李祥峰，高 洪，嚴(yán)玉霖，趙 汝，邵志勇，崔艷艷，盧 琴，臧雅婷

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明650201）

豬細(xì)小病毒?。≒orcine parvovirus infection，PPI）是由豬細(xì)小病毒（Porcine parvovirus，PPV）引起的豬繁殖障礙病，該病的主要特點(diǎn)是受感染的母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎和弱仔等，母豬無(wú)明顯的其他癥狀［1］。傳染源主要來(lái)自感染細(xì)小病毒的母豬和帶毒的公豬［2］。病毒可通過(guò)胎盤(pán)傳播，感染的母豬所產(chǎn)的死胎、仔豬及子宮內(nèi)排泄物中均含有高滴度的病毒［3］，而帶毒的豬所產(chǎn)的活仔豬可能帶毒，排毒時(shí)間很長(zhǎng)甚至終生。感染種公豬也是該病最危險(xiǎn)的傳染源，可在公豬的精液、精索、附睪、性腺中分離到病毒，種公豬通過(guò)配種傳染給易感母豬，并使該病傳播擴(kuò)散［4］。

1966年，Mayr在進(jìn)行豬瘟病毒組織培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)了PPV。1967年，Cartwright等首次在流產(chǎn)的胎兒中分離到PPV。中國(guó)在1982年首次分離到PPV，之后上海、四川、黑龍江、天津等地也分離到病毒［3］。目前，我國(guó)絕大多數(shù)地區(qū)均有PPV感染。自2005年以來(lái)，國(guó)內(nèi)多個(gè)省份對(duì)豬細(xì)小病毒陽(yáng)性感染率進(jìn)行了調(diào)查發(fā)現(xiàn)；全國(guó)范圍內(nèi)，豬群的陽(yáng)性感染率較高，而西南地區(qū)、華南地區(qū)和華北地區(qū)的陽(yáng)性感染率顯著高于其他地區(qū)［5］。近年來(lái)隨著規(guī)?；B(yǎng)殖的興起，常引起該病的暴發(fā)流行，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失，并且該病還常與豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病等繁殖障礙性疾病混合感染豬，容易忽視其存在而增加了其危害性。因此，加強(qiáng)豬細(xì)小病毒病的防控與監(jiān)測(cè)具有重要的意義。

為了解楚雄州的楚雄市、祿豐縣和南華縣地區(qū)PPV的感染情況，從楚雄市、祿豐縣、南華縣部分地區(qū)隨機(jī)采集未免疫豬群血清共276份進(jìn)行血清學(xué)分析，以期為該病的預(yù)防和凈化提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2012年從楚雄市、祿豐縣、南華縣部分地區(qū)隨機(jī)采集血清樣本276份，采集分離的血清于－20℃保存?zhèn)溆?。所采集的血清樣品的豬群均未免疫接種豬細(xì)小病毒疫苗。

1.1.2 試劑 豬細(xì)小病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）（批號(hào)：PPV－Ab 1103），購(gòu)于深圳市康百得生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 按照說(shuō)明采用間接ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)。設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，通過(guò)洗滌液配制、樣本稀釋、加樣反應(yīng)、加酶反應(yīng)、顯色反應(yīng)和終止反應(yīng)等操作，最后以空白對(duì)照調(diào)零，于酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀取OD值。

1.2.2 結(jié)果判定 當(dāng)空白對(duì)照空OD值＜0.05，陰性對(duì)照空OD值≤0.10，陽(yáng)性對(duì)照空OD值≥0.3時(shí)，實(shí)驗(yàn)為有效。臨界值COV為陰性對(duì)照平均值×2.1。被檢血清OD值≥COV時(shí)，為陽(yáng)性，被檢血清OD值＜COV時(shí)為陰性。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 不同組別間抗體陽(yáng)性率的比較采用Pearson X2檢驗(yàn)，以P＜0.01差異極顯著 ，統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS16.0。

