高 航,高延芬,徐 虹*
(北京工商大學(xué),食品添加劑與配料北京高校工程研究中心,北京市食品風(fēng)味化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100048)
蓮渾身是寶,特別是蓮子,自古以來(lái)就是我國(guó)人民非常喜愛(ài)的藥食佳品。研究證實(shí)蓮子不僅營(yíng)養(yǎng)豐富,而且含有多種活性成分如生物堿、多糖、多酚、原花青素、黃酮等,因而具有良好的生理功效[1-4]。隨著生活水平的提高,人們對(duì)生活質(zhì)量、身體健康有了更高的要求,特別是消費(fèi)者對(duì)人工合成化學(xué)品安全性問(wèn)題的關(guān)注,使得從天然產(chǎn)物中尋找可利用的酶抑制劑、自由基清除劑、氧化反應(yīng)阻斷劑等逐漸成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)[5-6]。湖南湘潭地區(qū)為我國(guó)最大的產(chǎn)蓮區(qū)。蓮子的加工一般要經(jīng)過(guò)干燥、分級(jí)、去殼、除衣、去心等工序,湘潭地區(qū)的蓮子加工主要采用機(jī)械除衣的方式,這種生產(chǎn)方式損耗率較高,每加工100kg紅蓮,就會(huì)磨去約15kg紅衣粉,只能得到約85kg白蓮。目前這層紅衣粉尚未得到有效的利用,由于味澀甚至不能作為牲畜飼料,只能大量的堆于田間地頭,對(duì)環(huán)境造成污染。因此,本實(shí)驗(yàn)室選取蓮子紅衣粉為原材料,以60%乙醇為溶劑浸提活性物質(zhì)并研究其抗氧化及抗褐變能力,以期為蓮子加工后的副產(chǎn)物探索新的應(yīng)用途徑并提供理論依據(jù)。
蓮子紅衣粉由三湘貿(mào)易公司提供;煙臺(tái)紅富士蘋果購(gòu)買自本地超市。
NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、氯化鈉、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁、沒(méi)食子酸(以上均為分析純) 天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;福林酚(化學(xué)純) 北京普博欣生物科技有限責(zé)任公司;過(guò)硫酸鉀、無(wú)水碳酸鈉(均為分析純)、L-酪氨酸(生化試劑) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;無(wú)水乙醇(分析純) 北京化工廠;L-多巴(L-DOPA)、蘆丁(均為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 中國(guó)食品藥品檢定研究院;L-酪氨酸酶(1000U/mg)、抗壞血酸(VC) 美國(guó)Sigma公司;Trolox、ABTS、曲酸 英國(guó)Alfa Aesar公司。
JA2003C電子天平 上海越平科學(xué)儀器有限公司; FE20實(shí)驗(yàn)室pH計(jì) 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;HH-501超級(jí)恒溫水浴(數(shù)顯) 常州國(guó)華電器有限公司;DHG-9246A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;22PCO2435可見(jiàn)分光光度計(jì)、SpectrumLab 53紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海棱光技術(shù)有限公司;QL-901 VORTEX漩渦混勻器 海門市其林貝爾儀器制造有限公司;ADCI-60-C全自動(dòng)測(cè)色色差計(jì) 北京辰泰克儀器科技有限公司;MODULYOD-230真空冷凍干燥機(jī) 美國(guó)熱電公司。
