吳崇珍，李玉賢，袁 珂，王 勇，張澤志，王艷坤

1)河南教育學(xué)院化學(xué)系 鄭州 450046 2)河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 鄭州 450008 3)浙江農(nóng)林大學(xué)林生院 臨安 311300

含羞草具有安神止痛、化痰止咳、清熱利尿等功效，主要分布在我國(guó)熱帶、亞熱帶地區(qū)，資源豐富，便于采集[1]。從含羞草中已相繼分離出黃酮苷類(lèi)、酚類(lèi)、皂苷等化合物[2-5]。作者分別用回流提取、微波萃取、超聲提取[6]、滲漉提取、冷浸提取、索氏提取6種方法對(duì)含羞草總黃酮進(jìn)行提取，同時(shí)以蘆丁作對(duì)照品進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定，比較提取效率，探討含羞草總黃酮的最佳提取方法。

1 材料、方法與結(jié)果

1.1材料與儀器含羞草樣品采自海南三亞，由海南大學(xué)藥用植物學(xué)教授黃世滿鑒定為豆科含羞草；蘆丁對(duì)照品從中國(guó)藥品生物制品鑒定所購(gòu)買(mǎi)。 實(shí)驗(yàn)所需儀器如下：UV-2102PCS紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海龍尼柯儀器有限公司)，KQ-250B超聲波提取器(昆山市超聲儀器有限公司)，NJL07-3型實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用微波爐(南京杰全微波設(shè)備有限公司，額定功率800 W)，Millipore Sim-plicity型超純水器(美國(guó)Millipore公司)，RE-52A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，真空薄膜濃縮裝置(自裝[7])，101-1型電熱恒溫干燥箱，微量分析天平(EETTLER AE 240，瑞士)，微孔濾膜(上海醫(yī)藥工業(yè)研究院)。

1.2含羞草樣品中總黃酮的提取

1.2.1 回流提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎并過(guò)60目篩的含羞草3份，每份20 g，分別置于圓底燒瓶中，在80 ℃恒溫水浴鍋中，加200 mL體積分?jǐn)?shù)60%乙醇，回流3 h，提取 3 次。提取后抽濾，合并提取液，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，定量轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)60%乙醇稀釋定容至刻度，搖勻。

1.2.2 微波萃取 準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎并過(guò)60目篩的含羞草3份，每份20 g，分別置于微波爐中，用體積分?jǐn)?shù)60%乙醇微波萃取，將提取液蒸發(fā)濃縮，定量轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)60%乙醇定容至刻度，搖勻。

1.2.3 超聲提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎并過(guò)60目篩的含羞草3份，每份20 g，用回流提取所用溶劑超聲提取，將提取液蒸發(fā)濃縮，余同1.2.2。

1.2.4 滲漉提取 同回流提取準(zhǔn)確稱(chēng)取過(guò)篩的含羞草，用回流提取所用溶劑滲漉提取，將滲漉液濃縮，余同1.2.2。

1.2.5 冷浸提取 同回流提取準(zhǔn)確稱(chēng)取過(guò)篩的含羞草，用回流提取所用溶劑冷浸提取，將提取液濃縮，余同1.2.2。

1.2.6 索氏提取 同回流提取準(zhǔn)確稱(chēng)取過(guò)篩的含羞草，用回流提取所用溶劑進(jìn)行索氏提取，將提取液濃縮，余同1.2.2。

1.3含羞草樣品中總黃酮含量的測(cè)定

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取烘干至恒重的蘆丁對(duì)照品，配成質(zhì)量濃度為0.128 g/L的蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。用吸量管準(zhǔn)確取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于6只10 mL容量瓶中，參考文獻(xiàn)[2]的對(duì)應(yīng)步驟依次測(cè)定其吸光度(A)，以蘆丁質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：A=9.050 6C+0.006 8(R2=0.999 6)。

1.3.2 樣品測(cè)定 分別準(zhǔn)確吸取上述6種提取方法所得的提取液 2 mL，置于25 mL容量瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)60%乙醇定容至刻度，搖勻，此為稀釋分析液。取稀釋分析液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，按照1.3.1項(xiàng)所述的方法進(jìn)行測(cè)定，按回歸方程計(jì)算出樣品溶液中的總黃酮質(zhì)量濃度，根據(jù)稀釋倍數(shù)及樣品質(zhì)量計(jì)算出樣品中總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.4結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 6種提取方法提取的總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的比較

兩兩比較，P均<0.05。

2 討論

采用6種不同的提取方法對(duì)含羞草總黃酮進(jìn)行提取，提取效率依次為：超聲提取>微波萃取>回流提取>滲漉提取>索氏提取>冷浸提取。其中，超聲提取法、微波萃取法和回流提取法的提取效率較高。

分析比較可知，超聲提取含羞草中的總黃酮成分完全，提取效率較高，節(jié)省溶劑和能源，被提取的黃酮成分不易被破壞。微波萃取提取出的有效成分量稍低于超聲法，是由微波輻射所引起的短時(shí)高溫對(duì)其中的熱敏性黃酮成分的影響所致，但微波萃取的時(shí)間更短，有快速高效的特點(diǎn)。回流提取時(shí)間較長(zhǎng)，溶劑用量較大，因溶液長(zhǎng)時(shí)間受熱，存在黃酮成分在持續(xù)較高溫度下可能發(fā)生變化并流失的問(wèn)題。

綜上所述，含羞草總黃酮的提取工藝有多種，從提取效率和總黃酮成分的熱穩(wěn)定性考慮，應(yīng)優(yōu)選超聲提取和微波萃取。

[1] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局編委會(huì).中華本草：第4卷[M]. 上海:上?？萍汲霭嫔?1999：573

[2] 袁珂, 呂潔麗, 殷明文.海南含羞草中黃酮碳苷類(lèi)化學(xué)成分的研究[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2006,41(5):435

[3] 袁珂, 賈安, 呂潔麗, 等. 含羞草中新黃酮碳苷的結(jié)構(gòu)鑒定[J].分析化學(xué), 2007, 35(5):739

[4] 吳崇珍, 王艷坤, 李玉賢, 等. 含羞草組成成分藥學(xué)研究進(jìn)展[J].河南教育學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 22(1):27

[5] Zhang J, Yuan K, Zhou WL, et al. Studies on the active components and antioxidant activities of the extracts ofMimosapudicaLinn. from the southern of China[J]. Pharmacogn Mag， 2011,7(25):35

[6] 喬文濤, 張靜, 俞凌雁, 等. 含羞草中總黃酮提取純化工藝研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2009, 20(8):1986

[7] 袁珂, 俞莉. 真空薄膜濃縮裝置的研制及應(yīng)用研究[J]. 分析化學(xué),2005,33(9):1358