張勇 賈靜 江穎 童漢興 邵葉波 徐靜 朱雋 陸維祺

（1．復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院普外科，上海 200032；2．福建省泉州市第一醫(yī)院普外科，福建泉州 362000）

乳腺癌術(shù)后的腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移是影響患者生存的關(guān)鍵因素。目前臨床上尚缺乏能預(yù)測乳腺癌術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的特異性指標(biāo)。膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因蛋白－1（glioma oncogene protein－1，GLI－1））屬 于Hedgehog信號傳導(dǎo)通路下游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，它可以激活該信號傳導(dǎo)通路。研究［1］顯示，GLI－1在腫瘤組織內(nèi)的表達(dá)水平與多種惡性腫瘤的腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)侵犯、遠(yuǎn)隔器官轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切。然而目前對乳腺癌病灶中GLI－1的表達(dá)水平及其與乳腺癌臨床病理學(xué)特征及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚無定論。本研究擬用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測乳腺癌原發(fā)病灶中GLI－1的表達(dá)水平，分析其與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系，并初步探討GLI－1在預(yù)測乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1．1 一般資料 入選標(biāo)準(zhǔn)：2001—2004年入住復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院普外科、接受首次乳腺癌手術(shù)并經(jīng)病理檢查確診的乳腺癌患者；既往無任何惡性腫瘤病史；上海市患者；術(shù)前檢查未見腫瘤轉(zhuǎn)移；術(shù)前未接受放療和（或）化療。

收集有完整隨訪資料的患者221例，在隨訪過程中出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)者42例，作為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組；采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件從其余患者中隨機(jī)抽取42例作為無復(fù)發(fā)生存組；另隨機(jī)抽取2001—2004年在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院確診的良性乳腺腫瘤患者30例，作為對照組。

1．2 免疫組織化學(xué)法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)（S－P法）檢測乳腺癌患者原發(fā)病灶中GLI－1的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)試劑：GLI－1一抗購自SANTA CRUZ生物科技有限公司、S－P法二抗試劑盒購自上海麥約爾生物技術(shù)有限公司。

1．3 GLI－1在乳腺癌病灶中表達(dá)水平的判定 染色強(qiáng)度：弱陽性記為1分，中等強(qiáng)度記為2分，強(qiáng)陽性記為3分；陽性細(xì)胞百分比：＜5%記為0分，5%～25%記為1分，25%～50%記為2分，50%～75%記為3分，＞75%記為4分。計(jì)算免疫反應(yīng)積分（immunoreactive score，IRS），將上述兩者得分相乘即為每一標(biāo)本的IRS，IRS 0～6分為GLI－1低表達(dá)；IRS 7～12分為 GLI－1高表達(dá)［1］。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Stata7．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，采用χ2檢驗(yàn)及Logistic回歸分析乳腺癌患者臨床病理特征與預(yù)后的關(guān)系；采用COX生存分析研究乳腺癌患者臨床病理特征與患者術(shù)后總體生存時間的關(guān)系。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 3組患者病灶中GLI－1的表達(dá) 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組和無復(fù)發(fā)生存組的84例患者中，乳腺癌病灶中GLI－1 高 表 達(dá) 59 例 （70．24%）；低 表 達(dá) 25 例（29．76%）；對照組原發(fā)病灶中GLI－1的表達(dá)為0例。乳腺良性腫瘤與乳腺癌病灶中GLI－1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。

2．2 乳腺癌病灶中GLI－1的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 見表1。乳腺癌病灶中GLI－1的表達(dá)與患者年齡、腋窩淋巴受累情況、腫瘤激素受體表達(dá)均明顯相關(guān)（P＜0．05），而與其他臨床病理學(xué)特征無明顯相關(guān)。

表1 乳腺癌病灶中GLI－1的表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性n（%）

2．3 乳腺癌病灶中GLI－1表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系 乳腺癌患者病灶中GLI－1高表達(dá)與術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率增高密切相關(guān)（P＝0．001）；多因素分析顯示，腫瘤病灶中GLI－1高表達(dá)與乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（OR＝7．534，95%CI為2．104～26．974）。進(jìn)一步分析顯示，腋窩受累淋巴結(jié)數(shù)目不超過3個的乳腺癌患者（pN 0～3）原發(fā)病灶中GLI－1的高表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率增高明顯相關(guān)（P＝0．009）。腫瘤病灶中 GLI－1高表達(dá)與患者術(shù)后出現(xiàn)腫瘤肝轉(zhuǎn)移（P＝0．03）、骨轉(zhuǎn)移（P＝0．023）密切相關(guān)，而與腫瘤的局部復(fù)發(fā)、對側(cè)轉(zhuǎn)移及肺轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性（P＞0．05）。

