李朝陽等

【摘 要】目的：研究配伍肉桂、桂枝對(duì)制馬錢子在風(fēng)濕病治療中抗炎鎮(zhèn)痛的影響。方法：通過醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)與熱板致痛法實(shí)驗(yàn)，研究分別配伍不同劑量肉桂及桂枝對(duì)馬錢子抗炎、鎮(zhèn)痛的影響。結(jié)果：配伍肉桂對(duì)馬錢子的抗炎與鎮(zhèn)痛無明顯作用，配伍桂枝不能提高馬錢子的鎮(zhèn)痛作用，但能明顯增強(qiáng)馬錢子的抗炎作用。結(jié)論：為安全、合理、有效的使用制馬錢子治療風(fēng)濕病，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 制馬錢子；肉桂；桂枝；抗炎；鎮(zhèn)痛；實(shí)驗(yàn)研究

風(fēng)濕病是臨床常見且在治療上又很棘手的疑難病之一。全國名老中醫(yī)藥專家婁多峰教授總結(jié)多年治療風(fēng)濕病的臨床經(jīng)驗(yàn)[1]，指出風(fēng)濕病的臨床表現(xiàn)以肢體關(guān)節(jié)疼痛、重著、麻木、腫脹、屈伸不利、甚者關(guān)節(jié)變形或累及臟腑為主，疼痛與腫脹是臨床常見癥狀，同時(shí)又給患者帶來極大的痛苦，因此，治療風(fēng)濕病的炎癥與疼痛是臨床上亟待解決的問題。西醫(yī)的抗炎鎮(zhèn)痛藥物對(duì)肝腎都有一定程度的損害，研制和開發(fā)具有鎮(zhèn)痛、抗炎作用的中藥是很有價(jià)值的。本實(shí)驗(yàn)以婁玉鈐教授多年運(yùn)用制馬錢子治療風(fēng)濕病的臨床經(jīng)驗(yàn)為依據(jù)，且前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明配伍肉桂及桂枝對(duì)制馬錢子均有解毒作用[2]，來進(jìn)一步研究配伍肉桂及桂枝對(duì)馬錢子抗炎、鎮(zhèn)痛療效的影響，為臨床運(yùn)用馬錢子配伍治療風(fēng)濕病提供現(xiàn)代藥理學(xué)基礎(chǔ)，并進(jìn)一步豐富中醫(yī)復(fù)方配伍理論。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥 品 ①馬錢子：經(jīng)砂燙法炮制后的馬錢子置超微粉碎機(jī)中，粉碎10 min，藥物粉末過200目篩，用高效液相色譜儀測(cè)得士的寧含量為14.43 mg·g-1，

馬錢子堿4.79 mg·g-1。②肉桂：取肉桂飲片，置超微粉碎機(jī)中，粉碎10 min，藥物粉末過200目篩，即得。③桂枝：取桂枝飲片，置煎藥機(jī)中，加10倍量水，煎煮1 h，濃縮，干燥，粉碎，藥物粉末過200目篩，即得。1 g 浸膏粉相當(dāng)于原生藥1.41 g。

本實(shí)驗(yàn)所選取的制馬錢子與肉桂、桂枝配伍比例是婁玉鈐教授在長期的臨床實(shí)踐中，摸索出馬錢子的用藥規(guī)律，但是缺乏實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的證明。配伍比例組為肉桂69%組（肉桂占馬錢子與肉桂混合物的百分比為69%，下同）、肉桂86%組、桂枝87%組、桂枝92.50%組及桂枝95.20%。

以上藥物均由河南風(fēng)濕病醫(yī)院購買提供，統(tǒng)一購于河南省藥材公司，且經(jīng)該院中藥鑒定教研室鑒定；由河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院劉雅敏教授統(tǒng)一制備、打粉，密閉備用。

1.2 動(dòng) 物 SPF級(jí)昆明小鼠，體質(zhì)重18～22 g，抗炎實(shí)驗(yàn)雌雄各半，鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)僅用雌鼠，由鄭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)0008746，在河南中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心統(tǒng)一喂養(yǎng)。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法 分抗炎、鎮(zhèn)痛兩個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。制馬錢子Dm（最小100%死亡量）為90.0 mg·kg-1，Dn（最大0不死量）為50.0 mg·kg-1[3]。

2.1.1 抗炎實(shí)驗(yàn) SPF級(jí)昆明種小白鼠80只，雌雄各半，按體質(zhì)重隨機(jī)分為8組，每組10只，分別為空白組、制馬錢子粉組、肉桂69%組、肉桂86%組、肉桂91%組、桂枝87%組、桂枝92.50%組、桂枝95.20%組?？瞻捉M灌等容量生理鹽水，小鼠灌胃量為每10 g體質(zhì)重給予0.3 mL藥液。連續(xù)灌胃給藥5 d，每日1次，末次灌胃給藥30 min后，各小鼠尾靜脈注射5 g·L-1依文思蘭溶液0.1 ml∶10 g，

