周勸娥，田呈瑞 ，關(guān) 為，張?jiān)鰩洠R婷婷

(陜西師范大學(xué)食品工程與營養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，陜西西安710062)

醫(yī)學(xué)研究表明，黃酮類化合物具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗菌、抗病毒等作用［1-3］，在醫(yī)藥、化妝品及食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用［4-6］。從20 世紀(jì)80 年代人們就利用黃酮類化合物研發(fā)出抗心血管病藥物、止咳平喘藥等，臨床上用來治療冠心病、心絞痛、腦血管疾病、腦動脈硬化、高血壓、心肌梗塞等疾?。?-9］?？嗖?，學(xué)名敗醬草(Patrinia villosa(Thunb.)Juss)，為敗醬科植物。是一種常用的草藥，多野生于山坡、荒路、田邊?？嗖朔植紭O廣，幾乎全國各地都有生長［10］，可采摘其嫩苗或嫩葉洗凈做涼拌菜或做餡食用，味道鮮美可口。盧新華［11］和李美化［12］等的實(shí)驗(yàn)證明，苦菜有明顯的抗氧化作用;韓陽陽［13］等研究了苦菜不同部位提取物的抗氧化活性，表明苦菜提取物的抗氧化活性與其總黃酮和總多酚的含量有關(guān)，其不同部位的抗氧化能力大小為:花＞葉＞莖＞根;孟良玉［14］等的研究顯示，敗醬草黃酮提取物在各抗氧化體系中抗氧化活性均強(qiáng)于VC。目前，對苦菜的研究主要集中在其粗提物活性的研究上，對其黃酮類成分的提取工藝及其優(yōu)化研究較少。苦菜的抗氧化活性因其產(chǎn)地的不同差異較大，本文針對陜西野生苦菜葉總黃酮的超聲波輔助提取進(jìn)行了優(yōu)化，并對提取物的抗氧化活性進(jìn)行了研究，以期為陜西野生苦菜的進(jìn)一步開發(fā)和合理高效利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮苦菜 由榆林市東方紅有限責(zé)任公司提供，采自于陜西省榆林市佳縣山區(qū)，采摘日期為9 月15 日;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，生化試劑 西安惠豐生化集團(tuán)股份;無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、三氯化鐵、三氯乙酸、氯仿、鐵氰化鉀、二氯化亞鐵、水楊酸、雙氧水等均為分析純 西安化學(xué)試劑廠;DPPH 自由基 美國Sigma 公司。

722 型可見分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司;RE-52A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;LAC164 型電子分析天平(精確至0.0001g) 梅特勒—托利多(上海)儀器有限公司;FW100 型高速萬能植物粉碎機(jī)天津市泰斯特儀器有限公司;KQ-600DB型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;GZX-9146MBE 數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;其他均為實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備與儀器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理 新鮮苦菜→攤涼→去除雜物→洗凈→曬至半干→烘箱內(nèi)50℃烘干→植物粉碎機(jī)粉碎→過60 目篩→密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

1.2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.0100g，置于100mL 容量瓶中，用70%乙醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，即可得濃度為0.1mg/mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作［15］精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL 分別置于6 個(gè)10mL 試管中，用30%的乙醇補(bǔ)足至5.0mL。再加入0.3mL 5%的亞硝酸溶液，搖勻，靜置6min。精確加入0.3mL 10%的硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6min。再加入4.0mL 4%的氫氧化鈉溶液，用蒸餾水定容。放置15min，在波長510nm 處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 樣品總黃酮含量的測定 準(zhǔn)確稱取2.000g 苦菜粉，按實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行超聲波輔助提取，提取液過濾，取上清液，用70%的乙醇定容50mL。取1.0mL樣品黃酮提取液，按照1.2.2.2 的方法測定其在510nm 處的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算提取液中總黃酮含量?？傸S酮提取含量為1g 原料中總黃酮的質(zhì)量(mg)。