蓮子紅衣粉(日照曬干,含水量為8.5%)過(guò)60目篩后,按料液比1:10(m/V)加入體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液,在室溫條件下超聲浸提1h,浸提2次,離心后合并浸提液;40℃條件下,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),制得濃縮物后置真空冷凍干燥機(jī)中干燥,得干燥粗提物,4℃低溫保存,備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:準(zhǔn)確稱取沒(méi)食子酸0.100g,蒸餾水溶解并定容至100mL,分別移取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、10.00mL到7個(gè)100mL容量瓶中并用蒸餾水定容,即得到不同質(zhì)量濃度的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL,加入到2mL質(zhì)量濃度為20mg/mL的Na2CO3中,2min后,將0.9mL的福林酚試劑加入到混合物中,反應(yīng)30min在750nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度;以沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程:Y=511.32X+36.25(R2=0.9806)。樣品測(cè)定:適當(dāng)?shù)募尤肓?,使吸光度?.2~0.8之間,具體步驟同上,進(jìn)而通過(guò)回歸方程得出沒(méi)食子酸等價(jià)含量,即總酚含量。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:稱取蘆丁對(duì)照品10mg于50mL容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,即得0.2mg/mL的對(duì)照品溶液;精密量取對(duì)照品溶液0.0、1.5、3.0、4.5、6.0mL,分別置于15mL具塞試管中,加5g/100mL亞硝酸鈉溶液0.5mL,搖勻,放置6min,加10g/100mL硝酸鋁溶液0.5mL,搖勻后放置6min,加1g/100mL氫氧化鈉溶液6.7mL,用95%乙醇定容至刻度,搖勻,放置15min。以第一管做空白,510nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度;以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=84.898X-0.8879(R2=0.9989)。樣品測(cè)定:適當(dāng)?shù)募尤肓?,使吸光度?.2~0.8 之間,具體步驟同上,進(jìn)而通過(guò)回歸方程得出蘆丁等價(jià)含量,即總黃酮含量。
ABTS工作液的配制:配制7mmol/L的ABTS儲(chǔ)備液和140mmol/L的過(guò)硫酸鉀(K2S2O8)溶液,然后取5mL的7mmol/L ABTS儲(chǔ)備液和88μL的140mmol/L過(guò)硫酸鉀溶液混合后得濃度為2.45mmol/L的ABTS儲(chǔ)備液。再將該儲(chǔ)備液在室溫條件下避光儲(chǔ)備12~16h。最后將生成的ABTS儲(chǔ)備液用無(wú)水乙醇稀釋,使其在室溫、734nm 波長(zhǎng)處的吸光度為0.70±0.02,即得到ABTS+·工作液。在試管中加入30μL的待測(cè)樣品,再加入3.0mL的ABTS+·工作液,混合,室溫靜置6min,在734nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度。按照公式(1)計(jì)算抑制率.
式中:Ai為加入某質(zhì)量濃度樣品溶液的吸光度;A0為樣品空白對(duì)照即不加樣品溶液的吸光度。
實(shí)驗(yàn)以Trolox作為陽(yáng)性對(duì)照,作不同濃度的Trolox抑制ABTS能力的曲線,并利用樣品對(duì)清除自由基動(dòng)力學(xué)模型分別求出醇提物和Trolox的IC50,并比較二者對(duì)ABTS+·的清除效果。
分別以L-酪氨酸和L-DOPA作為蘑菇酪氨酸酶作用底物,分別研究醇提物對(duì)酪氨酸酶單酚酶活性和酪氨酸酶二酚酶活性的抑制效果。在pH6.8的磷酸緩沖液中,25℃條件下,底物L(fēng)-酪氨酸和L-DOPA被酪氨酸酶催化,經(jīng)過(guò)一系列的氧化反應(yīng)生成產(chǎn)物多巴色素,其在475nm波長(zhǎng)處有最大吸收(A475nm) 。
