王國(guó)慶 康愛(ài)英

南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 南陽(yáng) 473058

目前，有關(guān)高同型半胱氨酸血癥（HHcy）兔腹主動(dòng)脈血管超聲檢查的報(bào)道較少，而用丹參和維生素治療兔HHcy，觀察腹主動(dòng)脈血管超聲和病理變化的研究未見(jiàn)報(bào)道，本文采用高蛋氨酸飲食建立兔HHcy模型，用丹參、維生素（即葉酸、維生素B6和B12三聯(lián)）作為干預(yù)藥物，觀察血清生化指標(biāo)、腹主動(dòng)脈血管超聲及病理變化，探討丹參和維生素對(duì)HHcy兔動(dòng)脈血管變化的影響。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物分組與HHcy模型的建立篩選健康雄性家兔40只，月齡3～5個(gè)月，體質(zhì)量1.5～2.0kg，標(biāo)準(zhǔn)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為4組，每組10只。動(dòng)物飼料按100g／（d·只）計(jì)算。對(duì)照組：NC喂標(biāo)準(zhǔn)飼料；蛋氨酸組：Met喂蛋氨酸飼料，即標(biāo)飼＋2%蛋氨酸制成；丹參組：SM喂蛋氨酸飼料＋丹參口服液3.3g／（kg·d）灌服，丹參口服液由南陽(yáng)醫(yī)專中藥教研室用丹參經(jīng)煎制、過(guò)濾、濃縮為1g／mL生藥；維生素組：Vit喂蛋氨酸飼料＋葉酸1.5mg／（kg·d）、VB120.25mg／（kg·d）、VB620mg／（kg·d）灌胃，對(duì)照組和蛋氨酸組每天用等量生理鹽水灌胃。通過(guò)測(cè)定血漿Hcy含量，以超過(guò)22.44μmol／L，判定HHcy兔模型制備成功。動(dòng)物連續(xù)喂養(yǎng)8周。

1.2生化指標(biāo)檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第0周、4周、8周末時(shí)，自兔耳緣靜脈采血2mL，用循環(huán)酶法檢測(cè)血漿Hcy含量；8周末比色法測(cè)定 MDA、SOD，一氧化氮（NO）由硝酸還原酶法測(cè)定，血栓素B2（TXB2）由酶免法測(cè)定。

1.3血管超聲檢查第4周、8周末，進(jìn)行腹主動(dòng)脈血管超聲檢查（GE Lg－9彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率4～10 MHz），觀察血管內(nèi)膜光滑程度及有無(wú)粥樣斑塊形成，同時(shí)測(cè)量腹主動(dòng)脈內(nèi)－中膜厚度（IMT）和腹主動(dòng)脈血流峰值（Vp）。

1.4病理學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)8周，處死動(dòng)物，取腹主動(dòng)脈血管，10%福爾馬林固定、取材、石蠟切片、H－E染色，光鏡觀察。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，并用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，組間比較用F檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1血漿Hcy含量變化0周時(shí)各組血漿Hcy含量為16.67～22.44μmol／L（即正常參考值），超過(guò)此值上限確定為HHcy。Met和SM組在第4、8周末時(shí)Hcy均顯著高于同期NC（P＜0.01），Vit組第4周時(shí)高于同期NC組，比 Met和SM組低，8周恢復(fù)正常水平（見(jiàn)表1）。實(shí)驗(yàn)期間家兔一般情況良好，Met組2只死亡?！?/p>

表1 血漿Hcy含量比較 （s，μmol／L）

表1 血漿Hcy含量比較 （s，μmol／L）

注：與 NC組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與 Met組比較，★P＜0.01；與SM組比較，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01

NC組 18.15±1.71（10）18.12±1.33（10）19.09±1.20（10）Met組 19.34±1.65（10）62.92±2.26（9）＊＊ 65.23±1.12（8）＊＊SM 組 18.13±2.01（10）53.44±2.33（10）＊＊ 56.37±1.29（10）＊＊Vit組 19.23±2.47（10）32.53±1.28（10）＊★◆ 22.35±2.30（10）★◆