式中:Y 為總黃酮提取含量(mg/g);C 為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的樣品液的總黃酮質(zhì)量濃度(mg/mL);V 為樣品液的體積(mL);m 為苦菜粉末質(zhì)量(g);D 為稀釋倍數(shù)。

1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn) 在超聲功率和超聲頻率分別為200W 和80Hz 的條件下研究超聲溫度、料液比、乙醇濃度和超聲時(shí)間對總黃酮提取含量的影響，其中:料液比采用1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 六個(gè)水平、超聲溫度采用40、50、60、70、80℃五個(gè)水平、超聲時(shí)間采用10、20、30、40、50min 五個(gè)水平、乙醇體積分?jǐn)?shù)采用50%、60%、70%、80%、90%五個(gè)水平分別進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 正交實(shí)驗(yàn) 選L9(34)作正交實(shí)驗(yàn)，以總黃酮的提取含量為指標(biāo)確定其最佳工藝參數(shù)。具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1 所示。

表1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)Table 1 The design of orthogonal test method

1.2.6 抗氧化活性的測定

1.2.6.1 清除DPPH 自由基能力的測定參照Brandwilliams 等［16］的方法，稍作修改測定苦菜葉提取液純化后對DPPH 自由基的清除能力。實(shí)驗(yàn)測定之前，配制0.1mmol/L 的DPPH 乙醇溶液。用移液管分別吸取1.0mL 的不同濃度黃酮樣品水溶液和3.0mL 剛配制的DPPH 溶液于試管中，混合均勻，無光反應(yīng)30min，于517nm 處測定其吸光度，記錄數(shù)據(jù)。用等體積的蒸餾水代替黃酮樣品液作空白對照，用來測定乙醇溶液中未反應(yīng)之前DPPH 的吸光度。用與樣品溶液同濃度的抗壞血酸溶液和BHT 溶液作為陽性對照。以樣品液濃度為橫坐標(biāo)，自由基清除率為縱坐標(biāo)作圖分析樣品的自由基清除能力。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。對DPPH 自由基的清楚能力按以下公式計(jì)算:

其中:I 表示對自由基的清除率，%;Ai表示樣品溶液和DPPH 溶液混合液的吸光度(1mL 樣品溶液+3mL 的DPPH 溶液);Aj表示未加DPPH 溶液的樣品溶液的吸光度(1mL 樣品溶液+ 3mL 的乙醇溶液);A0表示未加樣品時(shí)DPPH 溶液的吸光度(1mL乙醇溶液+3mL 的DPPH 溶液)。

1.2.6.2 還原能力的測定 樣品提取液還原能力的測定按照稍作修改的Vaquero 等［17］的方法進(jìn)行。具體的操作步驟是:取2.5mL 的樣品提取液(樣品濃度的變化范圍是0.1 ～1.0mg/mL)加入到裝有2.5mL 0.2mol/L pH6.6 的磷酸緩沖液的試管中，再加入2.5mL 1% 的鐵氰化鉀溶液混合均勻。50℃反應(yīng)20min 后，加入2.5mL 10%的三氯乙酸在3000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取上清液5mL 與4mL 的蒸餾水和0.5mL 0.1%的三氯化鐵溶液混合。反應(yīng)10min后，在700nm 處測其吸光度?；旌弦旱奈舛仍礁弑硎緲悠诽崛∫旱倪€原能力越強(qiáng)。

1.2.6.3 清除羥基自由基能力的測定 按照Yan等［18］描述的方法測定樣品提取液對羥基自由基的清除能力。將2mL 的樣品溶液與2mL 2mmol/L 的二氯化鐵、2mL 2mmol/L 的過氧化氫溶液和2mL 6mmol/L的水楊酸混合，再加入10mL 的蒸餾水，在37℃的水浴鍋中反應(yīng)30min。在510nm 處設(shè)置空白對照測其吸光值。陽性對照為抗壞血酸和BHT。以樣品濃度為橫坐標(biāo)，清除率為縱坐標(biāo)作圖分析對羥基自由基的清除能力。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。清除率(SA)按以下公式計(jì)算:

