據(jù)回歸方程計算提取液中黃酮含量.

2.1.2 高效液相測定

據(jù)文獻(xiàn)[12]報道,沙棘黃酮中主要含有兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚、異鼠李素5種活性物質(zhì),但根據(jù)實驗需要,只選取蘆丁、槲皮素兩種標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行液相分析,見圖1.

HPLC檢測方法是 Agilent ZORBAX SB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流速1mL/min,柱溫25℃,流動相A為含有體積分?jǐn)?shù)0.5%乙酸的甲醇和乙腈混合液(40∶15,V/V),流動相B為體積分?jǐn)?shù)0.5%乙酸的超純水,檢測波長279 nm,梯度洗脫如表1.

圖1 兩種標(biāo)準(zhǔn)品HPLCFig.1 HPLC of two standard products

表1 高效液相梯度洗脫Tab.1 HPLC gradient elution

圖1中1號峰為蘆丁,出峰時間為10.087min; 2號峰為槲皮素,出峰時間為15.189min.根據(jù)文獻(xiàn)[13]所述方法,精密稱取對照品,以不同濃度分別上樣,然后以質(zhì)量濃度x(mg/m L)為橫坐標(biāo),峰面積y為縱坐標(biāo),計算回歸方程.蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y= 17 891x-28157,R2=0.999 4;槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=41 046x-55718,R2=0.999 2,見圖2.

2.2 熱水堿提

取一定量干燥沙棘葉,粉碎過50目篩.稱量25.0 g沙棘葉粉,按實驗計劃溶解,并用1.0 mol/L 的NaOH溶液和1.0mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值,控制反應(yīng)溫度及反應(yīng)時間,抽濾后用分光光度計測定.

2.2.1 單因素實驗

各因素水平設(shè)置為pH值:4.0,6.0,8.0,10.0, 12.0;溫度:50,60,70,80,90℃;時間:0,0.5,1.0, 1.5,2.0,2.5,3.0 h;質(zhì)量濃度:50.0,40.0,33.3, 28.6,25.0mg/mL.

2.2.2 響應(yīng)面試驗

根據(jù)單因素實驗結(jié)果,采用響應(yīng)面設(shè)計,利用Design-Expert7.1.6軟件進(jìn)行Box-Behnken設(shè)計和實驗處理,以確定較優(yōu)工藝條件[14-16].選擇對黃酮浸提率有顯著影響的3個因素:pH值,溫度,質(zhì)量濃度,進(jìn)行3因素3水平響應(yīng)面分析試驗,因素水平及編碼見表2.

圖2 高效液相標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 HPLC standard curves

表2 響應(yīng)面三因素三水平實驗設(shè)計Tab.2 Factors and levels of response surface analysis

2.3 大孔樹脂純化研究

將熱堿水提取液過濾后用1.0mol/L的磷酸中和至pH值為7.0,離心集沉淀,沉淀物溶解后再次調(diào)至中性,然后作為上樣液進(jìn)行純化.

2.3.1 靜態(tài)吸附和解吸實驗

2.3.1.1 樹脂選擇

根據(jù)文獻(xiàn)[17-19]選取樹脂 AB-8、DM301、HPD-100對樣品中沙棘黃酮進(jìn)行靜態(tài)吸附、解吸. 在50mL 1mg/mL的上樣液中加入5.00 g樹脂,放入25℃恒溫水浴搖床中振蕩,在不同時間1.0, 2.0,3.0,4.0,5.0 h取樣.利用分光光度法計算樹脂吸附值.

2.3.1.2 單因素實驗

選取樹脂AB-8進(jìn)行如下各單因素實驗:上樣液pH值分別調(diào)至4.0,5.0,6.0,7.0,8.0;上樣液質(zhì)量濃度分別為0.2,0.5,1.0,2.0,3.0 mg/mL;洗脫

樹脂吸附飽和后,用去離子水洗滌,再用50 mL體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇在25℃恒溫水浴搖床中解吸.在不同時間0.5,1.0,1.5,2.0,3.0 h取樣.利用分光光度法計算樹脂的解吸率.液分別為體積分?jǐn)?shù)40%,50%,60%,70%,80%的乙醇.利用分光光度法計算樹脂的吸附值及解吸率.

