田文霞，王 穎，劉紅霞，喻 進(jìn)，寧官保，高榮琨，高文偉，趙宇軍

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山西太谷030801）

雞馬立克?。∕arek＇s disease，MD）是由皰疹病毒亞科馬立克病病毒（MDV）引起的最常見的雞惡性腫瘤病，以淋巴細(xì)胞組織增生，在各內(nèi)臟器官及外周神經(jīng)、肌肉、皮膚、性腺、虹膜中產(chǎn)生單核細(xì)胞浸潤和腫瘤為特征［1］?；加心[瘤型馬立克病的雞能夠發(fā)生肉眼可見的脂肪性動脈粥樣硬化（Arteriosclerosis，AS），與人的慢性動脈粥樣硬化相似［2－3］。AS是人類心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)［4］，還可引起其他疾病，例如心肌梗塞、腦梗塞、壞疽等。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)血清中γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（gamma glutamyltromsferase，GGT）為冠狀微血管損傷的標(biāo)記物，是非致死性心肌梗死、致死性冠狀動脈硬化性心臟病和腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［5－8］，有學(xué)者報(bào)道在頸動脈粥樣硬化斑塊中有GGT表達(dá)［9］，從而表明GGT可能參與了動脈粥樣硬化的形成。

除GGT外，有研究表明脂蛋白（a）［lipoprotein（a），LP（a）］是決定冠狀動脈粥樣硬化斑塊的重要因子［10］，致動脈硬化死亡率受高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）水平影響，較低的 HDL水平的患者死亡率高［11］。LP（a）在肝臟中合成，是與低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）結(jié)構(gòu)相似的脂蛋白。因此，研究血清中LDL、HDL的含量與AS發(fā)生是否有關(guān)具有重要意義。

目前關(guān)于GGT、PL（a）、HDL、LDL等生化指標(biāo)與AS的相關(guān)性研究與分析已報(bào)道較多，但馬立克病雞血清中GGT、HDL及LDL等含量變化與AS間關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。為此，本試驗(yàn)對馬立克病雞血清生化指標(biāo)GGT、HDL、LDL進(jìn)行檢測與分析，以揭示GGT、HDL、LDL含量變化與 MD動脈粥樣硬化之間的關(guān)系，可為動物動脈粥樣硬化的臨床預(yù)測提供依據(jù)，做到及早預(yù)防，減少發(fā)病率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用動物 72只1日齡海蘭褐公雛雞，購自太谷縣某種雞場。

1.1.2 毒株 馬立克病毒強(qiáng)毒京－1株血毒，購自北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，批號200806，液氮中保存。

1.1.3 試劑及儀器 G系列γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶檢測試劑盒，北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司，批號GS9051G；高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，Olympus Life and Science Europa GmbH，Germany，批號OSR6287；G系列低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司，批號GS141Z；O－lympus AU640全自動生化分析儀（MISHIMA OLYMPUS，日本）。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)雞分組、攻毒、飼養(yǎng) 72只1日齡公雛雞，分為二組，每組各36只。對照組（C）：腹腔注射0.2mL滅菌Hanks液；攻毒組（V）：將馬立克強(qiáng)毒京－1株血毒用滅菌Hanks液稀釋20倍，每只雞腹腔注射0.2mL。按照常規(guī)飼養(yǎng)管理，觀察發(fā)病情況。分別于3、6、10、15、20、26、35、45、60d，每組各取4只，心臟采血，剖檢觀察病變，析出血清，備檢。

1.2.2 血清γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶含量測定 按照G系列γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶檢測試劑盒（IFCC速率法）說明書測定。

1.2.3 血清脂蛋白含量測定 在脂蛋白中既有蛋白質(zhì)又有膽固醇，還有磷脂的復(fù)合體，較難定量。由于其中的膽固醇含量較為穩(wěn)定，因此以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)，即測定 HDL、LDL中膽固醇含量作為HDL、LDL的含量。分別按照高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒和G系列低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒說明書測定。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，以ˉx±SD表示。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 病理剖檢結(jié)果

26日齡時(shí)，攻毒組雞剖檢有肉眼可觀病理變化，睪丸腫大，腎稍腫大；35日齡時(shí)，肝稍腫大，睪丸腫大，法氏囊萎縮，胸腺萎縮甚至退化，心臟動脈出現(xiàn)粥樣硬化；45日齡時(shí)出現(xiàn)肝腫瘤。

2.2 血清生化指標(biāo)的分析

表1為攻毒組與對照組GGT含量的變化，攻毒組35d時(shí)明顯高于對照組，而其他階段低于對照組，且差異不明顯；表2HDL含量變化顯示，攻毒組與對照組相比，HDL在注射 MDV 10、15、20、35、60d時(shí)低于對照組，且在15d時(shí)差異極顯著（P＜0.01）；由表3可見，LDL在注射 MDV 10、15、26、35、45d時(shí)高于對照組，且在15d時(shí)差異極顯著（P＜0.01）。

表1 血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性變化Table 1 The changes of GGT activity in serum U／L

表2 血清高密度脂蛋白含量變化Table 2 The changes of HDL content in serum mmol／L

表3 血清低密度脂蛋白含量變化Table 3 The changes of LDL content in serum mmol／L

3 討論

在臨床醫(yī)學(xué)診斷中，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白是作為檢測心血管疾病的重要指標(biāo)，尤其是對AS的檢測。高密度脂蛋白含量偏低、同時(shí)低密度脂蛋白含量偏高，是動脈粥樣心血管疾病血脂異常的表現(xiàn)［12］。Hajjar D P等［13］研究發(fā)現(xiàn)，馬立克病病毒感染雞早期階段出現(xiàn)膽固醇和膽固醇酯代謝改變引起主動脈脂肪增加。本研究對馬立克病雞血清HDL、LDL檢測也顯示出相同的結(jié)果，在發(fā)病前期15d時(shí)就達(dá)到顯著水平，而病雞剖檢發(fā)現(xiàn)35d時(shí)出現(xiàn)動脈粥樣硬化癥狀，提示通過對HDL、LDL的檢測可及早預(yù)測AS及馬立克病的發(fā)生。

血清中谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶主要來自于肝臟，肝膽系統(tǒng)發(fā)生實(shí)質(zhì)性變化時(shí)，可使血清中谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶含量上升。臨床醫(yī)學(xué)專家認(rèn)為，根據(jù)漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷為惡性腫瘤的患者，血清中GGT顯著升高，結(jié)合臨床應(yīng)考慮原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝膽系統(tǒng)腫瘤，如GGT升高不明顯，則可基本排除肝膽系統(tǒng)腫瘤，而應(yīng)考慮其他腹腔、胸腔臟器腫瘤且癌腫未發(fā)生肝膽系統(tǒng)轉(zhuǎn)移［14］。MDV可引起雞肝臟發(fā)生實(shí)變，發(fā)生肝臟腫瘤［1］，本試驗(yàn)攻毒組GGT含量35d時(shí)明顯升高，可能與臨床剖檢［15］肝腫大、睪丸腫大、法氏囊萎縮、胸腺萎縮甚至退化、心臟動脈出現(xiàn)粥樣硬化有直接的關(guān)系，但在其他階段GGT含量偏低，其相關(guān)性還有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

因此，雞血清HDL與LDL含量變化可作為預(yù)測馬立克病及動脈粥樣硬化的一項(xiàng)重要指標(biāo)，對HDL與LDL的檢測可及早預(yù)防馬立克病的發(fā)生與及時(shí)治療動脈粥樣硬化。而馬立克病毒引起雞動脈粥樣硬化也可做為研究人類該病的病理模型。

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