黃 濤 王海僑 (廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬佛山中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣東 廣州 528000)

血小板活化和纖溶系統(tǒng)的激活是急性腦梗死(ACI)微血栓形成的核心病理環(huán)節(jié)〔1，2〕，在ACI缺血以及缺血-復(fù)流腦損害的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中均起著十分關(guān)鍵的作用〔3〕。纖維蛋白原受體(PAC-1)和P選擇素(CD62p)是目前檢測(cè)早期和晚期血小板活化程度和功能狀態(tài)的特異性標(biāo)志物〔4〕。D-二聚體(D-Dimer)是體內(nèi)纖溶亢進(jìn)和高凝狀態(tài)的交聯(lián)纖維蛋白降解產(chǎn)物，是反映體內(nèi)纖溶亢進(jìn)和高凝狀態(tài)的敏感指標(biāo)〔5〕。本研究擬探討PAC-1、CD62p和D-Dimer表達(dá)水平與ACI患者梗死體積的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年1月至2011年1月廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬佛山中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的ACI患者58例，男30例，女28例，年齡40～84〔平均(67.2±7.24)〕歲。發(fā)病到就診時(shí)間為4 h～6 d，所有患者均符合1995年全國(guó)第四屆腦血管病會(huì)議制定的ACI診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)過(guò)頭顱CT或者M(jìn)RI確診，并排除其他存在的凝血性疾病以及血栓。

1.2 PAC-1、CD62p和D-Dimer表達(dá)的檢測(cè) 所有患者于入院后1 d以及治療后14 d清晨空腹采集靜脈血3管，每管各4 ml，其中1、2管為對(duì)照管和實(shí)驗(yàn)管，每管先抽取5 μl全血，剩余全血分別置入FL1及FL2的補(bǔ)償管中。加入異硫氰酸熒光素(FITC)-IgM、巰基抗體(PE)-IgG1及 PerCP-CD61單抗各20 μl。另將剩余的全血中分別加入 FITC-IgM、PerCD62p及 PerCPCD61單抗各20 μl。實(shí)驗(yàn)管分別加入 FITC-PAC1、PE-CD62p及PerCP-CD61單抗各20 μl。剩余的 FL2補(bǔ)償管中加入 FITCPAC1、PE-IgG1 及 PerCP-CD61 單抗各 20 μl。避光 20 min 后1%PFA 250 μl固定 10 min，流式細(xì)胞儀 FACS Calibur(美國(guó)B.D公司)檢測(cè)PAC-1和CD62p的陽(yáng)性表達(dá)率。第3管用于測(cè)定D-Dimer水平(日本SYSMEX全自動(dòng)血栓/止血分析儀)。

1.3 梗死灶體積的計(jì)算 采用Pullicino公式計(jì)算梗死灶體積公式:梗死灶體積=長(zhǎng)×寬×CT或MRT掃描陽(yáng)性層數(shù)/2。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料采用s表示，多組間的對(duì)比采用單因素方差分析，兩組對(duì)比采用t檢驗(yàn)，并用直線分析行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 梗死體積大小與ACI患者PAC-1、CD62p和D-Dimer含量的關(guān)系 PAC-1和CD62p水平與梗死體積大小有明顯的直線關(guān)系，梗死體積越大，PAC-1和CD62p水平越高。而ACI患者血漿D-Dimer水平只有在大面積梗死的ACI患者中才顯著升高。見(jiàn)表1。

表1 梗死體積大小與ACI患者PAC-1、CD62p和D-Dimer含量的關(guān)系(s)

表1 梗死體積大小與ACI患者PAC-1、CD62p和D-Dimer含量的關(guān)系(s)

與小體積梗死組比較:1)P＜0.01;與中體積梗死組比較:2)P＜0.01

組別 n(男/女)年齡(歲)PAC-1(%)CD62p(%)D-Dimer(μg/L)小體積梗死組 32(17/15)66.189 1±17.004 1 0.490 1±0.298 2 3.299 4±1.082 2 331.880 2±169.004 9中體積梗死組 15(6/9)58.444 0±14.300 8 0.959 8±0.375 01) 5.639 1±0.868 41) 298.779 2±282.396 0大體積梗死組 11(7/4)70.122 1±11.826 9 1.649 8±0.611 62) 7.107 2±1.692 42) 579.247 7±217.550 62)

2.2 梗死體積與ACI患者PAC-1和CD62p含量的相關(guān)性分析 經(jīng)直線分析，PAC-1和CD62p水平均與梗死體積存在明顯相關(guān)性，梗死體積越大，ACI患者PAC-1和CD62p水平也越高，血小板活化也越強(qiáng)。見(jiàn)表2。

