汪文來，趙紅霞，金香蘭，張 玲，王 震，盧賀起，岳廣欣，于 崢，張立石

(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

更年期綜合征［1］中醫(yī)常將其歸屬于絕經(jīng)前后諸證、郁證及臟躁，是由于婦女年屆七七，腎氣漸衰，天癸將竭，沖任二脈空虛，精血虧乏，臟腑失去濡養(yǎng)，加之情志因素，使陰陽(yáng)失調(diào)和臟腑之間失去平衡而發(fā)病。以月經(jīng)紊亂、烘熱汗出、煩躁失眠、腰酸乏力等為主癥。本實(shí)驗(yàn)以去勢(shì)雌性更年期模型大鼠為研究對(duì)象，探討大補(bǔ)陰丸及加減方的干預(yù)效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選用 SPF級(jí) Wistar大鼠76只，體質(zhì)量200±10g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào) SCXK-(軍)2007-004)。大鼠飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)均在中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室內(nèi)進(jìn)行(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室許可證號(hào)SYXK(京)-2005-0024)。

1.1.2 藥物 大補(bǔ)陰丸為杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的水蜜丸(批號(hào)101227)。大補(bǔ)陰丸加減方由知母、熟地、炒黃柏、醋炙龜板、丹皮、三七等藥組成。大補(bǔ)陰丸水蜜丸粉碎成細(xì)粉，以蒸餾水配成1∶2(藥∶水);大補(bǔ)陰丸加減方以水煎煮濃縮至1g/mL，均置4℃冰箱備用。

1.1.3 主要試劑 FSH、LH的 ELISA試劑盒為武漢Uscn公司生產(chǎn)。

1.1.4 主要儀器 酶標(biāo)儀:美國(guó)Biotek公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及處理 先將76只大鼠隨機(jī)分為3組，其中空白對(duì)照組10只，假手術(shù)組10只和造模組56只。造模組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后摘除雙側(cè)卵巢［2］，假手術(shù)組只摘取卵巢周圍少許脂肪組織。術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)60d，在造模成功的大鼠中選取56只，按體質(zhì)量均衡隨機(jī)分為4組，其中模型組14只，陽(yáng)性對(duì)照組14只，大補(bǔ)陰丸組14只，大補(bǔ)陰丸加減組14只，然后開始給藥。大補(bǔ)陰丸組灌胃給予濃度為 1g生藥/2mL的水溶液，即每天灌服 0.75mL/100g/體質(zhì)量，相當(dāng)于服生藥 0.375g/100g/體質(zhì)量。大補(bǔ)陰丸加減組灌胃給予濃度為1g生藥/mL的水煎劑，即每天灌服1.54mL/100g/體質(zhì)量，相當(dāng)于服生藥1.54g/100g/體質(zhì)量。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予0.008mg/mL的己烯雌酚，給藥體積為0.9mL/100g/體質(zhì)量，給藥量相當(dāng)于 0.0072 mg/100g/體質(zhì)量。以上灌胃給藥3個(gè)月，每天1次，連續(xù)6d，休息1d，再連續(xù)給藥6d?？瞻讓?duì)照組、假手術(shù)組、模型組按上法灌服等體積的純凈水。其余各組根據(jù)動(dòng)物體質(zhì)量計(jì)算給予相應(yīng)量的藥液。動(dòng)物給藥90d后，空腹?fàn)顟B(tài)、麻醉，腹主動(dòng)脈取血、離心，分離血清，－80℃低溫保存。每周稱體質(zhì)量1次。

1.2.2 外周血血清中促卵泡激素(FSH);促黃體生成激素(LH)含量的檢測(cè) 采用ELISA法檢測(cè)血清FSH和LH的含量。具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 腎上腺指數(shù)的檢測(cè) 大鼠處死前禁食12h，麻醉后開腹取材。經(jīng)腹主動(dòng)脈采血檢測(cè)變化，取腎上腺稱量其重量與體質(zhì)量之比計(jì)算腎上腺指數(shù)(臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量mg/體質(zhì)量g×100)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示，采用方差分析(ANOVA)，組間兩兩比較，采用q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 大補(bǔ)陰丸及加減方對(duì)去卵巢大鼠所致更年期綜合癥大鼠血清中FSH含量的影響

表1 各組大鼠血清FSH水平的比較(珋x±s)

表1顯示，模型組大鼠血清 FSH水平顯著升高，陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大補(bǔ)陰丸與模型組比較(P＜0.05)，F(xiàn)SH顯著降低。大補(bǔ)陰丸加減組與模型組比較(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 大補(bǔ)陰丸及加減方對(duì)去卵巢大鼠所致更年期綜合癥大鼠血清中LH含量的影響

