胡 奇，李世芬，王玉翠，戴菲菲，鐘義紅，張成香，王玉邦（江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全性評價與研究中心，江蘇 南京 210029）

高血壓是最常見的心血管疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康。按2010年我國人口的數(shù)量與結(jié)構(gòu)推算，目前我國約有2億高血壓患者[1]。根據(jù)美國國家高血壓預(yù)防、診斷、評價與治療聯(lián)合委員會第7次報告（JNC-7）推薦，常用降血壓西藥主要有5類，分別是利尿劑、β-受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素受體拮抗劑（ARB）和鈣拮抗劑（CCB）[2]。降壓藥物的使用是高血壓病治療的主要措施，但是對于降壓藥的不良反應(yīng)特別是對生殖系統(tǒng)的不良反應(yīng)，報道較少。本研究從降血壓中選擇有代表性的藥物，分別是氫氯噻嗪（利尿劑）、比索洛爾（β-受體阻滯劑）、卡托普利（ACEI）、纈沙坦（ARB）和非洛地平（CCB），研究并比較它們的胚胎與發(fā)育毒性及其差異性。

1 資料與方法

1.1 一般資料：受試樣品氫氯噻嗪片為江蘇方強(qiáng)制藥廠有限責(zé)任公司生產(chǎn)；富馬酸比索洛爾片為Salutas Pharma GmbH生產(chǎn)；卡托普利片為上海長城藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；纈沙坦分散片為哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；非洛地平片為濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.2 動物來源與飼養(yǎng)：6～8周齡清潔級ICR小鼠，共200只，雌雄各半，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2008-0004。動物飼養(yǎng)于本中心SPF級屏障系統(tǒng)內(nèi)，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SCXK（蘇）2012-0041，環(huán)境溫度20～25℃，相對濕度40%～70%。實(shí)驗(yàn)動物飲用水為無菌水，輻照滅菌飼料由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動物飼料科技有限公司提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 劑量分組與樣品配制：各試驗(yàn)樣品的給藥劑量為治療高血壓患者推薦劑量的的10倍（按體表面積計(jì)算），氫氯噻嗪、比索洛爾、卡托普利、纈沙坦和非洛地平的劑量分別為210 mg/（kg·d）、21 mg/（kg·d）、310 mg/（kg·d）、330 mg/（kg·d）和21 mg/（kg·d），另設(shè)一個陰性對照組0 mg/（kg·d）。樣品用無菌水配制，各劑量組配制濃度分別為21 mg/ml、2.1 mg/ml、31 mg/ml、33 mg/ml和2.1 mg/ml，陰性對照組用無菌水代替受試物，灌胃給予受試物10 ml/（kg·d）。

1.3.2 動物處理：試驗(yàn)前檢疫7 d，按體重隨機(jī)分為氫氯噻嗪組、比索洛爾組、卡托普利組、纈沙坦組、非洛地平組和陰性對照組，每組雌、雄各15只，交配前所有動物給藥65 d（約等于小鼠2個生精周期）。雌鼠在交配期、妊娠期及產(chǎn)后4 d持續(xù)給藥至處死。雄鼠交配期及交配后持續(xù)給藥至處死。給藥65 d后，雌雄動物按照1:1同籠飼養(yǎng)。每天早晨檢查陰栓，檢查到陰栓的當(dāng)天記為妊娠第0天。

1.3.3 觀察指標(biāo)：仔鼠出生后第0天、第4天稱重。每窩在出生后檢查性別和數(shù)量，其他檢查包括：死胎、活胎、身材和外觀。親代母鼠檢查并記錄著床點(diǎn)和黃體的數(shù)目。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS 10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，方差齊時用單因素方差分析（One Way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD法，方差不齊則用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，仔鼠以窩為單位進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 降壓藥對胚胎死亡及出生后仔鼠死亡的影響：見表1～2。非洛地平胚泡著床后至出生前死亡數(shù)高于陰性對照組、比索洛爾組、卡托普利組與纈沙坦組（P＜0.05）。著床前死亡數(shù)和出生后死亡仔鼠數(shù)各劑量組與陰性對照組及兩兩組間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 降壓藥對胚胎死亡的影響

