劉磊

P53、Grb7 在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達及臨床意義

劉磊

目的探討P53、Grb7在胃腸道間質(zhì)瘤(GIST) 中的表達及其與GIST生物學(xué)行為的關(guān)系,為預(yù)測該腫瘤的侵襲潛能提供理論依據(jù)和可能的預(yù)測指標。方法收集58例手術(shù)切除的GIST標本,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測腫瘤組織中P53和Grb7蛋白的表達,并結(jié)合病理形態(tài)學(xué)及生物學(xué)行為評價進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果腫瘤組織中的P53、Grb7陽性率分別為85.2% 、83.3%,并隨著GIST 惡性分級的增高,其表達均出現(xiàn)遞增趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與生長方式、腫瘤大小、腫瘤中心有無壞死、腫瘤細胞特殊排列結(jié)構(gòu)亦有明顯關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論P53、Grb7蛋白表達與GIST的發(fā)生、發(fā)展有關(guān), 檢測P53、Grb7表達結(jié)合特殊病理學(xué)形態(tài)可以作為評價GIST生物學(xué)行為及預(yù)后的客觀指標。

胃腸道間質(zhì)瘤;P53蛋白;Grb7蛋白;免疫組織化學(xué)方法

1 資料與方法

1.1選取鄭州人民醫(yī)院普通外科2007年1月至2012年12月手術(shù)切除經(jīng)病理證實且免疫組化均表達CD117或CD34為陽性的胃腸道間質(zhì)瘤58例；復(fù)閱切片重新診斷。其中男性32例，女性26例，年齡分布32～74歲，中位年齡52.6歲，所有患者術(shù)前均未接受化療、放療、免疫治療及其他針對腫瘤的治療。按2001年美國國立衛(wèi)生研究院(nation institute of health，NIH)診斷標準，根據(jù)腫瘤大小、每50高倍鏡視野下核分裂計數(shù)將58例為：極低度侵襲危險性6例、低度侵襲危險性12例、中度侵襲危險性22例和高度侵襲危險性18例四組。

1.2所有標本均用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片4張，2張分別用于P53、Grb7免疫組織化學(xué)檢測，1張作HE染色，1張用PBS代替一抗作陰性對照。檢測方法采用免抗P53多克隆抗體及S-P 免疫組化染色試劑盒均購自武漢博士德生物技術(shù)開發(fā)公司。Grb7試劑盒購自Santa Cruz 公司(單抗,1 ∶ 100)。操作按試劑盒說明書進行。已知P53，Grb7陽性的乳腺癌作為陽性對照。

1.3結(jié)果判定 P53蛋白主要在細胞核內(nèi)表達,以胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色染色為陽性染色，光鏡下觀察整個切片，高倍鏡下(10×40)隨機觀察5個視野，以陽性細胞百分率為判定標準，陽性細胞<10%判定陰性；陽性細胞>10%判定為陽性。陽性細胞為細胞膜或胞質(zhì)棕黃著色。光鏡下觀察整個切片，高倍鏡下(10×40)隨機觀察5個視野，以陽性細胞百分率為判定標準,無陽性細胞或陽性細胞5% 為“-”；陽性細胞數(shù)5%～25%為“+”；陽性細胞數(shù)26%～50%為“++”；陽性細胞數(shù)為50%為“+++”。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件。免疫組化結(jié)果與臨床病理特征比較采用χ2檢驗。P53與Grb7之間的相關(guān)性檢驗運用Spearman相關(guān)檢驗。

2 結(jié)果

2.1P53、Grb7在GIST 中的表達及其與臨床病理聯(lián)系 P53 、Grb7在腫瘤細胞中有陽性表達, 詳見圖1、2。在GIST中P53、Grb7陽性表達率為65.52%(38/58)，55.17% (32/58)。通過χ2檢驗，P53、Grb7在不同年齡、不同性別、不同部位之間，不同組織學(xué)類型之間的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，P53與腫瘤細胞密集度、細胞異型性、腫瘤細胞壞死、浸潤性生長及特殊排列結(jié)構(gòu)(交叉束狀、彌漫片狀、柵欄狀和古錢幣樣)有關(guān)(P<0.05)，P53、Grb7與GISTs腫瘤的直徑、腫瘤細胞核分裂象及組織學(xué)分級有關(guān)(P<0.05)。隨惡性潛能級別升高P53、Grb7表達逐步增高，通過兩兩比較顯示，極低危、低危和中危、高危GISTs之間P53、Grb7的陽性表達率有一定差異(P<0.05)，中危和高危之間P53陽性表達率有顯著差異(P<0.05),但極低危和低危之間的表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。P53、Grb7表達兩者呈正相關(guān)(r=0.6667,χ2=212.13,P<0.01),詳見表1。