2．4 乳腺癌患者術(shù)后總體生存時間的COX生存分析 腫瘤病灶中GLI－1的表達(dá)水平對患者術(shù)后生存時間有明顯影響（HR＝1．852，95%可信區(qū)間為1．146～2．994），腫瘤病灶中 GLI－1高表達(dá)的患者術(shù)后總體生存時間明顯縮短。

3 討 論

GLI－1是Hedgehog信號傳導(dǎo)通路下游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子之一，是該信號傳導(dǎo)通路活化的標(biāo)志。Hedgehog信號通路在果蠅、多種脊椎動物及人類胚胎發(fā)育過程中的細(xì)胞分化和增生中起著重要作用。最近研究［1］表明，Hedgehog信號通路與多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。Hedgehog信號通路的異常活化與乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展也密切相關(guān)，乳腺癌病灶中GLI－1表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織［2－3］。

本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌病灶中GLI－1表達(dá)率明顯高于良性乳腺腫瘤（P＜0．01），說明 GLI－1的高表達(dá)率可能和惡性腫瘤的發(fā)生相關(guān)。本研究結(jié)果還顯示，乳腺癌病灶中GLI－1高表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率的增高及患者術(shù)后生存時間的縮短密切相關(guān)，與國外研究結(jié)果［4］一致，提示乳腺癌病灶中GLI－1的表達(dá)水平有望成為乳腺癌預(yù)后評估的一個新指標(biāo)。

有學(xué)者［4－5］認(rèn)為，乳腺癌病灶中 GLI－1的表達(dá)水平與患者腋窩淋巴受累情況明顯相關(guān)，GLI－1的表達(dá)水平可作為臨床分期輔助指標(biāo)［4］。目前對于pN1期乳腺癌的合理治療尚有爭議［6－8］。我們建議對GLI－1高表達(dá)的pN1期乳腺癌患者應(yīng)采取更為積極的治療策略。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌病灶中GLI－1表達(dá)水平與ER受體表達(dá)有關(guān)，提示Hedgehog信號傳導(dǎo)通路可能參與激素介導(dǎo)的乳腺癌發(fā)生過程。此外，本研究結(jié)果還顯示，乳腺癌病灶中的GLI－1表達(dá)水平與乳腺癌 HER－2表達(dá)無明顯的相關(guān)性，說明Hedgehog信號傳導(dǎo)通路可能獨(dú)立于表皮生長因子家族調(diào)控途徑，而自行調(diào)控乳腺癌的發(fā)生及進(jìn)展過程。因此，是否可將該信號通路作為乳腺癌治療新的分子靶點(diǎn)是今后的研究課題。

乳腺癌的骨轉(zhuǎn)移機(jī)制一直是研究的熱點(diǎn)。近期的研究［9－10］發(fā)現(xiàn)，Hedgehog信號傳導(dǎo)通路在調(diào)控乳腺癌骨轉(zhuǎn)移過程中也有重要的作用。Hedgehog信號傳導(dǎo)通路通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞釋放甲狀旁腺激素相關(guān)肽而促進(jìn)骨質(zhì)破壞以及腫瘤骨轉(zhuǎn)移，但目前該調(diào)控過程的機(jī)制尚不清楚［11］。本研究認(rèn)為，GLI－1在該調(diào)控過程中可能具有重要作用，值得今后進(jìn)行進(jìn)一步研究。本研究中的腫瘤復(fù)發(fā)肝轉(zhuǎn)移患者，其原發(fā)病灶中GLI－1表達(dá)率明顯高于未發(fā)生腫瘤肝轉(zhuǎn)移的患者，而目前尚無類似報道，提示Hedgehog信號傳導(dǎo)通路在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中可能還有其他未知的調(diào)控途徑。因此，對Hedgehog信號通路促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究，可能為乳腺癌的分子診斷、預(yù)后判斷以及分子靶向治療開辟新的方向。

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