2 結(jié)果

本試驗(yàn)通過(guò)間接ELISA方法共檢測(cè)血清276份，豬細(xì)小病毒抗體陽(yáng)性血清157份，陽(yáng)性率為56.9%。

2.1 不同性別豬群豬細(xì)小病毒病血清檢測(cè)結(jié)果

所采集的276份血清中，公豬血清100份，陽(yáng)性47份；母豬血清176份，陽(yáng)性110份。豬細(xì)小病毒抗體陽(yáng)性率分別為公豬47.0%，母豬62.5%（表1）。

表1 不同性別豬群豬細(xì)小病毒病血清檢測(cè)結(jié)果Table 1 The serum test results of PPV in different gender pigs

2.2 不同品種豬群豬細(xì)小病毒病血清檢測(cè)結(jié)果

所采集的276分血清中，約克夏豬血清115份，陽(yáng)性66份；斯格豬血清73份，陽(yáng)性41份；長(zhǎng)白豬血清49份，陽(yáng)性27份；杜洛克豬血清39份，陽(yáng)性23份。豬細(xì)小病毒抗體陽(yáng)性率分別為約克夏豬57.4%，斯格豬56.2%，長(zhǎng)白豬55.1%，杜洛克豬60.0%（表2）。

2.3 不同養(yǎng)殖方式豬群豬細(xì)小病毒病血清檢測(cè)結(jié)果

所采集的276份血清中，散養(yǎng)戶血清68份，陽(yáng)性43份；規(guī)模化豬場(chǎng)血清208份，陽(yáng)性114份。豬細(xì)小病毒抗體陽(yáng)性率分別為散養(yǎng)戶63.2%，規(guī)?；i場(chǎng)54.8%（表3）。

表2 不同品種豬群豬細(xì)小病毒病血清檢測(cè)結(jié)果Table 2 The serum test results of PPV in different variety of pigs

表3 不同養(yǎng)殖方式豬群豬細(xì)小病毒病血清檢測(cè)結(jié)果Table 3 The serum test results of PPV in different breeding ways

3 討論

此次調(diào)查研究的采樣方式均是隨機(jī)采取，采取部分地區(qū)的豬群的性別品種等為隨機(jī)選取。為探討不同性別、品種和養(yǎng)殖模式的豬群的易感性，本研究按照性別、品種和養(yǎng)殖模式進(jìn)行分組。本研究通過(guò)對(duì)2012年所采集的血清調(diào)查發(fā)現(xiàn)，楚雄州本分地區(qū)豬細(xì)小病毒陽(yáng)性率達(dá)56.9%，比曹興萍等［6］2008年所調(diào)查的29.44%明顯增高。說(shuō)明近些年該病在此地區(qū)的傳播呈上升趨勢(shì)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)豬細(xì)小病毒的防控工作，以免造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。通過(guò)對(duì)不同性別豬群對(duì)比發(fā)現(xiàn)，母豬的陽(yáng)性率為62.5%，明顯高于公豬的47.0%。因母豬感染后相比于公豬會(huì)表現(xiàn)出明顯的癥狀和病變，從而導(dǎo)致其免疫力下降及病毒的傳播，這可能是母豬感染率明顯高于公豬的主要原因，建議在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)母豬的監(jiān)控，但目前尚未見(jiàn)關(guān)于豬細(xì)小病毒的傳播與性別有關(guān)的報(bào)道。不同品種豬的PPV的感染率差異不顯著，杜洛克最高60%，長(zhǎng)白最低為55.1%，這一結(jié)果與明心中［7］的研究相似，說(shuō)明不同品種的豬對(duì)PPV的易感性差異不大，在對(duì)PPV進(jìn)行監(jiān)測(cè)時(shí)可不必考慮不同品種豬的易感性。而規(guī)模化養(yǎng)殖方式的陽(yáng)性率明顯低于散養(yǎng)的陽(yáng)性率，說(shuō)明豬細(xì)小病毒的感染與豬只的飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)規(guī)模和方式有關(guān)［8］，所以在實(shí)際生產(chǎn)中采取規(guī)模化養(yǎng)殖進(jìn)行凈化可降低PPV的感染率。此次調(diào)查只顯示了楚雄市、祿豐縣、南華縣部分地區(qū)豬群中豬細(xì)小病毒病感染情況，但此調(diào)查對(duì)了解、監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)該地區(qū)的生豬養(yǎng)殖及豬細(xì)小病毒病的防控和凈化仍有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