2.2血清NO、TXB2、MDA、SOD含量變化實(shí)驗(yàn)8周時(shí)，Met組與NC組比較，血清MDA、TXB2含量顯著升高（P＜0.01），NO、SOD活力明顯降低（P＜0.01）；SM 和 Vit組與Met組比較，MDA、TXB2含量顯著下降，NO、SOD活性升高，見(jiàn)表2。

表2 血清NO、TXB2、MDA、SOD含量比較 （s）

表2 血清NO、TXB2、MDA、SOD含量比較 （s）

注：與 NC組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與 Met組比較，#P＜0.05，﹟﹟P＜0.01

組別 n NO（μmol／L）TXB2（ng／L）MDA（μmol／L）SOD（U／mL）28±23.46 Met組 8 57.96±13.80＊ 345.33±35.27＊＊ 45.27±8.16＊＊ 285.35±26.30＊＊SM組 10 132.12±14.22＊﹟﹟ 154.48±21.43﹟﹟ 23.12±0.17﹟﹟ 473.69±28.09﹟﹟Vit組 10 159.37±30.26＊＊﹟﹟ 145.68±24.36﹟﹟ 22.48±7.44﹟﹟ 420.48±21.56 NC組 10 99.33±19.41 134.50±29.17 22.32±6.02 370.﹟﹟

2.3腹主動(dòng)脈超聲檢查結(jié)果實(shí)驗(yàn)4周時(shí)NC組血管內(nèi)膜線細(xì)、光滑、連續(xù)性好；Met組血管內(nèi)膜欠光滑，邊緣不整，有中等偏低回聲團(tuán)塊，SM和Vit干預(yù)組無(wú)明顯改變。8周末Met組血管IMT明顯增厚，有偏強(qiáng)回聲團(tuán)，斑塊邊界不清，Vp顯著增快。SM和Vit組與Met比較IMT顯著減小，Vp顯著減慢，均未見(jiàn)斑塊形成。見(jiàn)圖1～6。

圖1 NC組4周內(nèi)膜纖細(xì)、光滑

圖2 NC組8周內(nèi)膜光滑

圖3 Met組4周內(nèi)膜欠光滑，軟斑

圖4 Met組8周管腔狹窄，有斑塊

圖5 SM組8周內(nèi)膜光滑，無(wú)斑塊

圖6 Vit組8周內(nèi)膜輕度增厚，光滑

2.4 腹主動(dòng)脈血管病理變化 大體觀察：沿腹主動(dòng)脈管壁剪開(kāi)，NC組管壁光滑，Met組管腔內(nèi)壁見(jiàn)黃色斑塊及瓷白色大頭針樣纖維帽，內(nèi)膜粗糙不平。光鏡下觀察：NC組血管內(nèi)膜薄而光滑，與外膜平行，連續(xù)性好，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)泡沫細(xì)胞。Met組：血管內(nèi)膜粗糙，斑塊突出于內(nèi)膜面，斑塊周圍肉芽組織增生及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)膜下有大量不規(guī)則的平滑肌細(xì)胞，中層結(jié)構(gòu)紊亂，斑塊深部的泡沫細(xì)胞有變性壞死、崩解，形成粉紅色無(wú)定形物質(zhì)，中膜變淺，淺層肌纖維分離斷裂。SM和Vit組血管內(nèi)膜光滑，8周時(shí)內(nèi)膜有輕度增厚，內(nèi)膜下有少量泡沫細(xì)胞，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊，管壁均勻。見(jiàn)圖7～14。