其中:A0表示未加樣品混合液的吸光度(2mL 的二氯化鐵+2mL 過氧化氫+2mL 水楊酸);Ai表示樣品的吸光度(2mL 的二氯化鐵+2mL 過氧化氫+2mL水楊酸+2mL 的樣品溶液);Aj未加過氧化氫溶液樣品的吸光度(2mL 的二氯化鐵+2mL 水楊酸+2mL的樣品溶液);SA 為樣品對羥基自由基的清除率，%。1.2.6.4 清除超氧陰離子自由基能力的測定 根據(jù)稍作修改的Marklund 等［19］的方法測定樣品提取液清除超氧陰離子的能力。取4.5mL 0.05mol/L Tris-HCL(pH8.2)的緩沖液，在25℃的水浴鍋中預(yù)熱20min，然后加入1mL 的樣品溶液(濃度變化范圍是0.1 ～0.7mg/mL)和0.4mL 0.025mol/L 鄰苯三酚溶液混合均勻。將混合液置于25℃的水浴鍋中反應(yīng)4min。加入1.0mL 8mmol/L 的鹽酸溶液終止反應(yīng)。設(shè)置空白對照于320nm 處測定混合液的吸光度?？箟难岷虰HT 用作陽性對照。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。樣品液清除超氧陰離子的能力按以下公式計(jì)算:

其中:I 表示清除率，%;A0表示未加樣品混合液的吸光度;Ai表示測試樣品的吸光度;Aj表示不含水楊酸混合液的吸光度。

1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 使用Excel 與DPSv7.05 數(shù)據(jù)處理軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的方差顯著性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按照1.2.2.2 的方法繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of rutin

由圖1 可以得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A =0.0119C-0.0036，R2=0.9995。蘆丁在0～50mg/L濃度范圍內(nèi)與吸光度線性良好。

2.2 溫度對提取含量的影響

由圖2 可知，溫度對苦菜總黃酮的提取含量呈先上升后下降趨勢，在60℃達(dá)到最大值，此時(shí)超聲波輔助提取總黃酮的含量是43.4mg/g。這可能是因?yàn)樵谝欢舛确秶鷥?nèi)，溫度的升高有利于黃酮的溶出;當(dāng)高于某一值時(shí)，繼續(xù)升高溫度會導(dǎo)致水溶性黃酮的水解進(jìn)而使其提取含量下降;另外，也可能由于黃酮本身具有還原性，高溫會使黃酮變性［20］。

圖2 超聲溫度對提取效果的影響Fig.2 Effect of ultrasonic temperature on extraction

2.3 料液比對提取含量的影響

由圖3 可知，料液比對總黃酮的提取含量影響明顯，隨著溶劑用量的增加先上升后下降，究其原因可能是料液比影響了溶劑的極性，使樣品中不同極性的黃酮類化合物溶出率不同;當(dāng)料液比繼續(xù)增大時(shí)，可能出現(xiàn)樣品過飽和現(xiàn)象，導(dǎo)致提取率降低［20］。超聲波輔助提取中，料液比為1∶30 時(shí)，總黃酮的提取含量最高，為34.44mg/g。

圖3 料液比對提取效果的影響Fig.3 Effect of solid to liquid ratio on extraction

2.4 乙醇體積濃度對提取含量的影響

由圖4 可知，總黃酮提取含量隨乙醇濃度的增加先上升后下降，原因可能是隨著乙醇濃度的增加，樣品溶液極性變?nèi)?，?dǎo)致樣品中極性相對較大的黃酮類化合物溶出率下降，極性小的溶出率上升，而樣品中極性不同的黃酮類化合物含量不同［20］。超聲波輔助提取中，乙醇濃度為60%時(shí)，總黃酮的提取含量最高，為43.83mg/g。

