史 琳 張安文 羅 宇 趙時梅 任傳偉 楊燕初

廣西科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室，廣西柳州 545005

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中發(fā)病率最高的組織學(xué)類型，已有研究指出細(xì)胞周期調(diào)控異常引發(fā)的DNA鏈結(jié)構(gòu)改變是乳頭狀癌的病因之一[1]。CDK2以cyclin-CDK復(fù)合物的形式參與調(diào)控細(xì)胞周期，是DNA復(fù)制的重要啟動因子。p27是CDKI家族中的一份子，能通過負(fù)性調(diào)控cyclin-CDK復(fù)合物來防止DNA異常復(fù)制的發(fā)生[2]。Ki-67是目前較為肯定的與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白，與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸、預(yù)后均具有相關(guān)性。CDK2和p27表達(dá)異常均可導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，同時聯(lián)合檢測Ki-67對判斷腫瘤細(xì)胞的惡性趨勢與增殖活性有重要意義。目前國內(nèi)在PTC中聯(lián)合檢測CDK2、p27及Ki-67的報道尚少，三者在PTC中表達(dá)的關(guān)系還有待進(jìn)一步探索和研究。本文主要研究采用的免疫組化法檢測PTC、甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺組織中CDK2、p27及Ki-67蛋白的表達(dá)，著重闡述了三者的表達(dá)與PTC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

隨機(jī)選取廣西科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院于2007年7月—2010年1月期間在該院接受治療的外科手術(shù)切除的甲狀腺病變組織100例，其中有乳頭狀癌40例，結(jié)甲30例，腺瘤30例。40例癌組織中女性患者35例、男性患者5例；最大年齡71歲，最小年齡16歲，中位年齡38歲；100例病變組織腫瘤直徑0.1～7 cm，平均0.36 cm，其中＞1 cm者17例，≤1 cm者23例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者11例。全部材料術(shù)前均無化、放療及免疫治療史。另外抽取了20例死亡于非甲狀腺疾病的尸體解剖中的正常甲狀腺組織作為對照組。

1.2 試劑及方法

兔抗人CDK2多克隆抗體和SP試劑盒、鼠抗人p27單克隆抗體、及Ki-67單克隆抗體均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。所采用的SP法免疫組化技術(shù)，染色操作步驟流程是按照試劑盒說明書進(jìn)行。用PBS液取代一抗作陰性對照，用已知乳腺癌CDK2、p27陽性切片及已知肺鱗癌Ki-67陽性切片作陽性對照。

2 結(jié)果

2.1 不同甲狀腺組織中CDK2、p27及Ki-67蛋白的表達(dá)

見圖1～2。PTC中Ki-67蛋白的陽性表達(dá)率為80.0%（32/40）、CDK2蛋白的陽性表達(dá)率為80.0%（32/40），兩者均明顯高于結(jié)甲、腺瘤及正常組（P ＜ 0.01，P ＜ 0.01）。在PTC中p27蛋白的陽性表達(dá)率為22.5%（9/40），顯著低于正常組、腺瘤及結(jié)甲（P ＜ 0.01）。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌中Ki-67蛋白的陽性表達(dá)

圖2 甲狀腺乳頭狀癌中CDK2蛋白的陽性表達(dá)

2.2 PTC中CDK2、p27、Ki-67蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

PTC中CDK2、ki-67蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)均無相關(guān)性（均為P＞0.05）；p27蛋白表達(dá)與患者年齡有關(guān)聯(lián)（P=0.049），與患者的性別、腫塊直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無相關(guān)性（均為P＞0.05）。

2.3 PTC中CDK2、p27、Ki-67蛋白表達(dá)的相互關(guān)系

PTC中CDK2與Ki-67蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.947，P ＜ 0.01），CDK2、Ki-67與p27的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.413，P ＜ 0.01；r=-0.381，P ＜ 0.05）。

3 討論

在正常組織中，p27的高表達(dá)阻止了細(xì)胞由G1期到S期轉(zhuǎn)化，使進(jìn)入S期的瘤細(xì)胞減少，從而導(dǎo)致了Ki-67不能充分發(fā)揮促進(jìn)和參與DNA復(fù)制的功能，而在腫瘤中情況則相反。CDK2、p27及Ki-67的異常表達(dá)，提示細(xì)胞周期紊亂，導(dǎo)致異常復(fù)制和多倍體的形成，有助于細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。Hiroaki I等[4]檢測卵巢透明細(xì)胞癌中CDK2和p27的表達(dá)，提出CDK2的低表達(dá)和p27的高表達(dá)可能涉及了卵巢透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。本組資料與Hiroaki I報道有所不同，PTC中CDK2高表達(dá)而p27低表達(dá)。Yasusei K等[5]檢測p27、Ki-67在口腔鱗癌中的表達(dá)，得出p27在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)明顯低于原發(fā)灶，而Ki-67在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中均為過表達(dá)。本組資料與Yasusei K報道有差異，PTC中Ki-67與臨床病理參數(shù)間均無相關(guān)性，而p27僅與患者年齡有關(guān)。本實驗研究表明，PTC中CDK2、Ki-67蛋白的高表達(dá)而p27蛋白低表達(dá)，良性病變及正常組中則相反。CDK2、Ki-67蛋白高表達(dá)及p27低表達(dá)與PTC的發(fā)生、發(fā)展可能存在某種關(guān)聯(lián)，因此，二者或三者聯(lián)合檢測可以作為早期臨床診斷和評價甲狀腺腫瘤細(xì)胞增殖活性的潛在的參考指標(biāo)。

[1] 江昌新，譚郁彬，主譯.WHO內(nèi)分泌器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006:51-99.

[2] Nallamshetty S,Crook M,Boehm M,et al.The cell cycle regulator p27Kip1 interacts with MCM7,a DNA replication licensing factor, to inhibit initiation of DNA replication[J].FEBS Lett,2005,579(29):6529-6536.

[3] Bukholm IR,Bukholm G,Holm R,et al.Association between histology grade,expression of HsMCM2,and cyclin A in human invasive breast carcinomas[J].J Clin Pathol,2003,56(5):368-373.

[4] Hiroaki I,Tomokazu Y,Cheryl Lyn W,et al.Novel mechanism of reduced proliferation in ovarian clear cell carcinoma cells:Cytoplasmic sequestration of CDK2 by p27[J].Gynecologic Oncology,2011,122(3):641-647.

[5] Yasusei K,Shojiro K,Sunao S,et al.Establishment of an oral squamous cell carcinoma cell line with high invasive and p27 degradation activities from a lymph node metastasis[J].Oral Oncology,2003,39(5):515-520.