表2 降壓藥對出生后仔鼠死亡的影響

2.2 降壓藥對仔鼠存活率的影響：陰性對照組、比索洛爾組、非洛地平組、卡托普利組、氫氯噻嗪組與纈沙坦組出生0～4 d死亡率分別為2.4%、1.2%、0.9%、2.8%、4.1%、1.6%。出生4 d存活率分別為97.6%、98.8%、99.1%、97.2%、95.9%、98.4%。出生0～4 d死亡率、出生4 d存活率各劑量組與陰性對照組及兩兩組間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 降壓藥對仔鼠體重的影響：見圖1。卡托普利組出生0 d仔鼠重、出生4 d仔鼠重和每只仔鼠增重均高于陰性對照組（P＜0.05）。其他各組各項(xiàng)指標(biāo)與陰性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。比索洛爾組、非洛地平組、氫氯噻嗪組與纈沙坦組出生0 d仔鼠重均低于卡托普利組（P＜0.05）；比索洛爾組、氫氯噻嗪組與纈沙坦組出生4 d仔鼠重均低于卡托普利組（P＜0.05）；比索洛爾與纈沙坦組仔鼠增重均低于卡托普利組（P＜0.05）。

圖1 降壓藥對仔鼠體重的影響

2.4 降壓藥對外觀畸形和生長發(fā)育的影響：比索洛爾組（168只）有1只仔鼠出現(xiàn)身材短小，1只仔鼠出現(xiàn)卷尾；非洛地平組（109只）有1只仔鼠出現(xiàn)身材短??；卡托普利組（111只）有1只仔鼠出現(xiàn)身材短小、尾巴短且卷尾，另外2只仔鼠出現(xiàn)身材短??；氫氯噻嗪組（172只）有2只仔鼠出現(xiàn)身材短小；纈沙坦組（129只）未見明顯外觀畸形和生長遲緩；陰性對照組未見明顯畸形。

3 討論

高血壓是目前最常見的心血管疾病，現(xiàn)今雖已有多種降壓藥可供選擇，利尿劑、β-受體阻滯劑、ACEI、ARB和CCB均可作為初始和維持用藥，根據(jù)患者的危險因素、亞臨床靶器官損害以及臨床疾患情況，合理選擇和使用藥物。

本實(shí)驗(yàn)將各類降壓藥的胚胎和發(fā)育毒性進(jìn)行比較研究，試圖找出各類降壓藥在胚胎與發(fā)育毒性上表現(xiàn)的不同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示各類降壓藥對小鼠胚胎與發(fā)育毒性有明顯的不同。ACEI是應(yīng)用最廣泛的處方降壓藥之一，但是可能引起先天性畸形和胎兒發(fā)育遲緩等不良反應(yīng)[3-4]。此外，曾有卡托普利致胎動停止和胎兒死亡的報道[5]。本研究發(fā)現(xiàn)卡托普利發(fā)育毒性主要表現(xiàn)為外觀畸形和生長遲緩。2001年澳大利亞有服用ARB出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)的報告，主要為胎兒子宮內(nèi)死亡和新生兒早期死亡[6]。本研究未發(fā)現(xiàn)ARB纈沙坦有明顯的發(fā)育毒性。

研究還發(fā)現(xiàn)，卡托普利能引起胎仔出生體重超重以及體重增重應(yīng)值得關(guān)注。出生體重超重的發(fā)生與多種因素有關(guān)，目前主要與孕前體重指數(shù)、孕期增重、性別、孕齡及妊娠糖尿病有較明確的正相關(guān)，且上述危險因素間相互影響、相互促進(jìn)，最終導(dǎo)致出生體重超重[7]?？ㄍ衅绽麑?dǎo)致出生體重超重的原因還有待進(jìn)一步研究。

[1] 中國高血壓防治指南修訂委員會.中國高血壓防治指南[J].中華高血壓雜志,2011,19(8):701.

[2] Chobanian AV,Bakris GL,Black HR,et al.The seventh report of the joint national committee on prevention,detection,evalua tion,and treatment of high blood pressure:the JNC 7 report[J].JAMA,2003,289(19):2560.

[3] Cooper WO,Hernandez DS,Arbogast PG,et al.Major congenital malformations after first-trimester exposure to ACE inhibitors[J].N Engl J Med,2006,354(23):2443.

[4] Friedman JM.ACE inhibitors and congenital anomalies[J].N Engl J Med,2006,354(23):2498.

[5] 陳慶英,劉國樹.常用抗高血壓藥物的不良反應(yīng)及處理[J].藥物不良反應(yīng)雜志,2004,6(1):25.

[6] Martinovic J,Benachi A,Laurent N,et al.Fetal toxic effects and angiotensin-Ⅱ-receptor antagonists[J].Lancet,2001,35(2):241.

[7] 麥爾哈巴·迪力木拉提,姚麗艷.高出生體重兒的影響因素研究進(jìn)展[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2013,4(19):17.