圖1 P53在GIST中的表達 400×

臨床病理指標NP53Grb7n%n%患者年齡(歲)<5018147778105556≥5040246000225500腫瘤分級極低惡62333311667低度惡127582254178中度惡22156818135909高度惡18147778126667轉(zhuǎn)移浸潤無24145033104167有34247058226471腫瘤直徑(cm)<2833975339752～516743751062506?1022145454167273>101286667108333核分裂數(shù)50hFP≤51884446844466?1024177083125000>1016138125127500中心壞死無198444494738有39235883235883細胞密集度無2210444483637有36287778246667細胞異型性無28155357145000有30237667186000特殊排列結(jié)構(gòu)無25145600114400有33247273216364

3 討論

GISTs 的良惡性缺乏明確的診斷標準,準確預(yù)測GISTs 生物學(xué)行為十分困難。在實際工作中,我們一般根據(jù)腫瘤大小、核分裂像的多少。但是,一些直徑<2 cm,核分裂像為1 個/ 50 HPF,病理診斷為良性,卻在10 年或更長時間發(fā)生轉(zhuǎn)移。

P53是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的抑癌基因, 50%以上人類惡性腫瘤都可檢測到P53基因突變。P53基因可分為野生型P53(wt-p53)和突變型P53(mt-p53)[2]，野生型P53基因功能與細胞分化、DNA合修復(fù)以及細胞程序性死亡有關(guān)。主要參與細胞周期G1/S交界處檢查點的檢查機制，負責(zé)檢查細胞基因組的完整性[3,4]。它強迫具有DNA損傷的細胞在G1期進行修復(fù)后進入S期，如修復(fù)失敗，則P53蛋白可啟動細胞發(fā)凋亡。野生型P53對于腫瘤具有抑制細胞增殖，誘導(dǎo)凋亡，誘導(dǎo)分化的作用，它通過控制與細胞調(diào)控，從而達到抑制癌的目的。突變型P53基因由于失去正常功能而使P53蛋白在細胞中堆積，造成P53蛋白含量升高，抑制細胞凋亡，促進細胞轉(zhuǎn)化和增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。P53基因發(fā)生突變時，半衰期明顯延長，比正常細胞高出100～1000倍，這是應(yīng)用免疫組化法檢測P53的基礎(chǔ)[5]；因此用免疫組化方法檢測到的P53多為突變型；本研究結(jié)果顯示P53蛋白陽性表達率為65.52%， P53與腫瘤大小、腫瘤細胞核分裂象、組織學(xué)分級、特殊病理學(xué)形態(tài)有顯著意義(P<0.05)，P53蛋白表達量隨惡性潛能級別升高而逐步增高，提示P53基因突變在腫瘤細胞惡性進展中起一定作用,有可能成為臨床判定GIST風(fēng)險程度分級的重要參考指標。因此,我們認為P53結(jié)合特殊病理學(xué)形態(tài)可以作為判斷胃腸道間質(zhì)瘤惡性程度及預(yù)后的參考指標。