酪氨酸酶單酚酶(Monophenolase)酶活測(cè)定:依次加入0.3mL的10mmol/L磷酸緩沖液(pH6.8),2mL的1mmol/L L-酪氨酸,0.1mL樣品水溶液,0.1mL的200U/mL蘑菇酪氨酸酶,混勻,25℃水浴10min后,開始測(cè)其在波長(zhǎng)475nm吸光度,每1min測(cè)一次,共測(cè)15次。先以反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),表示酶促反應(yīng)產(chǎn)物生成的增長(zhǎng)曲線,按公式(2)計(jì)算抑制率。計(jì)算不同質(zhì)量濃度醇提物在一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)對(duì)酪氨酸酶的抑制率,并以抑制率為縱坐標(biāo),反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo)作圖。
式中:A和A1分別表示空白和含抑制劑條件下在475nm波長(zhǎng)處的吸光度。
酪氨酸酶二酚酶(Diphenolase)酶活測(cè)定:依次加入0.8mL 10mmol/L磷酸緩沖液(pH6.8),1.5mL 1.5mmol/L的L-DOPA,0.1mL樣品水溶液,0.1mL 200U/mL蘑菇酪氨酸酶,混勻,25℃水浴10min后,開始測(cè)其在波長(zhǎng)475nm處吸光度,每10s測(cè)一次,共測(cè)30次。先以反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),表示酶促反應(yīng)產(chǎn)物生成的增長(zhǎng)曲線,按公式(3)計(jì)算抑制率。計(jì)算不同質(zhì)量濃度醇提物在一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)對(duì)酪氨酸酶的抑制率,并以抑制率為縱坐標(biāo),反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo)作圖。上述酶活的測(cè)定均以曲酸作為陽(yáng)性對(duì)照[16]。
式中:A和A1分別表示空白和含抑制劑條件下在475nm波長(zhǎng)處的吸光度。
將新鮮蘋果洗凈,晾干,去皮,制成大小均一、厚度為1.5cm的切片。將這些切片分別浸泡在50mL的0.5g/100mL抗壞血酸溶液、0.03g/100mL湘蓮紅衣醇提物溶液、0.05g/100mL蓮子紅衣醇提物溶液、0.5g/100mL抗壞血酸+0.03g/100mL蓮子紅衣醇提物溶液、0.5g/100mL抗壞血酸+0.05g/100mL蓮子紅衣醇提物溶液中,5min后取出,瀝干,室溫下保存,開始計(jì)時(shí),用色差計(jì)分別測(cè)其在0、1、2、3、4、5h時(shí)L*(黑白色度)、a*(紅綠色度)、b*(黃褐色度)。
1.9.1 數(shù)據(jù)處理
提取物對(duì)清除自由基效力、抑制酪氨酸酶活性反應(yīng)模式:醇提物抗氧化和抗褐變活性的動(dòng)力學(xué)模型,可用公式(4)~(6)表示。
式中:ρ為抗氧化劑質(zhì)量濃度/(mg/mL);k為比例常數(shù);A為任一抗氧化質(zhì)量濃度對(duì)自由基的清除率/%;A*為當(dāng)平衡時(shí)對(duì)自由基的清除率/%。
以-ln(1-(A/A*))對(duì)抗氧化物質(zhì)量濃度做圖,求線性回歸曲線,由圖形的斜率(回歸曲線方程式的一次項(xiàng)系數(shù))即可求得抗氧化常數(shù)(k),求得IC50。
1.9.2 統(tǒng)計(jì)分析
使用Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,經(jīng)SPSS19.0軟件Duncan法檢驗(yàn)差異顯著性。
通過(guò)福林酚法,測(cè)得蓮子紅衣醇提物中的總酚含量為(233.63±10.16)mg/g;通過(guò)亞硝酸鈉-硝酸鋁法,測(cè)得醇提物中總黃酮含量為(166.02±7.31)mg/g。
圖 1 不同質(zhì)量濃度蓮子紅衣醇提物及陽(yáng)性對(duì)照Trolox對(duì)ABTS+·的清除能力Fig.1 ABTS+· scavenging activity of the ethanol extract and Trolox at various concentrations