根據(jù)此次調(diào)查，該地區(qū)出現(xiàn)豬細(xì)小病毒感染的原因可能是：引種檢疫不嚴(yán)格；未免疫接種疫苗，導(dǎo)致免疫抗體缺失，病毒趁虛而入；豬場(chǎng)污染，缺乏監(jiān)測(cè)［9］。出現(xiàn)病毒感染的防控措施有加強(qiáng)檢驗(yàn)檢疫，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，科學(xué)免疫接種疫苗，加強(qiáng)抗體水平監(jiān)測(cè)。做好疫病監(jiān)測(cè)了解豬場(chǎng)疫病流行病學(xué)情況［10］。

豬細(xì)小病毒的感染不僅會(huì)影響豬只的生產(chǎn)性能，還會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失，并威脅動(dòng)物食品安全與公共衛(wèi)生。近年來(lái)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV－2）所帶來(lái)的危害使人們忽視了PPV的危害。而其三者混合感染的現(xiàn)象非常普遍，仍然是引起繁殖障礙的重要原因［11］。對(duì)于豬細(xì)小病毒病的治療目前還沒(méi)有有效方法，主要以預(yù)防為主。由于PPV的血清型單一，且具有很高的免疫原性，使用疫苗成為控制PPV感染的一種有效方法［12］。然而，任何疫病的控制的最終目標(biāo)是根除，所以開(kāi)發(fā)新型的標(biāo)記疫苗，區(qū)分野毒感染是免疫根除方案的首選［13］。

［1］ 諸亞平，趙長(zhǎng)城.豬細(xì)小病毒病流行的調(diào)查與防疫研究［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（1）：114－115.

［2］ Boisvert M，F(xiàn)ernandes S，Tijssen P.Multiple pathways involved in porcine parvovirus cellular entry and trafficking toward the nucleus［J］.J Virol，2010，84（15）：7782－7792.

［3］ 賴笑嫻.豬細(xì)小病毒病的研究進(jìn)展［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2010（6）：7－9.

［4］ 趙以云，王 強(qiáng)，左瑞華.豬細(xì)小病毒感染的診斷及防制策略［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（7－8）：42－45.

［5］ 仇 錚，任曉峰，崔尚金.豬細(xì)小病毒的致病機(jī)制與防控策略［J］.世界華人消化雜志，2013，21（1）：66－70.

［6］ 錢(qián)林東，曹興萍，王繼春，等.豬細(xì)小病毒病和弓形體病的血清學(xué)調(diào)查［J］.畜牧獸醫(yī)科學(xué)信息，2008，10：26－27.

［7］ 明心中，鐘細(xì)茍，段載金，等.江西省豬細(xì)小病毒血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，1998，24（3）：25－26.

［8］ 舒 展，魏潤(rùn)生，韓慶彥，等.甘肅省集約化養(yǎng)豬場(chǎng)細(xì)小病毒病血清學(xué)檢測(cè)［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2001，22（4）：112－113.

［9］ 范 磊，蔣法成，陳樹(shù)霞，等.江蘇省淮安市清浦區(qū)豬細(xì)小病毒病血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)豬業(yè)，2012（7）：30－31.

［10］ 史洪根，盛建華，周禮富.豬細(xì)小病毒病及其防治措施［J］.養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn)，2012（5）：110.

［11］ 藺文成，胡 峰，任 梅，等.豬細(xì)小病毒病國(guó)內(nèi)流行狀況以及防治策略［J］.豬業(yè)科學(xué)，2010（9）：90－95.

［12］ 杜 堅(jiān)，白安斌，梁保忠，等.豬細(xì)小病毒自然弱毒N株的免疫原性研究［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2009，25（1）：3－6.

［13］ Barbara E S，Jeffery J Z，et al.豬病學(xué)［M］.9版.趙德明，張中秋，沈建忠，等，譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：475－476.