胡玉英 胡躍強(qiáng) 張青萍 梁 妮 宋 曦 (廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣西 南寧 530023)

血管性癡呆(VD)是各種腦血管疾病導(dǎo)致的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合征〔1〕，是老年癡呆的主要類型之一〔2〕?，F(xiàn)行西醫(yī)治療VD是通過(guò)治療腦血管病和改善腦功能來(lái)減輕癡呆癥狀，但治療效果并不理想。研究表明交泰丸能抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性，提高乙酰膽堿(Ach)含量，修復(fù)及保護(hù)缺血再灌注VD大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元，有較好的改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶的作用〔3〕。本研究主要觀察交泰丸對(duì)VD大鼠腦組織單胺氧化酶(MAO)活性及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)含量的影響，探討該藥改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)動(dòng)物:健康清潔級(jí)SD大鼠，雌雄兼用，體重為250～300 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。(2)藥物:交泰丸由黃連、肉桂(黃連∶肉桂=10∶1)組成，其有效部位群總提取物，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室提供，為棕黃色粉末，人日用量0.02 g/kg，臨床成人日用生藥量為16.5 g;喜得鎮(zhèn)片(通用名:甲磺酸二氫麥角堿片，天津華津制藥廠和瑞士諾華制藥有限公司合作生產(chǎn)產(chǎn)品)，1 mg/片，成人日用量3～6 mg/d。批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H1010054，產(chǎn)品批號(hào):1107011，以上藥品實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水配制成溶液，4℃冰箱保存。(3)主要試劑:MAO測(cè)定試劑盒、NE測(cè)定試劑盒、DA測(cè)定試劑盒、5-HT測(cè)定試劑盒由美國(guó)R＆D公司進(jìn)口分裝，購(gòu)自桂海生物科技有限公司;其他試劑均為市售。(4)主要儀器:SM-3型全自動(dòng)酶免分析儀，MG-2Y型迷宮(三興聲電公司)，臺(tái)式低溫離心機(jī)(日本SYNYO公司)，HM-200型電子天平(日本)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物篩選 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后進(jìn)行Y型迷宮訓(xùn)練1 d。將大鼠置起步區(qū)適應(yīng)環(huán)境3 min，通電(40 V)，Ⅰ臂為起點(diǎn)，Ⅱ臂為安全區(qū)(亮燈)，若大鼠從起步區(qū)直接逃至Ⅱ區(qū)，為正確反應(yīng)，而逃往Ⅲ區(qū)或仍在Ⅰ區(qū)徘徊，則為錯(cuò)誤。當(dāng)大鼠逃至安全區(qū)后，休息1 min，然后進(jìn)行下一次測(cè)試，起點(diǎn)和安全區(qū)變換，按Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→I的順序，依次重復(fù)，連續(xù)測(cè)30次，以連續(xù)10次中有9次正確反應(yīng)為學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)，篩選出達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的大鼠60只。

1.2.2 模型復(fù)制與分組 參照龔彪等〔4〕制備方法進(jìn)行制備VD大鼠模型。用3.5%水合氯醛(1 ml/100 g體重)經(jīng)腹腔注射麻醉大鼠后仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切開(kāi)，依次分離頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(CEA)，在CCA距分叉約5 mm處掛線并結(jié)扎CEA，牽拉CEA斷端分離頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，并掛線分離ICA主干，用蛙心夾夾住CCA近端和ICA遠(yuǎn)端，并在CEA上(靠近CCA分叉處)剪一小口，將尼龍釣絲沿切口插入CEA，經(jīng)CCA分叉處，并將預(yù)先放置于CEA根部的絲線打一單結(jié)，然后移去ICA上的蛙心夾，將釣絲向ICA入顱內(nèi)的方向推進(jìn)約19～21 mm，微遇阻力時(shí)停止，使釣絲頭端通過(guò)大腦中動(dòng)脈(MCA)起始處，到達(dá)大腦前動(dòng)脈(ACA)，阻斷該側(cè)MCA的血流，導(dǎo)致腦缺血。此時(shí)大鼠右眼虹膜顏色變淺，再次結(jié)扎入口處，尼龍釣絲外留約1 cm，縫合傷口，從阻斷血流開(kāi)始計(jì)時(shí)，2 h后提拉線頭使MCA再灌注，造成局灶腦缺血再灌注模型。將模型組大鼠隨機(jī)分為模型組、低、中、高劑量交泰丸組、喜得鎮(zhèn)組。另設(shè)假手術(shù)組:麻醉和手術(shù)過(guò)程與模型組相同，但不阻斷MCA。模型復(fù)制大鼠第4天按神經(jīng)病學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)〔5〕篩選合格的VD大鼠。各組在手術(shù)造模后第2天給藥，假手術(shù)組、模型對(duì)照組均予灌胃生理鹽水10 ml/kg，1次/d;低、中、高劑量交泰丸組分別予灌胃交泰丸 0.5、1、2 g·kg－1·d－1，喜得鎮(zhèn)組予灌胃喜得鎮(zhèn)0.6 mg·kg－1·d－1，連續(xù)灌藥30 d。除去不合格及死亡的動(dòng)物，最后每組8只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 腦組織MAO活性及NE、DA、5-HT含量的測(cè)定 迷宮測(cè)試結(jié)束后，斷頭取腦，用ELISA法測(cè)定MAO活性，NE、DA、5-HT含量，檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，模型組MAO活性明顯升高，NE、DA、5-HT含量明顯降低，與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P＜0.01)，低、中、高劑量交泰丸組及喜得鎮(zhèn)組MAO活性均降低，NE、DA、5-HT含量均升高，與模型組比較有顯著差異(P＜0.05或P＜0.01)，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠腦組織MAO、NE、DA、5-HT含量的比較(± s，n=8)