由圖1可知,在反應(yīng)的初始階段(前2min),當(dāng)蓮子紅衣醇提物的質(zhì)量濃度分別為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mg/mL時(shí),ABTS+·的清除率分別為13.28%、20.34%、28.11%、33.62%、41.81%。清除率在30min內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定。反應(yīng)30min后,上述質(zhì)量濃度的醇提物對(duì)ABTS+·的清除率分別升高至18.06%、32.39%、43.58%、55.37%、63.43%。由此可見(jiàn),在一定時(shí)間范圍內(nèi),醇提物對(duì)ABTS+·的清除率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而提高。結(jié)果還表明,醇提物在清除ABTS+·時(shí)也存在質(zhì)量濃度依賴關(guān)系,質(zhì)量濃度越大,其清除率越高。通過(guò)線性回歸,得出醇提物的半抑制質(zhì)量濃度(IC50)為(1.385±0.210)mg/mL,其陽(yáng)性對(duì)照物Trolox的IC50為(0.175±0.011)mg/mL,可見(jiàn)醇提物清除ABTS+·的效果較為顯著。
酪氨酸酶催化反應(yīng)可分兩個(gè)階段,L-酪氨酸先羥基化成L-多巴,然后L-多巴氧化成多巴醌,進(jìn)而一系列反應(yīng)生成引起褐變的色素物質(zhì),即酪氨酸酶的單酚酶活性階段和其二酚酶活性階段[19]。因此,測(cè)定了醇提物對(duì)酪氨酸酶分別以L-酪氨酸和L-多巴為底物的反應(yīng)劑量影響。如圖2所示,當(dāng)蓮子紅衣醇提物的質(zhì)量濃度分別為2、4、8、12、16mg/mL時(shí),反應(yīng)2min時(shí),單酚酶的活性分別下降了53.64%、73.64%、78.18%、59.09%、55.44%。同樣上述系列質(zhì)量濃度的醇提物在反應(yīng)50s時(shí),二酚酶活性則分別下降了25.56%、50.56%、53.33%、67.78%、59.89%(圖3)。但在質(zhì)量濃度范圍4~16mg/mL間,醇提物對(duì)單酚酶和二酚酶的抑制效果并沒(méi)有觀察到明顯的量效關(guān)系,且反應(yīng)很快就達(dá)到了穩(wěn)定。通過(guò)線性回歸,測(cè)得醇提物對(duì)單酚酶和二酚酶活性的IC50分別為(1.665±0.137)mg/mL和(3.777±0.294)mg/mL,陽(yáng)性對(duì)照曲酸對(duì)單酚酶和二酚酶活性的IC50分別為(0.021±0.003)mg/mL和(0.068±0.006)mg/mL??梢?jiàn)蓮子紅衣醇提物對(duì)酪氨酸酶活性具有一定的抑制效果。
圖 2 不同質(zhì)量濃度蓮子紅衣醇提物及曲酸對(duì)蘑菇酪氨酸酶單酚酶活性的抑制效果Fig.2 Inhibitory effects of the ethanol extract and kojic acid at various concentrations on monophenolase
圖 3 不同質(zhì)量濃度蓮子紅衣醇提物及曲酸對(duì)蘑菇酪氨酸酶二酚酶活性的抑制效果Fig.3 Inhibitory effects of the ethanol extract and kojic acid at various concentrations on diphenolase
圖 4 不同處理對(duì)鮮切蘋果色澤的影響Fig.4 Effects of different treatments on the L*, a* and b* values of fresh-cut apples
通過(guò)測(cè)定對(duì)鮮切蘋果片自然褐變的影響,進(jìn)一步證實(shí)醇提物的抗褐變能力。L*值與褐變程度存在負(fù)相關(guān)關(guān)系,a*值和b*值與褐變程度存在正相關(guān)關(guān)系。由圖4可知,抗蘋果褐變能力大小依次為0.5g/100mL VC+0.05g/100mL蓮子紅衣醇提物>0.5g/100mL VC+0.03g/100mL蓮子紅衣醇提物>0.5g/100mL VC>0.05g/100mL蓮子紅衣醇提物>0.03g/100mL蓮子紅衣醇提物>空白對(duì)照(水)。和空白對(duì)照組的L*相比,0.05%醇提物和0.03g/100mL醇提物溶液均有顯著抗褐變效果(P<0.05)。當(dāng)0.05g/100mL醇提物和0.03g/100mL醇提物分別與0.5g/100mL VC組合后,抗褐變效果也顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組0.5g/100mL VC溶液(P<0.05)。但在0.05g/100mL醇提物和0.03g/100mL醇提物兩組溶液處理之間,并沒(méi)有觀察到非常顯著的差異(P>0.05)。
