宗振峰 袁 君 楊 博 任明明 孫鳳莉 (滄州市中心醫(yī)院胸外科，河北 滄州 0600)

多數(shù)非小細(xì)胞肺癌患者在臨床診斷中已經(jīng)處于中晚期，從而導(dǎo)致失去治療的最佳時機。因此盡早地對該病進(jìn)行診斷和臨床治療具有重要意義。而半胱氨酸蛋白酶(Caspase-8)是一種執(zhí)行能力強、凋亡調(diào)控能力強的功能性蛋白，一般處于抑制狀態(tài)〔1〕，但在癌癥患者組織中表達(dá)升高。本文探討非小細(xì)胞肺癌患者Caspase-8蛋白表達(dá)情況，并與正常的肺組織進(jìn)行對比。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2010年3月至2011年3月收錄的50例非小細(xì)胞肺癌患者，均經(jīng)臨床病理檢查。其中，男25例，女25例，年齡58～78〔平均(62.4±2.4)〕歲，病理類型:腺癌15例，鱗癌20例，腺鱗癌15例。WHO臨床分期:Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期25例。淋巴轉(zhuǎn)移30例，淋巴未轉(zhuǎn)移20例。UICC分期，淺表性癌20例，浸潤性癌30例。其中，選取腫瘤組織為2 cm×1 cm大小作為觀察組(50例)，并選取距離病灶＞5 cm的組織作為對照組(50例)。

1.2 試劑與儀器 試劑:兔抗人Caspase-8多克隆抗體(由上海長島公司而生產(chǎn))、Caspase-8抗體稀釋液(由福州邁新公司而生產(chǎn))、免疫組化SP試劑盒(由福州邁新公司而生產(chǎn))、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑(由北京中杉生物科技有限公司而生產(chǎn))。設(shè)備:102M型Motic顯微鏡(由德國Motic公司而生產(chǎn))、JS-380A型自動凝膠圖像分析儀(由上海培清科技有限公司而生產(chǎn))。

1.3 檢測方法采取免疫組織化學(xué)法測定Caspase-8蛋白表達(dá)情況〔2〕:①將選取的標(biāo)本采取10.0%的福爾馬林固定處理，并進(jìn)行透明、脫水和包埋以及切片等，切片厚度為5 μm，水浴。將處理后的標(biāo)本進(jìn)行烘烤，37℃，24 h;②進(jìn)行二甲苯脫蠟，10 min，并采取梯度酒精脫苯處理5～10 min，用蒸餾水沖洗5 min;③選取1∶200濃度的一抗，并滴加兔抗人Caspase-8多克隆抗體與稀釋液處理3 min;④DAB顯色，在溫室情況下進(jìn)行30 min，蒸餾水洗滌;⑤蘇木素復(fù)染，觀察顯色情況。

1.4 結(jié)果判讀 主要依據(jù)其顯色情況進(jìn)行判讀，陽性為棕黃色〔3〕，并選取5個不同倍數(shù)進(jìn)行觀察，每個視野隨機選取100個。陽性:細(xì)胞計數(shù)≥25.0%，陰性:＜25.0%。其中:25% ～50%為(+)，50% ～75%為()，計數(shù)百分比 ＞75%()。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件，計數(shù)資料比較配對資料采用McNemar χ2檢驗，組間比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 兩組檢測結(jié)果比較 觀察組的Caspase-8蛋白的陽性表達(dá)率(60.0%)明顯低于對照組(84.0)，其中(+)28例(56.0%)vs 30例(60.0%)，()2例(4.0%)vs 12例(24.0%)，(－)20例(40%)vs 8例(16.0%)(P＜0.05)。

2.2 兩組定位表達(dá)比較 觀察組的Caspase-8蛋白表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核表達(dá)率為84.0%(42/50)，細(xì)胞質(zhì)表達(dá)率16.0%(8/50);而對照組主要定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)表達(dá)率100.0%，兩組Caspase-8蛋白表達(dá)定位情況比較具有明顯的差異(P＜0.05)。

2.3 Caspase-8蛋白表達(dá)與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移分析 Caspase-8蛋白表達(dá)與是否淋巴轉(zhuǎn)移和臨床分期以及腫瘤浸潤深度有直接聯(lián)系，其中，淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤性癌和Ⅲ～Ⅳ患者的組織中Caspase-8蛋白陽性表達(dá)率明顯的高于淋巴無轉(zhuǎn)移、淺表性癌和Ⅰ～Ⅱ患者組織表達(dá)情況(P＜0.05)。見表1。

表1 Caspase-8蛋白表達(dá)與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移關(guān)系分析〔n(%)〕

3 討論

非小細(xì)胞肺癌是臨床中比較常見的一種惡性腫瘤，嚴(yán)重影響患者的身體健康，而且在患者細(xì)胞凋亡的過程中，經(jīng)常伴隨著正常細(xì)胞凋亡出現(xiàn)異常，從而使得正常細(xì)胞出現(xiàn)極度的惡化〔4〕。而在臨床中，一般細(xì)胞的凋亡與癌變產(chǎn)生具有密切聯(lián)系，且癌變作為細(xì)胞凋亡的重要因素，患者體內(nèi)的Caspase-8蛋白減少也能夠?qū)е录?xì)胞凋亡，而且很有可能導(dǎo)致癌變的情況出現(xiàn)〔5，6〕。

通過本次研究分析，Caspase-8蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中得到異常的表達(dá)，由此說明，Caspase-8蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織表達(dá)情況明顯的低于正常肺組織中的表達(dá)情況〔7〕;臨床中Caspase-8蛋白的減少能夠誘發(fā)癌細(xì)胞的擴散。而本研究結(jié)果進(jìn)一步說明，在非小細(xì)胞肺癌中，Caspase-8蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞核，而正常組織的Caspase-8蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)。出現(xiàn)這種情況主要與該蛋白的本身結(jié)構(gòu)組織有一定的關(guān)系，這種自身結(jié)構(gòu)組織能夠?qū)⒃瓉淼亩ㄎ恍盘柛淖?，并使其得到大量的轉(zhuǎn)移，從而使得細(xì)胞核中大量存在〔8〕。

組織中的Caspase-8蛋白表達(dá)與腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移以及臨床分期有直接聯(lián)系〔9〕。說明Caspase-8蛋白的表達(dá)直接反映出非小細(xì)胞肺癌患者的病情狀況〔10〕。

綜上所述臨床中可以測定組織中的Caspase-8蛋白表達(dá)情況進(jìn)行判斷患者是否發(fā)生非小細(xì)胞肺癌，而且對該病的病情程度分析也具有一定的應(yīng)用價值。

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3 黃文芳，楊永長，劉 華，等.辛伐他汀誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡過程中Caspase-3、Caspase-9活性變化〔J〕.腫瘤防治研究，2007;34(1):39-41.

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6 劉 茜，李 進(jìn)，孫柏林，等.RhoE、p53和caspase-3在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.診斷病理學(xué)雜志，2009;16(2):117-9.

7 陳永春，莊英幟，梁曉秋，等.Caspase-8和Bcl-2在PIG11誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡中的作用〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2011;19(9):866-7.

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10 杜 寧，孫向飛，胡麗娟，等.Caspase-8在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其在肺癌A549細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中作用〔J〕.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2012;28(6):572-5，579.