柴婷婷

甘油化時滴速對冰凍解凍去甘油紅細胞質(zhì)量影響

柴婷婷

目的 對本站制備冰凍解凍去甘油紅細胞方法進行探索, 并對其質(zhì)量進行分析評價。方法 隨機抽取本站紅細胞懸液4℃保存9 d以內(nèi)20u,隨機分成甲組10u, 加甘油速度40滴/分和乙組10U加甘油速度120滴/min, 分別進行甘油化, -80℃冰凍及用ACP215全自動血細胞處理儀解凍。甘油化處理, 進行質(zhì)量檢測：甲組游離血紅蛋白(0.14±0.05) g/L；乙組游離血紅蛋白(1.01±0.02) g/L, 兩組差異有統(tǒng)計學意義, (P＜0.01),甲乙兩組其他指標符合國家標準, 差異均無統(tǒng)計學意義。結(jié)論 本站制備冰凍解凍去甘油紅細胞的方法高效高質(zhì), 值得推廣。

冰凍紅細胞；冰凍解凍去甘油紅細胞；全自動血細胞處理儀

成分輸血在我國已經(jīng)廣泛開展, 其中Rh(D)陰性血的用量逐年增加, Rh(D)陰性血比例在我國漢族人群僅占(0.3~0.5%)［1］, 超低溫甘油化冰凍保存紅細胞作為血站平時貯備, 一旦臨床急需可立即進行解凍洗滌, 即極大方便了臨床用血, 又保證搶救生命時間, 而甘油化制備冰凍解凍紅細胞是長期保存Rh(D)陰性血最理想方法, 作者按加甘油時不同滴速分成甲、乙兩組, 檢測洗滌后質(zhì)控指標, 對冰凍解凍去甘油紅細胞制備方法進行探索, 并對其質(zhì)量進行評價。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材 復方甘油試劑(北京博德桑特)、三珠袋(北京博德桑特)、ACP215紅細胞洗滌耗材(美國血技)、9%氯化鈉(北京博德桑特)、0.9%氯化鈉(山東威高)、輸血器(江西洪達)、賀利氏6000I離心機(德國)、三洋-80℃速凍冰箱(MDF－U32V型、日本)、調(diào)速多用振蕩器(HY－4型、金壇市)、電熱恒溫水浴箱(HHW21－600型、天津)、無菌接駁機(SC-201型、日本)、鎢酸鈉(天津化學試劑四廠)、氫氧化鈉(天津博迪化工)、乙二醇(天津富宇精細化工)、無水乙醇(沈陽華東試劑廠)、稀釋液(希森美康醫(yī)用電子有限公司)、酚酞(沈陽華東試劑廠)、高碘酸鈉(天津福晨化學試劑廠)、血漿游離血紅蛋白試劑盒(北京瑞爾達生物科技)、溶血劑(希森美康醫(yī)用電子有限公司)。

1.2 取樣 用本站檢測紅細胞懸液4℃保存9 d以內(nèi)20 U,隨機分成甲組10 U, 乙組10 U。

1.3 冰凍紅細胞制備 取9 d內(nèi)紅細胞懸液各20 U, 經(jīng)2200轉(zhuǎn), 25 min離心后, 分出上清, 轉(zhuǎn)移至三珠袋, 通過無菌接駁機與輸血器相連接, 加入57%復方甘油溶液, 振蕩器60次/ min, (甲組滴速40滴/min, 加5min后靜止5min再繼續(xù)加入,仍是40滴/min, 至加甘油完畢；乙組滴速120滴/min, 勻速加完, 不需靜止)排盡空氣, 室溫平衡放置30min, 紙盒裝入后放在-80℃保存一個月后待用。

1.4 冰凍解凍去甘油紅細胞制備 保存一個月后, 冰凍紅細胞從-80℃冰箱取出立即放入37~42℃恒溫水浴箱中溶化, 4~6 min/(袋·U), 啟動ACP215全自動血細胞處理儀, 應用去甘油化程序洗滌, 用9%氯化鈉80ml、0.9%生理鹽水2000 ml, 解凍洗滌過程大約60 min。

1.5 質(zhì)量標準 紅細胞回收率≥80%, 白細胞殘留率≤1%,血小板殘留率≤1%, 甘油含量<10g/L, 血漿游離血紅蛋白含量≤1g/L, 體外溶血≤50%。

1.6 統(tǒng)計學方法 計數(shù)資料以(x±s)表示, 兩組采用t檢驗, P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 兩組結(jié)果差別比較

2 結(jié)果

3 討論

冰凍解凍去甘油紅細胞在制備過程中, 冰凍紅細胞制備是質(zhì)量的前提, 冰凍與解凍洗滌過程操作必須嚴格按照操作規(guī)程進行, 減少紅細胞損失［2］。甘油的加入能使紅細胞膜受到很大沖擊, 滲透壓逐步達到平衡很重要, 如果在加入甘油時先40滴/分, 加5 min后靜止5 min再繼續(xù)加入40滴/min,使紅細胞膜滲透壓能得到很好的平衡, 甲組以可間歇再加入方式每次為40滴/min, 是本站經(jīng)過實踐檢驗后確立的操作方法；乙組為設(shè)立對照組加入甘油滴速120滴/min, 其余條件相同, 甲組游離血紅蛋白(g/L)為0.14±0.05, 乙組游離血紅蛋白為(1.02±0.04) g/L, 兩組差異具有統(tǒng)計學意義, (P＜0.01),實驗證明, 過快的加入甘油, 使紅細胞膜受到強烈刺激, 血與甘油混合后滲透壓得不到很快平衡, 很容易產(chǎn)生溶血, 使血液制備質(zhì)量得不到保證, 所以作者認為加甘油時滴速的保證起到關(guān)鍵作用。

［1］ 邱艷.全血成分血質(zhì)量要求與血液標準化.北京:中國標準出版社, 2002.

［2］ 安萬新,于衛(wèi)建.輸血技術(shù)學.北京:科學技術(shù)文獻出版社, 2010: 152.

130033 長春市中心血站