我國(guó)為產(chǎn)蓮大國(guó),蓮子在加工生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生大量的紅衣粉,目前多被當(dāng)作廢棄物而浪費(fèi),至今沒(méi)有得到很好的應(yīng)用,但在先前的初步研究中發(fā)現(xiàn)這些廢棄物中不乏豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和活性成分[2-4],因而本研究以此為著眼點(diǎn)展開更深入的探索,希望為新資源的開發(fā)利用提供更多的理論依據(jù)。
經(jīng)本研究測(cè)定蓮子紅衣醇提物中含有較多的多酚和總黃酮類化合物,其含量分別為233.63mg/g和166.02mg/g。眾多研究表明多酚和黃酮類物質(zhì)都是天然的抗氧化劑[20],如茶多酚和銀杏葉黃酮等。多酚結(jié)構(gòu)中的酚羥基可作為供氧體與自由基反應(yīng),使之生成相應(yīng)的離子或分子,淬滅自由基,終止自由基的鏈鎖反應(yīng),從而表現(xiàn)其抗氧化活性[21];而黃酮化合物可以和金屬離子如銅離子等結(jié)合,催化脂質(zhì)氫過(guò)氧化物的分解反應(yīng),引起自由基的減少[22]。在本研究中,蓮子紅衣醇提物對(duì)ABTS+·顯示出了較強(qiáng)的抑制作用,當(dāng)質(zhì)量濃度為2.0mg/mL時(shí),對(duì)ABTS+·的清除率可達(dá)63.43%。
目前,茶多酚已被廣泛應(yīng)用于果蔬的保鮮[20],也有研究表明銀杏葉片提取液對(duì)蘋果具有良好的保鮮效果。鮮切蘋果褐變的發(fā)生多因蘋果中酚酶催化反應(yīng)的進(jìn)行,致使多酚等還原性物質(zhì)被氧化,因此,抗褐變能力的體現(xiàn)可能也與其中活性物質(zhì)的抗氧化活性具有內(nèi)在聯(lián)系。本研究選取與皮膚色素沉積、果蔬和魚蝦褐變等現(xiàn)象密切相關(guān)的酪氨酸酶為研究對(duì)象,分別測(cè)定了湘蓮紅衣醇提物對(duì)其單酚酶和二酚酶活性的抑制能力。酪氨酸酶是一種含銅離子的氧化還原酶,是催化L-酪氨酸氧化形成黑色素的反應(yīng)的一種關(guān)鍵酶,同時(shí)具有單酚酶和二酚酶的活性[19]。結(jié)果顯示,在蓮子紅衣醇提物質(zhì)量濃度為4mg/mL時(shí),對(duì)單酚酶和二酚酶活性的抑制率分別可達(dá)73.64%和50.56%。經(jīng)各種質(zhì)量濃度蓮子紅衣醇提物溶液處理的鮮切蘋果的褐變過(guò)程也明顯得到了延緩,尤其是當(dāng)0.05g/100mL蓮子紅衣醇提物和0.5g/100mLVC聯(lián)合使用時(shí)抗褐變效果更佳。這可能是蓮子紅衣醇提物中的黃酮類化合物和酪氨酸酶中的銅離子絡(luò)合,阻止氧化還原反應(yīng),從而抑制酶促褐變。但隨著蓮子紅衣醇提物質(zhì)量濃度的增加,其對(duì)酪氨酸酶活性以及鮮切蘋果褐變程度的抑制能力并沒(méi)有顯著提高,推測(cè)當(dāng)蓮子紅衣醇提物質(zhì)量濃度為4mg/mL時(shí)所含的黃酮物質(zhì)與酪氨酸酶中的銅離子的絡(luò)合已幾乎達(dá)飽和狀態(tài),而酶促褐變的產(chǎn)生還有其他途徑。
綜上所述,蓮子紅衣醇提物中含有豐富的多酚和黃酮類化合物,并且在清除ABTS+·、抑制酪氨酸酶活性、抗蘋果褐變等方面都展示了良好的功效。因此,湘蓮紅衣粉可以作為提取天然抗氧化和褐變抑制劑的潛在資源而具有被深入開發(fā)的良好前景。在今后的研究中,蓮子紅衣提取物的抑菌作用等功能還需要繼續(xù)探索。
[1] 蔡和暉, 廖森泰, 施英, 等. 蓮的利用價(jià)值和產(chǎn)品開發(fā)思路[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工, 2008(4): 40-43.