2.3.2 動態(tài)吸附/解吸實驗

將35 g樹脂AB-8裝于層析柱(1.6 cm×30 cm,柱體積100m L)中,平衡后采用1.0mg/mL pH值為6.0的上樣液進(jìn)行吸附,流速1.0 mL/min,上樣量150mL,用收集器收集流出液(10min/管),并用分光光度法測定每管流出液濃度,計算最適上樣量.吸附完畢后用3倍柱體積的去離子水以2mL/min洗滌,最后再分別用體積分?jǐn)?shù)30%,50%,70%,80%,90%乙醇進(jìn)行梯度洗脫,流速1.0 mL/min,每個濃度分別洗脫100 mL,收集洗脫液,采用HPLC方法進(jìn)行測定.

3 結(jié)果與分析

3.1 熱水堿提條件確定

3.1.1 提取單因素優(yōu)化

不同pH值、溫度、時間、質(zhì)量濃度等因素的單因素條件對沙棘黃酮提取率的影響見圖3.由圖3可知,pH值的增加使得沙棘黃酮的產(chǎn)率不斷上升, 但pH值過大后黃酮會被破壞,產(chǎn)率降低,所以較佳pH值為10.0;在溫度的單因素實驗中,總黃酮產(chǎn)率隨溫度的提高呈上升趨勢,這是因為溫度升高,加快了分子的擴(kuò)散能力[20],但當(dāng)溫度達(dá)70℃后,產(chǎn)率隨溫度的上升而不再改變,所以較佳提取溫度為70 ℃;提取時間測定中,當(dāng)?shù)陀?.0 h時總黃酮產(chǎn)率隨時間增加而增大,當(dāng)提取時間大于2.0 h后,總黃酮產(chǎn)率隨時間變化的趨勢減緩,所以選擇適宜提取時間為2.0 h;最后在質(zhì)量濃度實驗中,當(dāng)質(zhì)量濃度大于33.3mg/mL后,總黃酮產(chǎn)率趨勢隨質(zhì)量濃度增加而變緩,即當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到一定程度時,即使再增大質(zhì)量濃度,產(chǎn)率也趨于穩(wěn)定,此時溶劑已將有效成分基本完全溶出,所以適宜質(zhì)量濃度為33.3mg/mL.

圖3 提取各因素對總黃酮產(chǎn)率的影響Fig.3 Effects of various factors on extraction yield of total flavonoids

3.1.2 提取響應(yīng)面優(yōu)化

根據(jù)單因素實驗結(jié)果,選擇提取時間2.0 h,以提取pH值,溫度,質(zhì)量濃度作為因素,采用Box-Behnken設(shè)計試驗,試驗方案及結(jié)果見表3,回歸方程模型方差分析及其系數(shù)的顯著性檢驗見表4.

表3 響應(yīng)面分析試驗設(shè)計方案及結(jié)果Tab.3 Experimental design and corresponding results of response surface analysis

表4 回歸方程模型方差分析及其系數(shù)的顯著性檢驗Tab.4 Variance analysis for fitted quadraticmodel and significance tests of regression coefficients

經(jīng)方差分析得到:A、A2項極其顯著,B、AB、AC、B2項顯著,其余項不顯著,說明質(zhì)量濃度、溫度與質(zhì)量濃度的交互作用影響弱.pH值、溫度、質(zhì)量濃度3個因素的影響順序為:pH值＞溫度＞質(zhì)量濃度.

各因素經(jīng)二次多項回歸擬合后,得到黃酮產(chǎn)率對pH值、反應(yīng)溫度、質(zhì)量濃度3個因素的二次多項回歸方程:

響應(yīng)面圖能比較直觀地反映各因素和各因素間的交互作用,通過多元回歸方程做響應(yīng)面圖,見圖4.