圖4 乙醇濃度對提取效果的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on yield of total flavonoids

2.5 時(shí)間對提取含量的影響

由圖5 可知，隨著處理時(shí)間的延長，總黃酮的提取含量呈上升趨勢，40min 時(shí)達(dá)到最大值46.98mg/g。提取時(shí)間增大有助于黃酮類化合物的溶出，但當(dāng)達(dá)到一定的時(shí)間時(shí)出現(xiàn)稍微下降的趨勢，可能是由于黃酮類化合物分解所造成的［20］。

2.6 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.6.1 超聲波輔助提取正交實(shí)驗(yàn) 選取超聲時(shí)間、超聲溫度、料液比和乙醇體積分?jǐn)?shù)進(jìn)行4 因素3 水平正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2 所示。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，其結(jié)果見表3。

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 The results of orthogonal test method

由表2 極值可知，各因素影響的主次順序?yàn)槌暅囟龋疽掖紳舛龋玖弦罕龋境晻r(shí)間。

方差分析結(jié)果表明，超聲溫度、乙醇濃度、料液比和超聲時(shí)間對苦菜總黃酮的提取含量影響均極顯著。根據(jù)分析得出優(yōu)化最佳提取工藝為A3B2C3D2，即乙醇濃度為80%、溫度為70℃、料液比為1∶35、超聲時(shí)間為40min。

2.6.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按照正交實(shí)驗(yàn)獲得的最優(yōu)組合:溫度70℃、乙醇體積濃度80%、料液比1∶35、提取時(shí)間40min，進(jìn)行超聲波輔助提取實(shí)驗(yàn)，其總黃酮的平均含量是64.62mg/g，比正交實(shí)驗(yàn)表中第5 號實(shí)驗(yàn)組合B2A2C3D1的黃酮含量64.10mg/g 高。

2.7 苦菜葉黃酮的抗氧化能力

2.7.1 清除DPPH 自由基的能力 不同質(zhì)量濃度的樣品和陽性對照清除DPPH 自由基能力如圖6 所示。DPPH 自由基是一種被廣泛使用的用來測定生物材料抗氧化活性的穩(wěn)定的色原物質(zhì)［21］。在清除DPPH自由基實(shí)驗(yàn)中，抗氧化劑對DPPH 自由基的清除能力表現(xiàn)為它們提供氫質(zhì)子的能力［22］。從圖6 中可以看出，隨著樣品質(zhì)量濃度的增加(由0.1～0.7mg/mL)，DPPH 自由基的清除率從68.6%增加到93.6%。與同等質(zhì)量濃度的抗壞血酸和BHT 相比較，樣品的清除率稍微高于BHT 的清除率，但低于抗壞血酸的清除率。在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，抗壞血酸對自由基的清除率在92.4%～98.1%范圍內(nèi)。

圖6 提取液、BHT 和抗壞血酸對DPPH 自由基的清除效果Fig.6 Scavenging effect of sample，BHT and VC on DPPH radical

2.7.2 提取物的還原能力 樣品提取物、抗壞血酸和BHT 的還原能力如圖7 所示。從圖中可以看到，隨著質(zhì)量濃度的增加，其還原力也隨之在增加。然而，與抗壞血酸和樣品相比，BHT 顯示出了低還原能力。當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到0.9mg/mL 時(shí)，樣品提取物的還原能力明顯高于抗壞血酸在此濃度下的還原能力。還原能力的測定中，樣品中黃酮類化合物的存在使得鐵氰化物中的三價(jià)鐵變成以Fe2+存在的復(fù)雜化合物。根據(jù)文獻(xiàn)［23-24］的研究報(bào)道，測定黃酮類物質(zhì)的還原能力對解釋說明它們的抗氧化效果和還原能力之間的關(guān)系是必要的。提取物中的黃酮類化合物是良好的電子供體，能夠通過使自由基轉(zhuǎn)化成更穩(wěn)定的產(chǎn)物而使自由基反應(yīng)鏈終止。

