★ 付長華 楊琴 蔡華吉（江西施美制藥有限公司 東鄉(xiāng) 331800）

苦參陰道泡騰片是在苦參栓部頒中藥01冊（WS3-B-0094-89）的基礎上改劑型而成的現(xiàn)代制劑?？鄥㈥幍琅蒡v片為苦參總堿經(jīng)加工制成的泡騰片。功能主治：抗菌消炎。用于宮頸糜爛，赤白帶下，滴蟲性陰道炎及陰道霉菌感染等婦科慢性炎癥。由于栓劑基質(zhì)常易因體溫融化后連同藥物流失而影響療效，污染衣物，給患者帶來不適和極大的不便，改劑型為陰道泡騰片后可提高治療效果和患者的順應性[1]。原苦參栓質(zhì)量標準中苦參總堿的含量測定采用的是滴定法[2]，高效液相色譜法是中藥質(zhì)量控制研究中的常用方法，應用HPLC法測定心律寧片（苦參總堿片）中苦參堿和氧化苦參堿的含量已有報道[3]，本文采用HPLC法對苦參陰道泡騰片中苦參總堿的含量測定進行了研究，方法準確、靈敏、可靠，為保證本品的質(zhì)量提供了質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10AT高效液相色譜儀，包括LC-10ATVP泵、SPD-10AVP檢測器、CLass-VP色譜工作站。乙腈、乙醇為色譜純，磷酸為分析純，試驗用水為自制蒸餾水。

試驗用的氧化苦參堿對照品由中國食品藥品檢定研究院提供。樣品提供單位：江西施美制藥有限公司，批號：20130409、20130410、20130411，規(guī)格：每片重1.2g（含苦參總堿以氧化苦參堿計為100mg）?？瞻纵o料均符合藥用標準。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：氨基鍵合硅膠為填充柱（5μm，200mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-乙醇-水（80：10：10），用磷酸調(diào)pH至2.0；檢測波長為220 nm；流速為1.0mL/分；柱溫為室溫；進樣量：20μL；理論板數(shù)按氧化苦參堿計算應不低于2 500；分離度應大于1.5。

圖1 HPLC圖譜(A為對照品；B為樣品)

2.2 溶液的制備

供試品溶液的制備：取本品5片研細，精密稱取適量（約相當于苦參總堿100mg），置100mL容量瓶中，加無水乙醇適量，超聲處理（功率60W，頻率40KHz）使溶解，用乙腈-乙醇（8：1）稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL容量瓶中，用乙腈-乙醇（8：1）稀釋至刻度，即得。

對照品溶液的制備：稱取氧化苦參堿對照品約25mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加無水乙醇適量，超聲處理（功率60W，頻率40KHz）使溶解，并用乙腈-乙醇（8：1）稀釋至刻度，搖勻，精密量取20mL，置50mL容量瓶中，用乙腈-乙醇（8：1）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 標準曲線的測定

在避光操作下。精密稱取氧化苦參堿對照品約25mg，置100mL量瓶中，加流動相適量超聲溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密量取該儲備液5mL，分別置100，50，25，10，5mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL注入色譜儀中，記錄色譜圖，以濃度（C）為橫坐標，所測峰面積為縱坐標進行回歸，得回歸方程：Y=1.5×107X+1.2×104，r=0.9996 ，表明在12.5-250μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 空白輔料干擾實驗

按處方組成，取除苦參總堿外的輔料，按制備工藝要求制成不含苦參總堿的陰性對照樣品（缺味樣品），然后按供試品制備下的方法制備陰性對照溶液，分別吸取陰性對照溶液與供試品20μL進行檢測，結(jié)果表明，陰性對照品的圖譜中，在與供試品的圖譜中氧化苦參堿位置上無峰出現(xiàn)，表明陰性無干擾。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下的供試品溶液（20130409）置室溫下放置，于0，2，6，12，24小時候分別進樣20μL進行檢測，記錄色譜圖與峰面積，結(jié)果見表1。

表1 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明：穩(wěn)定性試驗RSD為0.73%，樣品在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收率試驗

取已知含量（20130409）的6份，分別精密稱定，再分別加入氧化苦參堿對照品，按正文含量測定方法供試品溶液制備項下的方法操作測定，記錄色譜圖，考察本方法的加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

結(jié)果表明：本方法的加樣回收率為98.13%，RSD為1.12%。

2.7 精密度試驗

取濃度為0.1mg/mL的對照品溶液，在正文所述的色譜條件下，重復進樣5次，每次20μL，記錄氧化苦參堿色譜圖與峰面積。

結(jié)果表明，精密度試驗RSD為0.15%，表明儀器精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

按含量測定方法，對同一批樣品（20130409）分別制備6份供試品溶液，精密吸取各供試品溶液20μL注入液相色譜儀進行檢測，記錄色譜圖與峰面積。

結(jié)果表明：重現(xiàn)性試驗RSD為0.81%，表明重現(xiàn)性良好。

2.9 含量測定

各批樣品按“2.2”項下方法制備成供試品溶液、對照品溶液，精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算，3批樣品（20130409、20130410、20130411）的含量測定結(jié)果分別為99.6、98.8和98.6 mg/片。

3 討論

苦參總堿原料的含量測定采用的是滴定法[4]，該方法操作步驟多，實驗時間長，重現(xiàn)性差。筆者在本實驗中采用HPLC法測定苦參陰道泡騰片中所含的苦參總堿的含量。從色譜圖中可以看出氧化苦參堿的測定不受其他組分干擾。方法學的線性、精密度、穩(wěn)定性、重復性、回收率結(jié)果都較滿意。并且該方法能夠確定苦參陰道泡騰片中苦參總堿的含量，為良好的質(zhì)量控制打下了基礎。

[1]呂金玲，顧德輝.栓劑的研究發(fā)展概況[J].黑龍江醫(yī)藥，2006，19（3）：194-195.

[2]部頒中藥01冊[S]，標準號：WS3-B-0094-89.

[3]龐樹和，田葳，潘淑明.HPLC法測定心律寧片（苦參總堿片）中苦參堿和氧化苦參堿的含量[J].中醫(yī)藥信息，2002，19（1）：49-50.

[4]國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準[S].標準號：WS-10001-（HD-1106）-2002.