圖4 兩因素及其交互作用響應(yīng)面和等高線Fig.4 Response surfaces and contour plots about effects of pairwise interactions of three operating parameters on extraction yield

根據(jù)回歸方程得出理論較優(yōu)的工藝條件為pH值11.35,溫度75.54℃,質(zhì)量濃度28.6 mg/mL,提取2.0 h,在此條件下提取理論值達(dá)到1.242%.在pH值為11.4,溫度75.5℃,質(zhì)量濃度28.6mg/mL,提取2.0 h條件下驗證實際產(chǎn)率為1.23%,理論值與實際值誤差不超過0.05%,結(jié)果表明,該模型可以較好地反映出沙棘葉熱水堿提的條件,從而也證明了響應(yīng)曲面法優(yōu)化提取沙棘黃酮條件參數(shù)的可行性.

3.2 大孔樹脂靜態(tài)吸附/解吸實驗

3.2.1 樹脂選擇

3種大孔樹脂對沙棘黃酮的靜態(tài)吸附/解吸過程隨時間的變化規(guī)律見圖5.

偵查機(jī)關(guān)的偵查活動是以刑事案件為對象，運用各種刑事科學(xué)技術(shù)手段和偵查措施揭露與證實犯罪的一種特殊的偵查決策活動，這一特殊活動的主要目的就是查明案件事實、查明犯罪嫌疑人、收集犯罪證據(jù)等。在這一過程中，必然會出現(xiàn)多種選擇，如偵查方案的選擇、偵查措施的選擇、偵查途徑的選擇、偵查思維謀略的選擇等。也就是說偵查的過程就是不斷的擬定決策方案，不斷的優(yōu)選方案并使之付諸實施的過程。［1］

由圖5可知:大孔樹脂AB-8對沙棘黃酮的吸附和解吸效果明顯優(yōu)于樹脂DM301和HPD-100,且吸附飽和時間為2.0 h,解吸基本完全時間為1.5 h.樹脂AB-8的吸附值為11.35 mg/g,1.5h靜態(tài)解吸率達(dá)到78.13%,選取樹脂AB-8為較佳純化樹脂.

圖5 不同樹脂下沙棘黃酮靜態(tài)吸附/解吸曲線Fig.5 Static adsorption/desorption curves of sea-buckthorn flavonoids under different resins

3.2.2 上樣液pH值選擇

隨著上樣液pH值的改變,大孔樹脂AB-8對沙棘黃酮的靜態(tài)吸附和解吸過程見圖6.

由圖6可知,沙棘黃酮的吸附值和解吸率在pH值為 6.0時達(dá)到最高,分別為 11.83 mg/g和86.23%,所以上樣液pH值較優(yōu)條件為6.0.

3.2.3 上樣液濃度選擇

隨著上樣液濃度的改變,大孔樹脂AB-8對沙棘黃酮的靜態(tài)吸附和解吸過程見圖7.

圖6 上樣液不同pH值的沙棘黃酮靜態(tài)吸附/解吸曲線Fig.6 Adsorption/desorption curves of sea-buckthorn flavonoids under different pH values

圖7 上樣液不同質(zhì)量濃度下沙棘黃酮靜態(tài)吸附/解吸曲線Fig.7 Adsorption/desorption curves of sea-buckthorn flavonoids under different concentration

3.2.4 洗脫劑濃度選擇

大孔樹脂AB-8在不同洗脫劑濃度下的解吸曲線見圖8.

由圖8解吸率可以看出,70%的乙醇解吸率最高,可到達(dá)81.67%,應(yīng)選擇70%乙醇進(jìn)行解吸.

3.3 大孔樹脂動態(tài)吸附/解吸實驗

3.3.1 上樣量確定

圖8 洗脫劑不同體積分?jǐn)?shù)下沙棘黃酮靜態(tài)解吸曲線Fig.8 Desorption curve of sea-buckthorn flavonoids under different concentrations eluent

取150 mL濃度為1 mg/mL pH值為6的上樣液,在裝有35g AB-8樹脂的層析柱(1.6 cm×30 cm,柱體積100mL)中純化,流速為1.0 mL/min,每10min收集一管流出液,用分光光度法測定每管流出液濃度計算最適上樣量,結(jié)果如圖9.