表3 方差分析結(jié)果Table 3 The results of variance analysis

圖7 樣品、BHT 和抗壞血酸的還原能力Fig.7 Reducing power of sample，BHT and VC

2.7.3 清除羥基自由基的測定 樣品提取物以及用作陽性對照的抗壞血酸和BHT 對羥基自由基的清除能力如圖8 所示。從圖中可知:提取物和陽性對照品的抗氧化活性隨著濃度的增加而提高。當(dāng)提取物的濃度由0.1mg/mL 增加至0.9mg/mL 時(shí)，其對羥基自由基的清除率由9%上升到80%，顯著高于BHT對羥基自由基的清除率。由圖也可知，提取對羥基自由基有較高的清除能力。作為最有反應(yīng)活性的自由基，羥基自由基能夠與活細(xì)胞中具有生物功能的幾乎所有的生物大分子反應(yīng)［25］。羥基自由基能夠通過Fe2+和H2O2的反應(yīng)而產(chǎn)生，而黃酮類化合物能夠螯合Fe2+。因此，黃酮類化合物能夠通過螯合Fe2+減少羥基自由基的產(chǎn)生。

圖8 對羥基自由基的清除效果Fig.8 Scavenging effect on hydroxyl free radical

2.7.4 清除超氧陰離子的能力 圖9 所示為樣品提取物、抗壞血酸和BHT 對超氧陰離子的清除效果。從圖中可知，提取物對超氧陰離子的清除率隨著樣品濃度的增加而升高。當(dāng)樣品濃度為0.7mg/mL 時(shí)，提取物對超氧陰離子的清除率為67%，高于此濃度下BHT 的清除率(51.8%)。黃酮類化合物含有鄰位羥基能夠提供活性氫質(zhì)子參與以下清除超氧陰離子的反應(yīng):

超氧化物歧化酶通過催化作用參與上述反應(yīng)，并通過提供氫質(zhì)子作為一種抗氧化劑［26］。擁有較低氧化還原電勢(0.23V ＜E7＜0.75V)的黃酮類化合物熱力學(xué)上能夠通過提供氫原子降低氧化還原電勢在2.13～1.0V 范圍內(nèi)的活性氧自由基如超氧陰離子、過氧化氫、羥基自由基和烷氧基自由基的電勢。

圖9 對超氧陰離子的清除效果Fig.9 Scavenging effect on superoxide free radical

3 結(jié)論

3.1 在超聲波輔助提取方法中，溫度、時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比對苦菜黃酮的提取含量均影響顯著。超聲波輔助提取的最佳工藝條件是乙醇濃度為80%、溫度為70℃、料液比為1 ∶35、超聲時(shí)間為40min。此時(shí)苦菜黃酮的提取含量是64.62mg/g。

［1］劉蕊.黃酮類化合物的藥理作用研究進(jìn)展［J］.黑龍江醫(yī)藥，2010，23(2):234-236.

［2］周俊，周德生.天然黃酮類化合物對心腦血管的藥理研究進(jìn)展［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010，8(6):725-727.

［3］PARK S Y，CHANG S Y，OH O J，et al.Nor-oleanene type triterpene glycosides from the leaves of Acanthopanax japonicus［J］.Phytochemistry，2002，59(4):379-384.

［4］DUBEY S K，BATRAL A. Hepatoprotective activity from ethanol fraction of Thuja occidentalis Linn［J］.Asian Journal of Research in Chemistry，2008，1(1):32-35.

［5］王作昭，劉靜波，林松毅，等.篤斯越橘黃酮類化合物提取技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.食品科學(xué)，2006，27(11):391-394.

［6］萬明，宋永鋼，楊菠.黃酮類化合物的藥理作用及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用［J］.江西食品工業(yè)，2007(3):47-49.

