高秀娟 林 清 姚榮妹 馬會霞 江春花 孫 娜 李繼安

(河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

糖尿病(DM)是一種常見的、多發(fā)的內(nèi)分泌代謝疾病，現(xiàn)已成為僅次于腫瘤和心血管疾病之后的第3大疾病。其中2型糖尿病(T2DM)占90%以上，據(jù)估計我國現(xiàn)有糖尿病患者達3～4千萬，居世界第2位〔1〕。根據(jù)DM的中醫(yī)辨治規(guī)律，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究的最新進展，組成了治療DM的系列方劑，本文觀察雙黃降糖膠囊對DM大鼠血糖、糖耐量及血脂的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料 ①Wistar大鼠，雄性，體重180～220 g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證SLXK(京)2009-0004。高脂飼料由北京維通利華實驗動物有限公司提供。②藥品及試劑:雙黃降糖膠囊由黃芪、黃連等四味中藥組成，飲片購自北京同仁堂唐山連鎖藥店有限公司，膠囊采用公知的中藥膠囊制備方法制作，由唐山市中醫(yī)院制劑科加工;二甲雙胍(北京四環(huán)制藥有限公司)批號090401;鏈脲佐菌素(STZ)(西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司)批號B56981;康博士血糖試紙(上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)批號S09C19202;其余分析試劑盒購于中生北控生物科技股份有限公司，總膽固醇(TC)批號090901、甘油三酯(TG)批號093471、尿素氮(BUN)批號:090621。③主要儀器:血糖儀AGM-2300，Microlab300半自動生化分析儀。

1.2 造模方法 將雄性健康Wistar大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，高脂飼料喂養(yǎng)6 w后，禁食不禁水12 h，腹腔注射STZ，劑量30 mg/kg，3 d后同樣方法腹腔注射STZ，劑量20 mg/kg，1 w后測空腹血糖及灌胃40%葡萄糖5 ml/kg后2 h測血糖，以空腹血糖≥11.1 mmol/L或餐后血糖≥16.7 mmol/L作為造模成功的指標(biāo)。

1.3 動物分組 造模初，將60只大鼠隨機抽出10只，作為空白對照組(Control)，普通飼料喂養(yǎng)。其余50只大鼠按照上述方法造模，造模成功的40只按體重隨機分為模型組(Model)、二甲雙胍組(MHT)和雙黃低劑量組(SHL)、雙黃高劑量組(SHH)，每組10只，分組給藥。SHL組:灌胃雙黃降糖膠囊，劑量2.5 g/kg;SHH組:灌胃雙黃降糖膠囊，劑量5 g/kg;MHT組:灌胃鹽酸二甲雙胍50 mg/kg;Model和Control:分別給予等體積生理鹽水灌胃。共給藥28 d。

1.4 檢測指標(biāo) 給藥后的第14天測空腹血糖1次。給藥后28 d，隔夜禁食不禁水12 h，測完空腹血糖后，灌胃40%葡萄糖5 ml/kg，并于給糖后30、60、120 min從尾靜脈采血測定血糖水平。然后10%水合氯醛麻醉動物，腹主動脈取血，測血清TC，TG，BUN水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5軟件對數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)分析。實驗數(shù)據(jù)用s表示，組間差異的顯著性采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 對模型大鼠空腹血糖的影響 MHT組與SHH、SHL組均有明顯地降低實驗性大鼠空腹血糖(FPG)的作用，其中MHT組降糖作用起效較快(P＜0.05，P＜0.01)。給藥后4 w SHL組血糖水平、MHT組血糖水平降至正常，見表1。

表1 雙黃降糖膠囊對各組大鼠FPG的影響( s，n=10，mmol/L)

表1 雙黃降糖膠囊對各組大鼠FPG的影響( s，n=10，mmol/L)

與Model組比較:1)P ＜0.05，2)P ＜0.01

2 w 4 w Control 4.689±0.9442) 5.867±1.5212) 5.689±1.4252)組別 灌胃前Model 14.510±2.649 16.390±2.960 17.460±2.668 MHT 14.320±3.3371) 9.510±2.4662) 5.830±1.3382)SHH 16.110±2.7771) 12.110±2.0042) 8.620±2.0292)SHL 14.570±3.0531) 12.350±2.2642) 6.380±2.8242)

2.2 對各組大鼠糖耐量的影響 Control組，口服葡萄糖后30 min血糖值達到頂峰，到120 min時血糖值已基本恢復(fù)到原水平;Model組小鼠血糖值頂峰時間在30 min，并且在此之后血糖值一直保持在較高的水平;MHT組與SHH、SHL組可改善小鼠的耐糖量，明顯降低升高的血糖值，與模型組比較有顯著性的差別(P＜0.01)。見表2。

2.3 對各組大鼠TC、TG、BUN的影響 與 Control組比較，Model組TC、TG、BUN值明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較，SHL組能明顯降低TC、TG、BUN水平(P＜0.01)。見表3。

表2 雙黃降糖膠囊對各組大鼠糖耐量的影響(s，n=10，mmol/L)

表2 雙黃降糖膠囊對各組大鼠糖耐量的影響(s，n=10，mmol/L)

與Model組比較:1)P＜0.05

30 min 60 min 120 min Control 9.656±1.9941) 7.767±1.9501) 4.911±1.8251)組別Model 28.750±5.729 25.680±5.515 19.190±1.947 MHT 22.370±5.1831) 15.710±2.9651) 7.050±2.1691)SHH 21.000±4.9931) 15.640±3.0451) 9.040±1.8911)SHL 21.090±3.9481) 15.850±2.2821) 8.290±5.3161)

