劉 娟，張紹升

(福建農林大學植物保護學院，福建福州350002)

水稻霜霉病又稱水稻黃化萎縮病.該病在國外分布于日本、意大利、美國、新西蘭、保加利亞［1］.我國早期發(fā)生于臺灣、吉林、遼寧等水稻栽培區(qū)，江蘇、浙江發(fā)生較普遍［2－3］，目前在貴州、云南、湖南、湖北、江西等省均有發(fā)生［3－9］.福建省于2003年在龍海市發(fā)現(xiàn)該?。?0］.2011年福建省福安市有些山區(qū)稻田的水稻發(fā)生黃化現(xiàn)象，對水稻產量造成了一定損失.筆者通過病害癥狀觀察和病原鑒定，將該病害診斷為水稻霜霉病.

1 材料與方法

1.1 癥狀觀察

以肉眼觀察發(fā)病稻株的表觀癥狀，并進行癥狀描述.采用次氯酸鈉—酸性品紅對稻株發(fā)病組織染色，觀察病組織內的病原菌.

1.2 病原分離培養(yǎng)

選擇性燕麥培養(yǎng)基:燕麥片30 g，瓊脂20 g，水1000 mL，利福平 10 μg·mL－1，氨芐青霉素 50 μg·mL－1，70%五氯硝基苯 25 μg·mL－1.

采用組織分離法，用土壤浸出液誘導產生病原菌的孢子囊和卵孢子.

1.3 病原鑒定

根據病原菌的培養(yǎng)性狀和孢子囊、藏卵器、卵孢子的形態(tài)特征，對照文獻［3－4］的描述進行病原種類鑒定.

1.4 致病性測定

供試稻苗培育:將稻種浸泡、催芽后，播于滅菌砂土中育苗.

水培法接種測定:將3葉期水稻幼苗在自來水下沖洗干凈，移栽至滅菌組培瓶內20 mL滅菌水中，每瓶5苗.用粘貼法將燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的病原菌菌餅1塊接種于每株苗莖基部，6次重復;然后將組培瓶置于28℃溫室中保濕培養(yǎng)，觀察病害發(fā)生情況.待接種的稻株發(fā)病后再進行病原菌分離和鑒定.

砂培法接種測定:將3葉期稻苗移栽于小桶內8 cm厚的干凈砂土中，每桶4株，6次重復.移栽后3 d，用粘貼法將燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的病原菌菌餅1塊接種于每株苗莖基部.將秧苗置于28℃溫室中常規(guī)管理，接種后15 d檢查病原菌侵染結果.

2 結果與分析

2.1 癥狀描述

田間病株黃化、矮縮，葉片上產生黃褐色條斑，葉脈不褪色，形成斑駁花葉.病葉僵硬，張開角度較大(圖1A).葉鞘和稻稈上著生黃褐色小點，后期轉變成黃褐色條斑，病斑相互連接形成大斑塊(圖1B).下部葉片逐漸枯死，根系發(fā)育不良.病株孕穗后比健康植株矮小，分蘗減少，穗小，癟谷多(圖1C).病組織經次氯酸鈉—酸性品紅染色后，在顯微鏡下可以看到病原菌的藏卵器和卵孢子.

致病性測定也表現(xiàn)相同癥狀:植株矮小，莖稈纖細，葉片枯黃，根系衰退、變黑腐爛(圖1D).接種15 d后的發(fā)病稻株葉鞘組織經染色和切片觀察，也可以看到大量藏卵器和卵孢子(圖1E).

圖1 水稻霜霉病癥狀Fig.1 Symptoms of rice downy mildew

2.2 病原菌鑒定

病原菌在燕麥培養(yǎng)基上呈灰白色圓形菌落、絨毛狀，菌絲細長、無隔(圖2A).切取培養(yǎng)基上的菌絲塊置于水稻土壤浸出液中，可誘導產生孢子囊和藏卵器.孢子囊呈檸檬形，頂部有乳頭狀凸起，無色，單生于孢囊梗頂端(圖2B－C)，大小為(19.52－26.84)μm ×(14.64－19.52)μm;孢子囊內含多個游動孢子，游動孢子呈橢圓形，雙鞭毛，靜止子呈球形.藏卵器球形、淡黃褐色(圖2D－E)，大小為(51.24－53.68)μm×(51.24－48.8)μm;卵孢子包被于藏卵器壁內(圖2F).

根據病原菌的形態(tài)特征，并對照文獻［3－4］可知，病原菌為大孢指疫霉水稻變種［Sclerophthora macrospora(Saccardo)Thirumalachar，Shaw ＆ Narasimhan var.oryzae Zhang ＆ Liu］.

3 討論

通過對病原菌的分離、鑒定和致病性測定，首次確證福建省福安市發(fā)生水稻霜霉病.

水稻霜霉病的病原菌曾被鑒定為大孢指疫霉(S.macrospora)，并且認為該菌有廣泛的寄主范圍，能侵染禾本科作物和雜草43屬以上，常見的寄主作物有水稻、玉米、小麥、大麥、燕麥、黑麥、粟［2］.張中義等［3］研究證實，大孢指疫霉在我國有3個變種，分別為大孢指疫霉玉蜀黍變種(S.macrospora var.maydis)、大孢指疫霉水稻變種(S.macrospora var.oryzae)和大孢指疫霉小麥變種(S.macrospora var.triticina).這3個變種的孢子囊和卵孢子大小不同，在自然條件下互不侵染原寄主以外的其他寄主.根據孢子囊的大小和自然寄主的差異將福建省福安市水稻霜霉病菌鑒定為大孢指疫霉水稻變種，該菌有別于小麥和玉米的霜霉病菌.

圖2 水稻霜霉菌形態(tài)Fig.2 Morphology of S.macrospora var.oryzae

由于水稻霜霉病的癥狀易與水稻病毒病或生理性黃化衰退病混淆，本文提出了癥狀觀察與病組織內病原菌染色檢查相結合的水稻霜霉病診斷方法.病組織上的病原菌檢查結果是最重要和可靠的診斷依據.

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