表2 梗死體積與ACI患者PAC-1和CD62p含量的相關(guān)性分析

3 討論

PAC-1是反映血小板活化的早期標(biāo)志物〔4〕，血小板膜糖蛋白在血栓形成過(guò)程中及受損血管血小板黏附過(guò)程中均起著重要的作用〔6〕。對(duì)血小板表面PAC-1表達(dá)的檢測(cè)能夠反映血小板早期活化的情況。CD62p是血小板α顆粒釋放后的標(biāo)志物，血小板在組胺、腫瘤壞死因子、氧自由基、凝血酶等因子刺激時(shí)會(huì)被激活，從而使原來(lái)存在于血小板胞質(zhì)內(nèi)的糖蛋白CD62p得以迅速表達(dá)于血小板活化后的內(nèi)皮細(xì)胞上，最終成為晚期血小板活化的特異性指標(biāo)〔6〕。D-Dimer為纖維蛋白降解產(chǎn)物中最小的片段，是體內(nèi)纖溶亢進(jìn)的分子標(biāo)志物以及高凝狀態(tài)的標(biāo)志物，是反映機(jī)體凝血/纖溶系統(tǒng)的敏感指標(biāo)之一〔5〕。近年來(lái)研究表明血栓溶解與D-Dimer水平的降低存在直接相關(guān)性〔5〕。當(dāng)機(jī)體處于凝血狀態(tài)時(shí)，凝血酶會(huì)促進(jìn)纖維蛋白轉(zhuǎn)變成為交聯(lián)纖維蛋白，纖溶系統(tǒng)同時(shí)被激活、降解，最終形成D-Dimer的碎片。D-Dimer水平上升表明機(jī)體凝血系統(tǒng)以及纖溶系統(tǒng)被雙重激活，從而反映全身或局部血管內(nèi)凝血和繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)〔5〕。因此，檢測(cè)ACI患者的D-Dimer水平變化對(duì)判定溶栓治療療效及血栓形成均有重要的意義。

李軍等〔7〕研究表明腦梗死急性期患者的PAC-1、CD62p表達(dá)水平，大梗死灶組＞中梗死灶組＞小梗死灶組。顯示PAC-1、CD62p表達(dá)水平與梗死灶的大小呈顯著正相關(guān)。陳軍等〔8〕研究也顯示PAC-1和CD62p的表達(dá)水平與梗死灶面積呈密切相關(guān)性，表明梗死灶面積越大，患者體內(nèi)PAC-1和CD62P的表達(dá)水平就越高，血小板活化的程度也越強(qiáng)。葛京平等〔9〕對(duì)腦梗死患者急性期血小板行透射電鏡掃描顯示，梗死灶面積大的患者α顆粒數(shù)量顯著高于梗死灶面積小的患者，提示血小板活性增強(qiáng)導(dǎo)致線粒體被消耗，從而使α顆粒被激活，α顆粒等活性物質(zhì)釋放會(huì)加重缺血性損害，從而最終導(dǎo)致腦梗死癥狀的進(jìn)一步惡化。

本組研究也顯示，ACI患者的PAC-1和CD62p表達(dá)水平與梗死灶體積呈密切相關(guān)性，梗死灶體積越大，患者的PAC-1和CD62p表達(dá)水平越高，可能因?yàn)檠“寤罨螃令w粒分泌產(chǎn)物能夠通過(guò)血腦屏障，造成腦組織損害，導(dǎo)致腦卒中惡化，并能夠促進(jìn)各種炎性物質(zhì)生成，從而加重炎癥、水腫，并擴(kuò)大梗死灶的面積。而本組研究表明D-Dimer的表達(dá)水平與梗死灶體積增大無(wú)相關(guān)性，只有在ACI患者中存在大體積梗死者，其血漿DDimer水平才會(huì)存在較為明顯的升高，與許多學(xué)者的報(bào)道不同〔10〕。其原因在于ACI早期中小體積梗死患者的纖溶系統(tǒng)并未完全激活，使D-Dimer水平表達(dá)不明顯;當(dāng)梗死灶體積增大時(shí)，血中纖溶系統(tǒng)被完全激活，從而導(dǎo)致交聯(lián)纖維蛋白降解產(chǎn)物D-Dimer增加。

綜上所述，PAC-1、CD62p和D-Dimer參與了ACI血栓形成和腦缺血后再灌注損傷，三者不僅在ACI發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，而且與ACI患者梗死體積大小關(guān)系密切。PAC-1和CD62p含量隨著ACI患者梗死體積的增大逐漸增高，呈明顯的正相關(guān)。由于病例數(shù)偏少，本實(shí)驗(yàn)只粗略地評(píng)估了PAC-1、CD62p和D-Dimer含量與ACI患者梗死體積之間的線性關(guān)系，更全面、系統(tǒng)、客觀評(píng)估期待今后更大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)研究。

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