［7］JEONG S J，JUN K Y，KANG T H，et al.Flavonoids from the fruits of Opuntia ficus-indica var.saboten［J］.Korea Journal of Pharmacognosy，1999，30:84-86.

［8］郭長江.食物類黃酮物質(zhì)有營養(yǎng)學(xué)意義［J］.中國食物與營養(yǎng)，2004(5):38-42.

［9］陳曉慧，徐雅琴.黃酮類化合物生物活性及在食品中的應(yīng)用研究［J］.食品工程，2006(3):12-14.

［10］張一芳.敗醬草研究進(jìn)展［J］.中草藥，2009，32(1):148-152.

［11］盧新華，谷彬，劉思妤.苦菜體內(nèi)外抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.右江醫(yī)學(xué)，2007，35(2):120-122.

［12］李美仙，許秀舉，李桂蘭.苦菜茶對大鼠血清GSH-PX 活性的影響［J］.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，21(3):231-232.

［13］韓陽陽，王天曉，朱海芳，等.苦菜不同部位提取物的抗氧化活性［J］.食品科學(xué)，2010，31(19):45-48.

［14］孟良玉，蘭桃芳，盧佳琨，等.敗醬草中黃酮類化合物的提取及其抗氧化活性［J］.食品科學(xué)，2010，31(24):214-217.

［15］JIA Z S，TANG M C，WU J M.The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging:Effects on superoxide radicals［J］.Food Chemistry，1999，64(4):555-559.

［16］BRANDWILLIAMS W，CUVELIER M E，BERSET C.Use of a free-radical method to evaluate antioxidant activity［J］.Food Science and Technology - Lebensmittel - Wissenschaft ＆Technologie，1995，28(1):25-30.

［17］VAQUERO M J R，SERRAVVALLE L R T，de NADRA M C M，et al.Antioxidant capacity and antibacterial activity of phenolic compounds from argentinean herbs infusions［J］.Food Control，2010，21(5):779-785.

［18］YAN H L，BO J，TAO Z，et al.Antioxidant and free radicalscavenging activities of chickpea protein hydrolysate［J］.Food Chemistry，2008，106(2):444-450.

［19］MARKLUND S，MARKLUNDark G. Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase［J］.European Journal of Biochemistry，1974，47(3):469-474.

［20］韓雅慧，顧賽麒，陶寧萍，等.甘草總黃酮提取工藝及總抗氧化活性研究［J］.食品工業(yè)科技，2012，33(2):239-241.

［21］Li H，WANG X Y，LI Y，et al.Polyphenolic compounds and antioxidant properties of selected China wines ［J］. Food Chemistry，2009，112(2):454-460.

［22］CHEN Y，XIE M Y，NIE S P，et al.Purification，composiyion analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum［J］.Food Chemistry，2008，107(1):231-241.

［23］YEN G C，DUH P D，TSAI C. Relationship between antioxidant activity and maturity of peanut hulls［J］.Journal of Agriculture and Food Chemistry，1993，41(1):67-70.

［24］SIDDHURAJU P，MOHAN P，BECKER K.Studies on the antioxidants activity of Indian Laburnum(Cassia fistula L.):a preliminary assessment of crude extract from stem bark，leaves，flowers and fruit pulp［J］.Food Chemistry，2002，79(1):61-67.

［25］LAI F R，WEN Q B A，LI L，et al.Antioxidant activities of water-soluble polysaccharide extracted from mung bean(Vigna radiate L.). hull with ultrasonic - assisted treatment［J］.Carbohydrate Polymers，2010，81(2):323-329.

［26］PERUMAL S，KLAUS B.Antioxidant properties of various solvent extracts of total phenolic constituents from three different agroclimatic origins of drumstick tree(Moringa oleifera Lam.)leaves［J］.Journal of Agriculture and Food Chemistry，2003，51(8):2144-2155.