圖7 NC組：10×10血管內(nèi)膜光滑連續(xù)性好

圖8 NC組：10×40內(nèi)膜 下未見(jiàn)泡沫細(xì)胞

圖9 Met組：10×10內(nèi)膜下見(jiàn)斑塊，管腔狹窄

圖10 Met組：10×40有大量泡沫細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞排列紊亂

圖11 SM組：10×10，管壁厚薄均勻，膜下平滑肌排列稍亂

圖12 SM組：10×40內(nèi)皮完整，有少量泡沫細(xì)胞

圖13 Vit組：10×10管壁厚薄均勻、平滑肌細(xì)胞排列整齊

圖14 Vit組：10×40內(nèi)皮完整、有少許泡沫細(xì)胞

3 討論

近年的研究證實(shí)HHcy是AS新的、獨(dú)立的危險(xiǎn)因子［1］。因此，開(kāi)展HHcy致AS形成和防治是心、腦血管疾病領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。丹參具有祛瘀止通、活血通經(jīng)之功效，但對(duì)HHcy導(dǎo)致兔AS是否有效及血管超聲研究未見(jiàn)報(bào)道。

本研究給家兔喂高蛋氨酸飼料，分別在不同時(shí)段測(cè)定血清Hcy水平，Met組4周、8周時(shí)血清Hcy含量均顯著高于NC組，表明兔HHcy模型制備成功。兔腹主動(dòng)脈超聲及組織學(xué)檢查顯示，Met組血管內(nèi)膜明顯增厚，中層結(jié)構(gòu)紊亂，有大量的泡沫細(xì)胞及細(xì)顆粒狀粥糜樣物質(zhì)；超聲和光鏡觀查均發(fā)現(xiàn)有斑塊形成，為動(dòng)脈硬化改變征象，故認(rèn)為HHcy可引起家兔動(dòng)脈血管發(fā)生病理改變，是致AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

HHcy致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制目前尚未完全闡明，可能與血管內(nèi)皮損傷、刺激血管平滑肌增值等因素有關(guān)［2］。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Met組家兔血清MDA、TXB2含量顯著高于NC組，而NO、SOD活力則明顯降低，提示HHcy家兔體內(nèi)氧化應(yīng)激增強(qiáng)，Hcy是多功能損傷因子［3］，其分子中的自由巰基可生成多種氧化產(chǎn)物，造成血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，MDA產(chǎn)生增多，消耗SOD；另外，Hcy升高，抑制SOD表達(dá)和分泌，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化機(jī)制受損［3］，并增強(qiáng)超氧自由基介導(dǎo)的NO滅活作用，引起內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)，使血管內(nèi)皮細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)發(fā)生變化；Hcy還使脂蛋白沉積，并被巨噬細(xì)胞吞噬形成泡沫細(xì)胞，引起動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。

丹參具有天然抗氧化作用［4］，可消除脂類自由基而阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。本研究中SM組血漿Hcy含量高于NC組，但與 Met組比較 MDA、TXB2含量顯著降低，NO、SOD活力顯著升高；血管超聲及病理觀察兔腹主動(dòng)脈血管內(nèi)膜光滑、無(wú)斑塊形成，故認(rèn)為丹參有干預(yù)HHcy兔動(dòng)脈粥樣硬化形成作用，其機(jī)制可能是丹參除抗氧化作用外，還降低縮血管成分TXB2水平，提升血管松弛因子NO含量，起到舒張血管，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，具有延緩或阻止HHcy兔動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用。

Vit組家兔血清生化指標(biāo)及腹主動(dòng)脈血管超聲及組織學(xué)觀察結(jié)果提示FA、VB6、VB12是同型半胱氨酸代謝酶必需的輔助因子［5］，加速 Hcy去路［6］，降低 Hcy水平，減輕血管內(nèi)皮的損傷及血管平滑肌的增值，阻止AS的發(fā)生。

綜上所述，高蛋氨酸飲食可誘發(fā)家兔HHcy，Hcy升高可通過(guò)氧化應(yīng)激增強(qiáng)、損傷血管內(nèi)皮、促進(jìn)血管平滑肌增殖等機(jī)制，導(dǎo)致AS的發(fā)生。維生素降低Hcy的含量，丹參能對(duì)抗Hcy引起的氧化損傷、舒張血管等，延緩Hhcy所致心、腦血管疾病的發(fā)生。

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