吸附中當(dāng)吸附質(zhì)從流出物中出現(xiàn)時,穿透曲線的相應(yīng)點為穿透點,如果穿透曲線上升很緩慢,可取流出物質(zhì)量濃度為進(jìn)料質(zhì)量濃度的5%或10%為穿透點[21].由圖9可知,當(dāng)流出液達(dá)到60mL時,流出液質(zhì)量濃度為0.12 mg/m L,達(dá)到穿透點,可以停止上樣.因此,當(dāng)上樣液質(zhì)量濃度為1.0 mg/m L時,較適上樣量為60 mL.

圖9 流出液質(zhì)量濃度隨上樣量變化曲線Fig.9 Curve between effluent concentration and sample volume

3.3.2 上樣液及不同體積分?jǐn)?shù)洗脫液HPLC檢測

上樣液及體積分?jǐn)?shù)30%,50%,70%,80%, 90%乙醇洗脫液進(jìn)行HPLC檢測,如圖10,測定結(jié)果如表5.

將體積分?jǐn)?shù)為80%及90%的乙醇洗脫液合并,冷凍干燥后稱量,可得到槲皮素純品15.45mg,產(chǎn)率為25.75%.

圖10 上樣液及不同體積分?jǐn)?shù)洗脫液HPLCFig.10 Sample and different concentration of eluent on HPLC

4 結(jié) 論

本實驗以沙棘葉為原料,響應(yīng)面法優(yōu)化了沙棘黃酮熱水堿提的較優(yōu)條件是在pH值為11.4,溫度75.5℃,質(zhì)量濃度28.6 mg/mL條件下驗證實際產(chǎn)率為1.23%.熱水堿提液用磷酸沉淀后溶解,選取35 g大孔樹脂AB-8進(jìn)行純化,當(dāng)上樣液濃度為1.0mg/m L,pH值為6.0,流速為1.0 m L/min,上樣60 mL后,用去離子水洗滌,最后用不同濃度乙醇進(jìn)行解吸,發(fā)現(xiàn)80%及90%乙醇洗脫液中可以得到純度為97%以上的槲皮素共15.45mg,產(chǎn)率為25.75%.

表5 HPLC方法檢測上樣液及不同體積分?jǐn)?shù)洗脫液純度Tab.5 Purity of sample and different eluents determined by HPLC

本實驗比較系統(tǒng)的研究了沙棘葉的提取及純化過程.采用熱水堿提法提取,操作簡單、成本低,適合工業(yè)化生產(chǎn),提取液沉淀后,大孔樹脂純化一次就得到了槲皮素純品,純化效率高,但對于沙棘葉中其他黃酮活性物質(zhì)的分離純化過程仍需進(jìn)一步研究.

[1] 齊虹凌,于澤源,李興國.沙棘研究概述[J].沙棘, 2005,18(2):37-41.

[2] 王琳,馮建菊,蔣學(xué)瑋.沙棘植物資源的綜合利用[J].北方園藝,2002(6):24-25.

[3] 劉緒川,何國耀,張禮華,等.沙棘葉及沙棘制品殘渣毒理學(xué)試驗和對畜禽生產(chǎn)性能的影響[J].甘肅畜牧獸醫(yī),1993,23(1):1-8.

[4] Wei H C,Cai Q Y,Rahn R O,et al.Inhibition of UV light and fentonreaction induced oxidative DNA damage by the soybean isoflavonegenistein[J].Carcinogen Sis, 1996,17:73.

[5] Beretc A.Flavonoids are selective cyclic CMP phosphodiesteraseinhibitors[J].Biochem Pharmacol,1979,28: 536.

[6] 韓銳.抗癌藥物研究與試驗技術(shù)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1997:141.

[7] 鄧保煒,杜芳艷.花生蔓中總黃酮含量的測定[J].食品科學(xué),2006,27(12):649-650.

[8] 白鳳梅,蔡同一.類黃酮生物活性及其機(jī)理的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),1999,20(8):11-13.

[9] 王占彬,郭鮮敏,楊蘭香,等.皂角刺提取物對肉仔雞免疫功能及生長性能的影響[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2005(9):98-100.

[10] 焦巖,常影,劉井權(quán).沙棘黃酮提取與分離技術(shù)研究綜述[J].食品工業(yè),2012,33(8):115-118.

[11] 趙二勞,張晶,呂晶.可見與紫外光度法測定沙棘葉中總黃酮的比較[J].化學(xué)世界,2008(6):343-345.