[2] 曹楊, 徐虹, 王靜, 等. 蓮天然產(chǎn)物及其生物活性研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技, 2012, 33(8): 402-405.
[3] 徐虹, 王馨儀, 曹楊, 等. 蓮子紅皮蛋白微波輔助鹽提工藝優(yōu)化[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(4): 87-91.
[4] 徐虹, 朱雨薇, 曹楊, 等. 蓮子紅皮多糖提取工藝研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2011(2): 266-268.
[5] ZENG Weicai, JIA Lirong, ZHANG Yan, et al. Antibrowning and antimicrobial activities of the water-soluble extract from pine needles of Cedrus deodara[J]. Journal of Food Science, 2011, 76(2): 318-323.
[6] 陳君琛, 李怡彬, 吳俐, 等. 大球蓋菇黃酮類化合物提取及抑菌性研究[J]. 北京工商大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2010, 28(6): 9-13.
[7] 朱彩平, 夏德水. Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定石榴皮提取物中的多酚[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室, 2012, 29(3): 1356-1360.
[8] ALINE M, LAMIEN C E, ROMITOM, et al. Determination of the total phenolic, flavonoid and proline contents in Burkina Fasan honey, as well as their radical scavenging activity[J]. Food Chemistry, 2005, 91(3): 571-577.
[9] 盧文蕓, 許文琴, 于錫忠, 等. 貴州野生蕨菜中總黃酮含量的測(cè)定與分析[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(5): 47-49.
[10] 董捷, 張紅城, 秦健, 等. 十種蜂花粉醇提物中總多酚和總黃酮含量測(cè)定[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(12): 246-249.
[11] ARTS M, DALLINGA S, VOSS H, et al. A new approach to assess the total antioxidant capacity using the TEAC assay[J]. Food Chemistry, 2004, 88: 567-570.
[12] RE R, PELLEGRINI R, PROTEGGENTE A, et a1.Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay[J]. Free Rad Biol Med, 1999, 26(1): 1231-1237.
[13] CHEN Q X, KUBO I. Kinetics of mushroom tyrosinase inhibition by quercetin[J]. J Agric Food Chem, 2002, 50(14): 4108-4112.
[14] CHEN Q X, SONG K K, WANG Q, et al. Inhibitory effects of mushroom tyrosinase by some alkylbenzaldehydes [J]. J Enzy Inhibit Med Chem, 2003, 18(6): 491-496.
[15] 杜凌云, 咸小丹, 岳巧秀. 奧扎格雷對(duì)蘑菇酪氨酸酶的抑制動(dòng)力學(xué)[J]. 常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào), 2010, 3(3): 42-47.
[16] 金一瓊, 陳周譚, 賴富饒, 等. 曲酸與阿魏酸對(duì)酪氨酸酶的抑制作用研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2012, 28(4): 378-381.
[17] 齊海萍, 胡文忠, 姜愛(ài)麗, 等. 幾種抗褐變劑對(duì)鮮切富士蘋果褐變的抑制效果[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(4): 358-360.
[18] 董婕, 張紅城, 李慧, 等. 八種蜂花粉醇提取物的體外抗氧化能力研究[J]. 營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2010, 32(3): 309-312.
[19] 陳桂霞, 邱凌, 宋康康, 等. 桑黃素對(duì)蘑菇酪氨酸酶的抑制作用[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2006, 45(3): 424-427.
[20] 王佩華, 趙大偉, 遲彩霞, 等. 天然抗氧化劑茶多酚在食品貯藏保鮮中的應(yīng)用[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(3): 210-213.
[21] 張永忠, 陳學(xué)穎, 孫艷梅. 四種異黃酮抗氧化活性的比較研究[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(2): 383-386.
[22] 李娜, 魯曉翔. 酪氨酸酶抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技, 2010, 31(7): 406-409.