汝婷婷

【摘 要】目的 建立高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定阿托伐他汀血藥濃度的方法。方法 采用純乙腈超聲提取，高速離心沉淀蛋白后，以乙腈-乙酸銨緩沖液作為流動(dòng)相，PhenomenexLuna3μC18（2）100A（150×2.00mm3μm）反相色譜柱，在正離子模式下以電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 血漿中阿托伐他汀的線性范圍為0.1-20ng/mL，定量限為0.1ng/mL。方法回收率為96%～103%，日間、日內(nèi)RSD均小于6%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確，適用于阿托伐他汀人體血藥濃度的檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】阿托伐他汀；血藥濃度；高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）

阿托伐他汀鈣片是他汀類血脂調(diào)節(jié)藥，為3-羥基-3-甲基一戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶抑制劑，它能夠降低血漿膽固醇和脂蛋白水平，減少低密度脂蛋白的生成，臨床上用于家族性高膽固醇血癥、混合性高脂血癥等癥。因其降脂作用強(qiáng)，副作用小，在高脂血癥，特別是高膽固醇血癥的治療中得到廣泛應(yīng)用。本文建立了高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血漿樣品中的阿托伐他汀，本法專靈敏度高、重現(xiàn)性好，樣品處理方法簡(jiǎn)便。

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1材料和試劑

阿托伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；前處理所用乙腈為分析純，流動(dòng)相的乙腈為色譜純（德國(guó)MERCK）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水，由Milli-Q系統(tǒng)制作（美國(guó)Millipore公司）。

1.2液相色譜條件

液相色譜儀器為島津Prominence UFLC；色譜柱選用Phenomenex Luna3μC18（2）100A（150×2.00mm3μm）；柱溫40℃；流動(dòng)相：乙腈—乙酸銨緩沖液（乙酸銨5mmol/L、甲酸0.5%（v/v））（體積比6：4），等度洗脫；進(jìn)樣量10μL；流速保持在0.3mL/min。

1.3質(zhì)譜條件

質(zhì)譜儀器為美國(guó)AB公司的API4000Q-trap；電離方式：ESI（+）；選擇多重反應(yīng)監(jiān)（MRM）；電離電壓5500V，輔助加熱溫度500℃，氣簾氣30psi，霧化氣3psi，碰撞氣：中等，離子源氣體1：50psi，離子源氣體2：60psi。阿托他汀在ESI（+）[M+H]+的MRM模式下的質(zhì)譜。

1.4血漿樣品處理

精確量取血漿樣品0.5mL于10mL離心管中，準(zhǔn)確加入2.5mL乙腈，渦旋2min后，超聲10min，在 4500r/min轉(zhuǎn)速下離心5min。移取上清液用氮?dú)獯蹈?，?mL的50%乙腈水定容，過0.22μm濾膜，供LC-MS-MS分析。

2.結(jié)果與討論

2.1方法的線性范圍、 相關(guān)性及檢出限實(shí)驗(yàn)

以在血漿空白樣品基體中六點(diǎn)添加標(biāo)準(zhǔn)品法制作校正曲線，7點(diǎn)添加水平分別是0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL。按本文方法進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果表明，方法此范圍內(nèi)線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，當(dāng)信噪比S/N≥10時(shí)，定量下限LOQ為0.1ng/mL。

2.2方法的精密度和回收率

取空白血漿，分別精確加入適量的阿托伐他汀標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成濃度為0.2ng/mL、2ng/mL.10ng/mL的血漿樣品各6份，按1.4步驟處理在同日內(nèi)重復(fù)測(cè)定5次，并連續(xù)5天測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)、日間的精密度。得到的日內(nèi)精密度（RSD%）分別為2.62、3.11、1.97，日間精密度分別為3.55、5.65、4.98。阿托伐他汀0.2ng/mL、2ng/mL、10ng/mL三個(gè)水平濃度的測(cè)定回收率。

2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

取空白血漿.精確加入適量的阿托伐他汀標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別配制成濃度為0.5ng/mL和2ng/mL血漿溶液，按“1.4”項(xiàng)下血漿處理方法操作，分別于0、2、4、8、10h時(shí)進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積。結(jié)果，RSD分別為3.56%和4.14%。表明樣品血漿溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化討論

試驗(yàn)中比較了甲醇—乙酸銨緩沖液、乙腈—乙酸銨緩沖液、甲醇—水和乙腈—水[3-6]四種流動(dòng)相體系，結(jié)果表明，以乙腈—乙酸銨緩沖液作為流動(dòng)相得到的峰型最好，出峰時(shí)間也較穩(wěn)定。這可能由于水相中甲酸提高了待測(cè)物在ESI正離子電噴霧中的離子化效率，乙酸銨則使檢測(cè)物出峰時(shí)間較為穩(wěn)定。因此本文選擇用乙腈—乙酸銨緩沖液作為流動(dòng)相，得到的譜圖峰形的對(duì)稱、出峰時(shí)間和靈敏度均較理想。 [科]

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