[12] Yuangang Zu,Chunying Li,Yujie Fu,etal.Simultaneous determinationofcatechin,rutin,quercetinkaempferol and isorhamnetin in the extract of sea-buckthorn(Hippophaerhamnoides L.)leaves by RP-HPLC with DAD [J].Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2006, 41(3):714-719.

[13] 孫斌,瞿偉菁,張曉玲,等.高效液相色譜法測定沙棘籽渣中黃酮苷元含量[J].中國藥學(xué)雜志,2005, 40(2):139-141.

[14] 于修燭,王玲,杜雙奎,等.響應(yīng)面法優(yōu)化枳椇子總黃酮超聲波提取工藝[J].食品科學(xué),2011,32 (12):125-129.

[15] 韓帥,李淑燕,陳芹芹,等.響應(yīng)面分析法優(yōu)化閃式提取胡柚皮中黃酮類化合物工藝[J].食品科學(xué), 2011,32(10):52-56.

[16] 張玉香,屈慧鴿,楊潤亞,等.響應(yīng)面法優(yōu)化藍(lán)莓葉黃酮的微波提取工藝[J].食品科學(xué),2010,31 (16):33-37.

[17] 李辰,邸多隆,蔣生祥.大孔吸附樹脂對沙棘葉總黃酮的吸附性能考察[J].廣東化工,2010,37(10): 12-13.

[18] 焦巖,王振宇.大孔樹脂純化大果沙棘果渣總黃酮的工藝研究[J].食品科學(xué),2010,31(16):16-20.

[19] 王芃,馬程浩,王春紅,等.MA-EGDMA樹脂純化沙棘葉中總黃酮的研究[J].中草藥,2009,40:144 -147.

[20] Liu CM,Zhao X L,Liu Z Q,et al.Isolation and extraction of total flavonoids from Epimedium Koreanum Nakai by supercritical fluid extraction[J].Chem Res Chinese U,2004,20(6):707-710.

[21] 孫彥.生物分離工程[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:212.

W ater Extraction and M acroporous Resins for Purification of Flavonoids from Sea-buckthorn Leaves

LINai1, WANG Changtao2,*, SUN Baoguo1
(1.School ofFood and Chemical Engineering,Beijing Technology and Business University,Beijing 100048,China;
2.School ofScience,Beijing Technology and Business University,Beijing 100048,China)

Response surfacemethodology was applied to optimize the water extraction processing of total flavones from sea-buckthorn leaves.The optimalextraction conditionswere pH 11.4,temperature75.5℃, extraction time 2.0 h,and the ratio ofmaterial to liquid 1∶35 g/m L.Under the optimal conditions,the extraction yield was 1.23%.After being precipitated by phosphoric acid solution,the crude flavonoids were separated bymacroporous resins AB-8,DM301,and HPD-100.Macroporous resin AB-8 had the highestadsorption rate under the conditions of sample concentration 1.0mg/mL,pH 6.0,and adsorption time 1.0 h.About 3 times of column volumn distilled water were used to wash the unabsorbed samples and different concentrations ethanol solutions(30%,50%,70%,80%,and 90%)were used for desorption.The purity of quercetin were detected by high performance liquid chromatography(HPLC)and the purity of quercetin of 80%and 90%fractionswas above 97%.

sea-buckthorn leaves;flavonoids;water extraction;macroporous adsorption resin;quercetin

TS255.1

10.3969/j.issn.2095-6002.2014.04.011

2095-6002(2014)04-0056-08

(責(zé)任編輯:李 寧)

李柰,王昌濤,孫寶國.沙棘葉中黃酮提取及大孔樹脂分離純化槲皮素.食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報,2014,32(4):56-63. LINai,WANG Changtao,SUN Baoguo.Water extraction and macroporous resins for purification of flavonoids from seabuckthorn leaves.Journal of Food Science and Technology,2014,32(4):56-63.

2013-07-12

國家質(zhì)檢公益項目(201310132).

李 柰,女,碩士研究生,研究方向為生物活性物質(zhì)的分離提取;*王昌濤,男,副教授,博士,主要從事植物功效成分開發(fā)應(yīng)用方面的研究.通訊作者.