★ 萬歡 虞金寶 林森

（1.南昌大學理學院 南昌 330031；2.江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046；3.江西省醫(yī)藥學校 南昌 330200）

健脾顆粒收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準?中藥成方制劑第2冊，具有健脾開胃功效，用于脾胃虛弱所致脘腹脹滿、食少便溏等證。處方由黨參、白術(shù)（炒）、陳皮、枳實（炒）等組成，有文獻報道[1，2]對該制劑中橙皮苷進行含量測定，由于橙皮苷為陳皮、枳實共有成分[3-5]，該方法專屬性不強，且文獻[3]報道新橙皮苷僅在少數(shù)地方產(chǎn)陳皮（如浙江）中含有，而江西、廣西產(chǎn)陳皮中未檢測到新橙皮苷，經(jīng)試驗證明，陳皮不干擾枳實中新橙皮苷的測定。中國藥典2010年版枳殼藥材標準顯示，新橙皮苷含量高于柚皮苷，且分離度好，因此本實驗采用HPLC測定制劑中新橙皮苷含量，并進行了方法學研究。

1 儀器與藥品

HP-1100高效液相色譜儀（美國：包括1322A在線脫氣機、G1311A四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測器、HP化學工作站）；SimplicityTM個人型超純水系統(tǒng)（Millipore公司），定量毛細管（美國Drummond公司），CQ-250超聲波清洗儀（上海船舶電子設(shè)備研究所），新橙皮苷對照品（含量測定用，批號：111857-201102，中國藥品生物制品檢定所）；乙腈（色譜純），其它試劑均為分析純。健脾顆粒（批號：20120601、20120602、20120603、20120701、20120702、20120703（自制））。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱：Dikma Diamonsil C18（2）（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：乙腈-水（23：77），流速：1 mL/min，檢測波長283 nm，柱溫：30℃。在此條件下對照品、供試品在約14 min相同時間有一色譜峰，且陰性無干擾，見圖1、2、3。

圖1 新橙皮苷對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對照色譜圖

2.2 供試品溶液的制備

取健脾顆粒適量，研細，稱取約1.4 g，精密稱定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲（功率250w，頻率33kHz）處理30 min，放冷，再次稱定重量，加甲醇補足減少的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察

精密稱取新橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含新橙皮苷0.42 mg的對照品溶液。取此對照品溶液適量，加甲醇分別稀釋每1 mL含新橙皮苷濃度為10.10，25.25，42.08，75.74，126.24，210.40 μg的對照品溶液，分別吸取10 μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定，將樣品濃度與峰面積進行回歸，得新橙皮苷回歸方程為：Y=36521.35969X-27347.84，r=0.9999（n=6），在10.10-210.40 μg/mL范圍內(nèi)新橙皮苷濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗

精密吸取供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，重復進樣6次，測定供試品溶液中新橙皮苷峰面積值，計算供試品峰面積值的相對標準差為1.38%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，分別在0、1、2、4、8、12 h進行測定，測得供試品中新橙皮苷峰面積的RSD為1.12%。表明本品中對新橙皮苷采用的提取方法穩(wěn)定可行。

2.6 重復性試驗

取同一批號樣品共6份，照供試品溶液制備項下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算含量，RSD為1.47%。

2.7 加樣回收率試驗

取本品適量，研細，取約0.70 g，共6份，精密稱定，置具塞三角瓶中，各精密加入新橙皮苷對照品溶液（0.025 mg/mL）25 mL，按照含量測定項下實驗，吸取10 μL注入液相色譜儀中進行含量測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 新橙皮苷回收率測定結(jié)果

2.8 樣品測定

取本品，按供試品溶液的制備方法制備各供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，計算，即得。測定6批樣品中新橙皮苷的含量，結(jié)果為每袋含新橙皮苷為13.37，13.51，12.26，13.27，14.05，14.46 mg。

3 討論

3.1 枳實中含有揮發(fā)油、黃酮類、生物堿等成分，其中黃酮類成分為其主要成分之一，主要有橙皮苷、橙皮素、柚皮苷、柚皮素、新橙皮苷、柚皮蕓香苷等；黃酮苷對大鼠離體腸平滑肌的收縮呈抑制作用，且可對抗氯化鋇、乙酰膽堿、組織胺引起的痙攣性收縮，但對大鼠血壓和小鼠化學性疼痛及自發(fā)活動無明顯影響。揮發(fā)油主要有鎮(zhèn)靜作用，中樞抑制作用[7]。枳實可使胃底平滑肌的張力明顯升高，有促進胃運動、加速胃排空的作用等，該藥理作用進一步證明了枳實具有破氣除脹、消積導滯的作用[8]，因此，本次實驗選取枳實中的新橙皮苷為檢測指標。

3.2 有文獻[1，2]以橙皮苷為指標對健脾顆粒進行含量測定研究，由于橙皮苷為陳皮、枳實共有成分[3-5]，該方法專屬性不強，且橙皮苷難溶于水，微溶于甲醇[9]，實驗中發(fā)現(xiàn)，水煎煮工藝中橙皮苷的轉(zhuǎn)移率多在10%以下；而新橙皮苷則易溶于熱水，溶于熱乙醇，本實驗中發(fā)現(xiàn)新橙皮苷的轉(zhuǎn)移率約為40%，因此，以新橙皮苷作為該制劑的含量測定指標更為科學、合理。

3.3 實驗中還分別對提取溶劑（甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇）、提取方法（超聲和回流）、提取時間（20、30、45、60 min）和溶劑用量（15、25、50 mL）等條件進行考察，結(jié)果表明，新橙皮苷以25 mL甲醇超聲提取30 min效果最好。

[1]金陽.健脾顆粒質(zhì)量標準研究[J].中成藥，2007，29（9）：1 403-1 405.

[2]林清，吳雪梅，馬曉鸝，等.HPLC法測定健脾顆粒中橙皮苷的含量[J].中國藥房，2009，20（9）：698-699.

[3]肖培根.新編中藥志（第二卷）[M].北京：化學工業(yè)出版社，2002：346，454.

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