表2顯示，模型組大鼠血清LH水平顯著升高，陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較(P＜0.01)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大補(bǔ)陰丸及加減組與模型組比較，LH顯著降低(P＜0.05)。

2.3 大補(bǔ)陰丸及加減方對(duì)去卵巢大鼠所致更年期綜合癥大鼠體質(zhì)量的影響

表3顯示，與空白對(duì)照組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠體質(zhì)量明顯增加(P＜0.01);與模型組比較，大補(bǔ)陰丸及加減組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠體質(zhì)量明顯降低(P ＜0.01)。

表2 各組大鼠血清LH水平的比較(珋x±s)

表3 各組大鼠體質(zhì)量水平的比較(珋x±s)

2.4 大補(bǔ)陰丸及加減方對(duì)去卵巢大鼠所致更年期綜合癥腎上腺指數(shù)的影響

表4 各組大鼠腎上腺指數(shù)的比較(珋x±s)

表4顯示，與空白對(duì)照組和假手術(shù)組相比，模型組大鼠腎上腺指數(shù)明顯降低(P＜0.01)。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組腎上腺指數(shù)顯著升高(P＜0.01)，大補(bǔ)陰丸及加減組腎上腺指數(shù)明顯升高(P＜0.05)。

3 討論

大補(bǔ)陰丸原名叫“大補(bǔ)丸”，出自元代醫(yī)學(xué)家朱震亨所著《丹溪心法》一書。該方系朱氏滋陰降火學(xué)說的代表方，由熟地黃、炙龜板、黃柏、知母、豬脊髓組成，其組方體現(xiàn)了丹溪“陽(yáng)常有余，陰常不足”的學(xué)術(shù)思想，用藥強(qiáng)調(diào)瀉相火而補(bǔ)腎陰，因此本方是用于治療婦女更年期綜合征的有效方法之一。大補(bǔ)陰丸加減方是在大補(bǔ)陰丸原方基礎(chǔ)上加入丹皮、三七等清熱涼血、活血化瘀之品，達(dá)到滋陰補(bǔ)腎、化瘀活血、養(yǎng)血填精之效，從而治療更年期綜合征。

更年期綜合癥主要表現(xiàn)為生殖內(nèi)分泌功能障礙與植物神經(jīng)功能失調(diào)的一組證候群。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，更年期婦女由于卵巢功能衰退，雌激素分泌逐漸減少，體內(nèi)僅有低水平的雌激素，是其發(fā)生更年期綜合癥的主要原因。FSH、LH均由腺垂體分泌，其中FSH可促進(jìn)卵泡的各種細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育以利于生殖細(xì)胞的成熟，并可促進(jìn)新細(xì)胞合成FSH受體，從而增強(qiáng)FSH對(duì)卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的作用;而LH可使顆粒細(xì)胞黃素化并分泌黃體酮。由于雌激素不足，對(duì)下丘腦-垂體不能進(jìn)行有效的負(fù)反饋，致使垂體分泌促性腺激素增加［3］。

本實(shí)驗(yàn)選擇去勢(shì)的造模方法，切除雙側(cè)卵巢(OVX)而人為制造卵巢功能突然減退的環(huán)境來模擬更年期綜合癥發(fā)生。結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清 FSH、LH(P＜0.01)水平明顯升高。陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大補(bǔ)陰丸及加減方能顯著降低OVX大鼠FSH、LH及體質(zhì)量水平，并能明顯升高大鼠腎上腺指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與更年期婦女生殖內(nèi)分泌情況一致。說明婦女進(jìn)入更年期后，卵巢功能逐漸衰退，雌激素水平下降，導(dǎo)致下丘腦-垂體-卵巢軸的平衡失調(diào)，出現(xiàn)植物神經(jīng)功能紊亂等一系列癥狀，如月經(jīng)紊亂、烘熱汗出、煩躁失眠等。大補(bǔ)陰丸及加減方通過滋陰降火、養(yǎng)血填精調(diào)節(jié)和改善更年期綜合征癥狀。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，大補(bǔ)陰丸及加減方可糾正模型大鼠FSH、LH激素水平，使其向正常平衡恢復(fù)，具有降低OVX大鼠體質(zhì)量增速過快作用，能緩解OVX大鼠腎上腺萎縮狀況，對(duì)婦女更年期綜合征防治具有積極意義。

［1］ 許麗綿，歐陽(yáng)惠卿，盧如玲.更年期綜合征病因病機(jī)及其證治述要［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(9):1550-1552.

［2］ 鞠大宏，張春英，王安民，等.溫補(bǔ)腎陽(yáng)方對(duì)去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠IL-1和IL-6活性的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2000，6(4):29-32.

［3］ 葉玉妹，楊慰，韓文均，等.寧神顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性更年期雌性大鼠性激素和免疫功能的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(2):344-346.