趙洪濤，張 勇，趙春清，閆 威，高立學(xué)，李 威

1保定市第二醫(yī)院，河北保定 071051；2解放軍總醫(yī)院，北京 100853

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤，約占60%[1]，其頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，近年統(tǒng)計(jì)其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[2]。探討甲狀腺癌的生物學(xué)行為及協(xié)助診斷、預(yù)測(cè)療效的有關(guān)腫瘤標(biāo)志物是一個(gè)研究熱點(diǎn)。CD44v6是一種表面跨膜糖蛋白分子，主要參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的特異性粘連過(guò)程[3]，腫瘤細(xì)胞CD44v6出現(xiàn)使細(xì)胞表面黏附分子的構(gòu)成和功能發(fā)生改變，使腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的能力增強(qiáng)。Rasp21蛋白質(zhì)為具有三磷酸鳥(niǎo)苷(guanosine triphosphate，GTP)酶活性的G蛋白，正常情況下存在量很少，當(dāng)表達(dá)過(guò)多時(shí)致細(xì)胞生長(zhǎng)分化失控，發(fā)生癌變。本文用免疫組化法研究CD44v6與Rasp21在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)，探討其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

對(duì)象和方法

1 對(duì)象 收集2009-2011年保定市第二醫(yī)院外科手術(shù)切除的甲狀腺乳頭狀癌80例，其中男45例，女35例；年齡24~68(平均57.6)歲，55例有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。甲狀腺腺瘤組織80例，男女各40例，年齡20~65(平均52.3)歲。以上病例術(shù)前均未經(jīng)過(guò)治療。

2 分組及陽(yáng)性判斷方法 依據(jù)人民衛(wèi)生出版社第七版病理學(xué)規(guī)定，依據(jù)病理結(jié)果，分為甲狀腺乳頭狀癌組和甲狀腺腺瘤組。免疫組化采用SP法。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，分別作HE染色及SP免疫組化染色，SP染色法按照SP試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。每例用TBS代替第一抗體作陰性對(duì)照，用已知CD44v6和Rasp21陽(yáng)性的組織作陽(yáng)性對(duì)照。CD44v6陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒，陽(yáng)性表達(dá)超過(guò)腫瘤細(xì)胞數(shù)10%定義為陽(yáng)性，否則為陰性。Rasp21染色以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。CD44v6和Rasp21單克隆抗體及SP試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，當(dāng)n≥40，且某一個(gè)理論數(shù)1＜T≤5時(shí)，須對(duì)χ2進(jìn)行連續(xù)性校正，避免假陽(yáng)性結(jié)論。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

甲狀腺乳頭狀癌組的CD44v6與Rasp21陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于甲狀腺腺瘤組，甲狀腺乳頭狀癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甲狀腺乳頭狀癌組的CD44v6與Rasp21陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)，而CD44v6與Rasp21表達(dá)與年齡、性別、腫瘤大小無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。CD44v6和Rasp21在甲狀腺乳頭狀腺癌中的表達(dá)均比甲狀腺腺瘤組織高。CD44v6和Rasp21基因蛋白往往在同一病例中共同表達(dá)，有一定的協(xié)同性。見(jiàn)表1。

討 論

細(xì)胞黏附分子CD44是一種整合膜糖蛋白，作為淋巴細(xì)胞的歸巢受體和透明質(zhì)酸酶的主要受體，能連結(jié)細(xì)胞基質(zhì)中的層黏和纖維連結(jié)蛋白、Ⅰ型膠原和透明質(zhì)酸分子，并與細(xì)胞管架蛋白相結(jié)合，參與細(xì)胞的偽足形成，而引起細(xì)胞形態(tài)和游動(dòng)性改變，與細(xì)胞的遷移有關(guān)[4]，因此CD44能直接參與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。CD44v6是CD44的一種變異型，其表達(dá)有助于腫瘤細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移潛能。CD44v6的促轉(zhuǎn)移作用機(jī)理可能是表達(dá)CD44v6的腫瘤細(xì)胞與遠(yuǎn)隔的淋巴管和血管內(nèi)某一受體結(jié)合，使轉(zhuǎn)移至那里的腫瘤細(xì)胞更加穩(wěn)定地寄宿和生長(zhǎng)，形成轉(zhuǎn)移瘤。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌的CD44v6陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)轉(zhuǎn)移者，這提示甲狀腺乳頭狀癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和CD44v6的陽(yáng)性表達(dá)率相關(guān)，CD44v6具有促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的功能。陳文有[5]等報(bào)道80%的甲狀腺腺瘤表達(dá)陰性，84.7%的乳頭狀癌陽(yáng)性，本實(shí)驗(yàn)也予以證實(shí)。因此，CD44v6還可用于良、惡性甲狀腺腫瘤的鑒別診斷。

Ras基因是第一個(gè)被鑒定的人類癌基因，Ras基因在人類惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用一直受到密切關(guān)注，與腫瘤相關(guān)的Ras原癌基因分為三類：H-Ras、K-Ras和N-Ras，這三種Ras基因編碼為同一蛋白，即Rasp21蛋白[6]。Rasp21蛋白是信號(hào)通路中最重要的介導(dǎo)因子，是通過(guò)三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)和二磷酸鳥(niǎo)苷(DTP)結(jié)合完成細(xì)胞信息傳遞，調(diào)節(jié)細(xì)胞增值。當(dāng)Ras基因突變時(shí)，可導(dǎo)致Rasp21蛋白在關(guān)鍵位點(diǎn)發(fā)生氨基酸改變，從而導(dǎo)致Rasp21蛋白一直處于激活狀態(tài)，使增殖信號(hào)過(guò)度傳入，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展[7-8]。本研究發(fā)現(xiàn)Ras的表達(dá)在正常甲狀腺組織及甲狀腺乳頭狀癌中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，提示Ras癌基因與甲狀腺惡性腫瘤密切相關(guān)，而這一結(jié)果目前已在多項(xiàng)研究中得到證實(shí)，因此檢測(cè)Ras癌基因在提示預(yù)后方面有重要參考價(jià)值[9]。而在Ras表達(dá)與甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的研究中發(fā)現(xiàn)，二者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，這提示Rasp21的表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移中亦具有相關(guān)性，目前多數(shù)研究認(rèn)為，Ras基因在甲狀腺乳頭狀癌起作用，與甲狀腺癌的組織分化密切相關(guān)。

根據(jù)以上研究分析，在同一病例均有CD44v6和Rasp21共同表達(dá)，聯(lián)合檢測(cè)CD44v6和Rasp21兩種癌基因蛋白可以對(duì)患者甲狀腺腫瘤良、惡性的鑒別，有無(wú)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估提供一定的參考。

表1 CD44v6與Rasp21的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系(n, %)

圖1 甲狀腺乳頭狀癌CD44v6(+)(HE染色×200)

圖2 甲狀腺乳頭狀癌Rasp21(+)(HE染色×200)

圖3 甲狀腺腺瘤(HE染色×200)

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