表3 雙黃降糖膠囊對各組大鼠TC、TG、BUN的影響( s，n=10，mmol/L)

表3 雙黃降糖膠囊對各組大鼠TC、TG、BUN的影響( s，n=10，mmol/L)

與Model組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與 Control組比較:3)P＜0.05，4)P ＜0.01

TC TG BUN Control 10 3.956±0.306 1.311±0.352 6.100±1.組別 n 369 Model 10 5.720±0.290 2.230±0.747 10.960±4.157 MHT 10 4.990±0.2921) 1.800±0.2791) 9.920±2.2212)SHH 10 4.760±0.2901) 1.760±0.3031) 9.660±2.5842)SHL 10 4.600±0.2943) 1.610±0.4684) 7.860±2.3633)

3 討論

目前DM動物模型常用的方法為高脂飼料加小劑量STZ聯(lián)合誘發(fā)，先用高脂飼料喂養(yǎng)高脂飼料飼養(yǎng)2～4 w后，腹腔注射小劑量STE(一般為15～45 mg/kg，ip)誘導(dǎo)大鼠 T2DM模型〔2～4〕。此種方法高脂飼料造成外周組織對胰島素不敏感，加之STZ破壞一部分胰島β細胞功能，因此其模型比較接近于人T2DM模型。我們多次實驗研究發(fā)現(xiàn)，采取高脂飼料喂養(yǎng)4～6 w，然后分兩次小劑量(30、20 mg/kg)腹腔注射STZ，造模成功率較高，模型穩(wěn)定，死亡率較低，值得推廣。

T2DM的病因及發(fā)病機制異常復(fù)雜，并發(fā)癥多，治療難度大。雖然目前治療糖尿病的藥物很多，其作用機制不同，藥效、副作用也不盡相同，但控制血糖仍是治療糖尿病和預(yù)防并發(fā)癥的關(guān)鍵所在。而中醫(yī)藥治療T2DM的優(yōu)勢在于可延緩DM并發(fā)癥，其治療機制表現(xiàn)為多靶點、多向性、多層面的藥理學(xué)特點，與西藥相比，中醫(yī)藥治療DM具有不可比擬的優(yōu)勢。我們依據(jù)T2DM屬中醫(yī)氣虛、陰虛為本，燥熱為標(biāo)的辯證特點組方，以黃芪益氣為主，輔以黃連、知母、地黃等清熱養(yǎng)陰，標(biāo)本兼顧，在臨床上取得了較好的效果。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)本方中單味黃芪、黃連既有降糖作用，且其單藥及復(fù)方對DM多種并發(fā)癥均有治療作用。黃芪多糖具有保護胰島β細胞，調(diào)節(jié)血糖，改善脂代謝和胰島素抵抗的作用，黃芪多糖能使人外周血單核細胞產(chǎn)生粒細胞集落刺激因子和粒-巨噬細胞集落刺激因子等造血細胞因子，有效促進小鼠、人骨髓和外周血造血干細胞的增殖，黃芪多糖能顯著增加糖尿病患者內(nèi)皮祖細胞的增殖能力〔5～7〕。

近年來，脂代謝紊亂與DM的相關(guān)性受到越來越多的重視，提出脂代謝異常為T2DM的原發(fā)性病理生理事件，并根據(jù)脂代謝紊亂常先于DM發(fā)病前數(shù)年存在這一事實，提議將DM改為“糖脂病”〔8〕。所以，DM防治上，在控制血糖的同時，應(yīng)積極調(diào)節(jié)脂代謝，糾正脂代謝紊亂。本研究發(fā)現(xiàn)SHL能降低血脂及BUN水平，與Model組比較差異顯著，說明本方還具有良好的調(diào)節(jié)血脂、改善腎功能，延緩DM并發(fā)癥發(fā)生的作用。但其具體的降糖降脂作用機制還有待進一步研究。

1 People's Daily Online.China has annual increase of 1.2million diabetes patients〔EB/OL〕.http://English.peopledaily.corn.cn/200011/14/eng 200011-/14-55-162.html，2008-02-29.

2 周迎生，高 妍.高脂喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素注射的糖尿病大鼠模型特征〔J〕.中國實驗動物學(xué)報，2005;13(3):154-9.

3 穆松牛，高 云.鏈尿佐菌素加高糖高脂飲食復(fù)制大鼠〔J〕.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008;18(2):19-22.

4 郭嘯華，劉志紅，李 恒，等.實驗性2型糖尿病大鼠模型的建立〔J〕.腎臟病與透析腎移植雜志，2000;9(4):351-5.

5 徐寒松，吳 青，謝曉云，等.黃芪多糖對2型糖尿病患者外周血內(nèi)皮祖細胞PI3K/Akt/eNOS信號通路的影響〔J〕.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2011;15(23):4272-6.

6 張仲平，洪介民.黃芪多糖對體外人骨髓造血祖細胞生成的影響〔J〕.中藥藥理與臨床，2000;16(1):16-7.

7 翁 玲，劉學(xué)英，劉 彥，等.黃芪多糖對小鼠骨髓及外周血造血干細胞的增殖及動員作用〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2003;23(3):306-9.

8 劉兆愛，甲吉芳，劉艷霞，等.脂代謝紊亂與2型糖尿病慢性并發(fā)癥關(guān)系分析〔J〕.實用心電學(xué)雜志，2008;17(3):187-8.