表1 各組大鼠腦組織MAO、NE、DA、5-HT含量的比較(± s，n=8)

與假手術(shù)組比較:1)P＜0.01;與模型組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 MAO(U/L) NE(pg/ml) DA(pg/ml) 5-HT(μmol/L)假手術(shù)組 94.75±2.59 869.21±5.15 3443.54±2.56 71.87±6.13模型組 223.17±3.621) 231.10±6.171) 924.1±6.751) 31.16±7.201)低劑量交泰丸組 195.22±2.102) 445.65±8.112) 1165.21±0.192) 51.37±3.212)中劑量交泰丸組 112.98±2.352) 543.78±4.582) 1170.93±4.512) 61.40±3.232)高劑量交泰丸組 96.35±7.183) 769.43±7.193) 3211.43±8.463) 71.58±7.183)喜得鎮(zhèn)組 198.05±4.282) 678.21±8.212) 2169.12±3.522) 51.39±3.222)

3 討論

中醫(yī)藥研究現(xiàn)狀發(fā)現(xiàn)目前治療VD大多從補(bǔ)腎健脾、豁痰開(kāi)竅、益氣活血化瘀等方面入手，較少?gòu)男哪I相關(guān)角度來(lái)考慮。《羅氏會(huì)約醫(yī)鏡·論怔忡》中指出:“健忘者，心腎之不交也。為事有始無(wú)終，言談不知首尾。治者，宜補(bǔ)腎而使之上交，養(yǎng)心而使之下降，則水火交濟(jì)，何健忘之有!”故筆者提出癡呆治宜交通心腎為法，方選交泰丸。交泰丸源于《韓氏醫(yī)通》，方名出自清·王士雄《四科簡(jiǎn)效方》:“生川連五錢，肉桂心五分，研細(xì)，白蜜丸，空心淡鹽湯下，治心腎不交，怔忡無(wú)寐，名交泰丸”，是中醫(yī)著名常用方劑。黃連苦寒入心，清降心火以下交腎水;肉桂辛熱入腎，溫升腎水以上濟(jì)心火?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃連的主要成分小檗堿有良好的擴(kuò)張血管和降低血壓的作用〔6〕;肉桂的主要成分是桂皮醛，具有抗炎、抗氧化、抑制活性氧生成、抗血栓及抑制血小板聚集等作用〔7〕。

本實(shí)驗(yàn)提示腦缺血時(shí)腦組織中MAO活性升高，氧化分解單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，使腦內(nèi)NE、DA、5-HT水平下降，影響學(xué)習(xí)記憶，促進(jìn)癡呆發(fā)生。因此通過(guò)提高腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，降低MAO活性，進(jìn)而明顯改善學(xué)習(xí)記憶能力。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT作為中樞神經(jīng)遞質(zhì)，參與突觸傳遞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，可直接或間接參與大腦的功能活動(dòng)，癡呆的程度與海馬及下丘腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA和5-HT的下降程度相一致〔8〕，因此其改變對(duì)VD的發(fā)展程度及預(yù)后相當(dāng)重要。還有資料表明，VD發(fā)病過(guò)程中大腦皮層、海馬部的神經(jīng)遞質(zhì)明顯減少，Ach及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、NE、DA 減少與 VD 的智力下降密切相關(guān)〔9，10〕。其中 NE在記憶保持減少方面起重要作用，而記憶改善與促進(jìn)DA釋放關(guān)系密切，5-HT系統(tǒng)則參與調(diào)節(jié)情緒、動(dòng)機(jī)和食欲等〔11〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示交泰丸能抑制VD大鼠腦組織MAO活性，減少單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的氧化分解，增加NE、DA、5-HT含量，促進(jìn)VD大鼠空間辨別學(xué)習(xí)記憶功能的恢復(fù)。

本研究表明交泰丸改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的機(jī)制可能是通過(guò)降低VD大鼠腦MAO活性，減少單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的氧化分解，提高NE、DA、5-HT含量，從而改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及提高其智能，為交泰丸臨床治療VD患者提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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