生長因子受體結(jié)合蛋白(growth factor receptor-bound protein， Grb7)是一個沒有內(nèi)源性酶活性的聯(lián)結(jié)蛋白，該蛋白主要是介導(dǎo)各種細胞表面受體和特異性下游信號的耦聯(lián)，與細胞增殖及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)[1]，Grb7蛋白有3個特征性結(jié)構(gòu)區(qū)[6,7]，1個富含脯氨酸的氨基端，1個GM中央?yún)^(qū)和1個羧基端的SH2區(qū)，調(diào)節(jié)并激活酶的催化活性。羧基端SH2是Grb7與其他蛋白結(jié)合的重要結(jié)構(gòu)，所結(jié)合的分子是酪氨酸激酶受體及其他酪氨酸磷酸化信號分子。本研究結(jié)果顯示Grb7蛋白陽性表達率為55.17%，我們檢測了Grb7在GISTs組織中的表達與GIST腫瘤的直徑、腫瘤細胞核分裂象、特殊病理學(xué)形態(tài)有顯著意義(P<0.05)，Grb7與腫瘤細胞密集度、細胞異型性、腫瘤細胞壞死、浸潤性生長及特殊排列結(jié)構(gòu)(交叉束狀、彌漫片狀、柵欄狀和古錢幣樣)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

并分析它與組織學(xué)分級的關(guān)系，隨著惡性潛能增加Grb7表達升高，通過兩兩比較顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示Grb7基因突變與GIST的發(fā)生有關(guān)；Grb7在食管癌中表達率為45%，并且與淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤相關(guān)[8]。研究表明胃腸道間質(zhì)瘤中Grb7陽性表達與陰性表達的5年生存率比較有顯著性差異[9]，結(jié)果提示Grb7蛋白表達在GIST腫瘤細胞惡性進展中起一定的作用，結(jié)合臨床病理學(xué)形態(tài)可能成為臨床判定胃腸道間質(zhì)瘤惡性潛能、生物學(xué)行為及預(yù)后的良好指標。故Grb7可以作為GIST 的預(yù)后判斷有一定意義。

本研究結(jié)果顯示,在GIST 中P53與Grb7的表達呈正相關(guān)(P<0.05),提示兩者在GIST 的發(fā)生發(fā)展過程中的作用密切相關(guān), 可能通過協(xié)同作用促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。因此, P53、Grb7可以作為預(yù)測GIST 惡性潛能及生物學(xué)行為較好的客觀指標。

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ClinicalsignificanceofP53、Grb7expressioningastrointestinalstromaltumor

LIULei.

DepartmentofGastrointestinalSurgery,AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege(Zhanjiang524001,China)

ObjectiveTo investigate the expression of P53, Grb7 protein in gastrointestinal stromal tumor (GIST), and discuss the relationship between their expression and clincopathological characteristics.Methods58 cases of GIST were studied for P53, Grb7 by immunohistochemical staining, Their relations with histomor-phology and biological behavior were analyzed statistically.ResultsThe positive expression of P53, Grb7 was 85.2% (46/54), 83.3%(43/54) respectively. The express-ion of P53, Grb7 increased significantly according to the malignant increasing(P<0.05) and associated with nuclear division、the histological grade、high cellularity,nuclear pleomorphism，tumor necrosis，tumor invasion and perivascular collar-like pattern(P<0.05).ConclusionThese data shows the expression of p53 and Grb7 and the clinical pathologic characteristics of GISTs are related to the biological potential, grading criteria and progression of GIST. we can provide scientific basis for the therapy and prognosis evaluation of the GISTs.p53, Grb7 in GIST.

Gastrointestinal stromal tumor; P53, Grb7, Immunohistochemistry

450003 鄭州人民醫(yī)院

P53 是目前研究最為廣泛深入的抑癌基因之一，生長因子受體結(jié)合蛋白7 (growth factor receptor bound protein 7,Grb7) 是新近發(fā)現(xiàn)的信號聯(lián)結(jié)蛋白,該蛋白主要是介導(dǎo)各種細胞表面受體和特異性下游信號的耦聯(lián)，與細胞增殖及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)[1]，二者在胃癌、乳腺癌、食管癌組織中有高表達, P53、Grb7 蛋白已被證實是較好預(yù)后標志物。有關(guān)P53、Grb27 蛋白在胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumors, GISTs) 中的表達情況，尚未見國內(nèi)外文獻報道。因此, 檢測GIST中P53、Grb7的蛋白表達,分析其與臨床病理特征的關(guān)系,探討P53, Grb7預(yù)測胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)惡性潛能及生物學(xué)行為、判斷預(yù)后的意義。