王惟

不同制備方法制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量研究

王惟

目的 考察全自動(dòng)細(xì)胞處理儀ACP215和傳統(tǒng)手工制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量差異。方法 將采集40袋400ml全血隨機(jī)分2組, 全自動(dòng)細(xì)胞處理儀ACP215組和傳統(tǒng)手工法分離組, 對(duì)制備成的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞進(jìn)行血紅蛋白質(zhì)量、游離血紅蛋白、白細(xì)胞殘留量、甘油殘留量的質(zhì)量檢測(cè)。結(jié)果 全自動(dòng)細(xì)胞處理儀ACP215制備血紅蛋白含量顯著高于傳統(tǒng)手工制備法, 甘油殘留量和游離血紅蛋白顯著低于傳統(tǒng)手工制備法, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 兩種制備方法的白細(xì)胞殘留量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 全自動(dòng)細(xì)胞處理儀ACP215制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量比傳統(tǒng)手工制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量更好。

冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞；質(zhì)量差異；全自動(dòng)細(xì)胞處理儀ACP215

冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞主要適用于Rh(-)稀有血型紅細(xì)胞的長期保存, 供臨床稀有血型患者應(yīng)急使用以及自身輸血提供方便［1］。加入甘油后紅細(xì)胞處于高滲狀態(tài), 必須用梯度洗滌方法去除甘油, 目前臨床應(yīng)用的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞主要是機(jī)器和手工兩種制備方法, 隨著科技高速發(fā)展, 機(jī)洗冰凍紅細(xì)胞, 因其操作時(shí)間短, 洗滌后的Rh(-)紅細(xì)胞安全性及有效性均良好, 逐漸取代手工制備, 現(xiàn)將機(jī)洗ACP215制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞和傳統(tǒng)手工制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量比較, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 復(fù)方甘油試劑(北京博德桑特)、三珠袋(北京博德桑特)、ACP215紅細(xì)胞洗滌耗材(美國血技)、9%氯化鈉(北京博德桑特)、0.9%氯化鈉(山東威高)、輸血器(江西洪達(dá))、離心機(jī)(賀利氏6000I)、振蕩器(金壇市)、-80℃冰箱(三洋)、無菌接駁機(jī)(泰爾茂)、恒溫水浴箱(余姚市東方電工儀器廠)鎢酸鈉(天津化學(xué)試劑四廠)、氫氧化鈉(天津博迪化工)、乙二醇(天津富宇精細(xì)化工)、無水乙醇(沈陽華東試劑廠)、稀釋液(希森美康醫(yī)用電子有限公司)、酚酞(沈陽華東試劑廠)、高碘酸鈉(天津福晨化學(xué)試劑廠)、血漿游離血紅蛋白試劑盒(北京瑞爾達(dá)生物科技)、溶血?jiǎng)?希森美康醫(yī)用電子有限公司)、山東威高濾白血袋。

1.2 取樣 采集40袋400 ml, 分A、B兩組。

1.3 方法

1. 3.1 甘油化方法 將去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞或全血離心去上清, 將紅細(xì)胞移至三珠袋中加甘油, 在振蕩器上操作, 動(dòng)作需輕柔。200 ml紅細(xì)胞加甘油160 ml, 控制加甘油速度先慢后快, 前8 min40滴/ min左右, 逐漸提高滴速80滴/min左右, 25 min左右加完。在室溫靜止30 min送-80℃速凍保存。1. 3.2 洗脫甘油(手工)：用梯度洗滌方法, 先用9%NaCl溶液每200 ml全血一袋80ml濃鹽, 先40滴/min左右,2 min后80滴/ min, 7-8 min加完, 靜止5 min, 再加入50 ml左右的0.9%NaCl, 速度控制在60滴/ min, 靜止5 min后離心,離心轉(zhuǎn)速2300轉(zhuǎn), 離心時(shí)間為6 min。離心后去除上清, 再加0.9%NaCl 80~100滴/ min, 加150 ml左右離心, 離心轉(zhuǎn)速2300轉(zhuǎn), 離心時(shí)間為6 min, 反復(fù)三次, 最后成品冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞毛重為240 ml/U。

1. 3.3 ACP215制備：-80℃取出冰凍紅細(xì)胞, 放入37~42℃水浴箱內(nèi)融化, 4~5 min/袋, 融化后靜止5 min, 利用無菌接駁機(jī)將血袋和ACP215全自動(dòng)細(xì)胞處理儀的專用耗材連接,所使用洗滌耗材同手工制備。按照預(yù)先編制的程序, 自動(dòng)洗滌冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)(P＜0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1 全自動(dòng)細(xì)胞處理儀、手工制備質(zhì)量比較

2.2 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

血紅蛋白含量：≥32 g/L；游離血紅蛋白含量≤1g/L；白細(xì)胞殘留量≤4×107/L；甘油殘留量≤10 g/L［2］。

3 討論

-80℃冰凍保存紅細(xì)胞具有保存時(shí)間長、保存效果好的特點(diǎn), 是目前最有效的紅細(xì)胞長期保存方法［3］, 是稀有血型輸血以及自身輸血重要手段。冷凍保存紅細(xì)胞, 既爭(zhēng)取了搶救時(shí)間, 又極大方便了臨床用血, 近年來ACP215全自動(dòng)細(xì)胞處理儀在我國使用已逐步取代手工制備, 手工制備存在消耗時(shí)間比較長, 每U4 h左右, 并且是半開放式制備, 存在被污染的安全隱患。而全自動(dòng)處理儀制備出冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞屬全封閉式, 制備時(shí)間短, 耗時(shí)1 h左右, 縮短臨床患者等待搶救時(shí)間, 減少血液污染機(jī)率, 降低勞動(dòng)強(qiáng)度, 洗滌效果良好, 實(shí)現(xiàn)血站自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的制備模式, 機(jī)器制備是有效保證血液質(zhì)量的前提。

［1］ 康惠軍, 葉萍. 臨床輸血等.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社, 2006.

［2］ 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).全血及成分血質(zhì)量要求. 2012.

［3］ 靳鵬, 劉安, 曹偉, 等.新型冰凍紅細(xì)胞洗滌機(jī)洗滌效果的研究.中國輸血雜志, 2005, 18(3):212-213.

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