隨即腹腔注射6 g·L-1的冰醋酸溶液0.1 ml∶10 g，20 min后頸椎脫臼處死，腹腔注射5 ml生理鹽水，輕揉小鼠腹部，使腹腔內(nèi)染料充分溶于生理鹽水中并混合均勻，剪開腹部肌肉，吸管吸出洗滌液4 ml，加生理鹽水至10 ml，置離心機(jī)以3 000 r·min-1離心15 min，取上清液在紫外光分光光度計(jì)上比色測(cè)定吸光度。

2.1.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 篩選動(dòng)物：采用熱盤痛覺測(cè)試儀，自動(dòng)控溫在（55±0.5）℃，將小鼠置恒溫盒內(nèi)，以小鼠首次舔后足的時(shí)間為痛閾值，選擇痛閾值在5～30 s的80只雌性小鼠為合格小鼠，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

將合格的小鼠按體質(zhì)重隨機(jī)分為8組，每組10只，分別為空白組、制馬錢子粉組、肉桂69%組、肉桂86%組、肉桂91%組、桂枝87%組、桂枝92.50%組、桂枝95.20%組?？瞻捉M灌胃等容量生理鹽水，小鼠灌胃量為每10 g體質(zhì)重給予0.3 mL的藥液。連續(xù)灌胃給藥5 d，每日1次，末次給藥前與給藥后30 min、60 min、120 min、180 min，測(cè)定小鼠痛閾值，超過60 s仍不舔后足的記60 s。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以上結(jié)果用SPSS l7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，先做正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。若滿足條件，采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗(yàn)；若不滿足條件則用非參數(shù)檢驗(yàn)。各組吸光度值進(jìn)行組間比較，t檢驗(yàn)以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 制馬錢子與肉桂、桂枝配伍后的抗炎實(shí)驗(yàn) 見表1、表2。

表1 馬錢子配伍肉桂對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

組別 動(dòng)物數(shù)

（只） 劑量

（mg·kg-1） 吸光度

（Abs）

空白組 10 — 0.475±0.140

制馬錢子粉組 10 50 0.374±0.148

肉桂69%組 10 50 0.399±0.065

肉桂86%組 10 50 0.435±0.085

肉桂91%組 10 50 0.435±0.200

從表1可知，與空白組比較，制馬錢子粉組及配伍肉桂各比例組在抗炎方面雖然有一定作用，但差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；與制馬錢子粉組比較，配伍肉桂各比例組在抗炎方面亦差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），說明制馬錢子粉及配伍肉桂后有一定的抗炎作用，但作用并不理想。

表2 馬錢子配伍桂枝對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

組別 動(dòng)物數(shù)

（只） 劑量

（mg·kg-1） 吸光度

（Abs）

空白組 10 — 0.475±0.140

制馬錢子粉組 10 50 0.374±0.148

桂枝69%組 10 50 0.394±0.077

桂枝92.50%組 10 50 0.265±0.1261）2）

桂枝95.20%組 10 50 0.254±0.0421）2）

注 1）與空白組比較，P<0.01；2）與制馬錢子粉組比較，P<0.05

從表2可知，與空白組比較，制馬錢子粉組及桂枝87%組有一定的抗炎作用，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；而桂枝92.50%組與桂枝95.20%組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與制馬錢子粉組比較，桂枝92.50%組與桂枝95.20%組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。說明制馬錢子粉有一定的抗炎作用，但作用并不明顯。配伍桂枝后能增強(qiáng)馬錢子的抗炎作用，且隨著桂枝含量的增加抗炎作用逐漸增強(qiáng)。

3.2 制馬錢子與肉桂、桂枝配伍后的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 見表3、表4。

從表3可以看出，與空白組比較，制馬錢子粉組及配伍肉桂各比例組在給藥后各時(shí)間段均能提高小白鼠的痛閾值；而配伍肉桂各比例組與制馬錢子粉組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），說明配伍肉桂不能明顯增強(qiáng)馬錢子的鎮(zhèn)痛作用。

從表4可以看出，與空白組比較，制馬錢子粉組及配伍桂枝各比例組在給藥后各時(shí)間段均能提高小白鼠的痛閾值，但配伍肉桂各比例組與制馬錢子粉組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），說明配伍桂枝不能增強(qiáng)馬錢子的鎮(zhèn)痛作用。

4 討 論

風(fēng)濕病是臨床及生活中常見而治療上又很棘手的一種頑疾。使患者最痛苦的癥狀是肢體關(guān)節(jié)疼痛、重著、麻木、腫脹等，可見減輕疼痛、消除炎癥是臨床是亟待解決的問題。馬錢子在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)就記載有祛風(fēng)濕、止痹痛的作用，具有消腫散結(jié)、通絡(luò)止痛的功效，善搜筋骨間風(fēng)濕、開通經(jīng)絡(luò)、透達(dá)關(guān)節(jié)、止痛力強(qiáng)，為治療風(fēng)濕頑疾的特效藥，并且現(xiàn)代醫(yī)學(xué)[4]也證明馬錢子總生物堿具有很強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛效果，因此馬錢子在治療風(fēng)濕病方面是一種很理想的藥物。

在前期實(shí)驗(yàn)證明，肉桂及桂枝均能降低馬錢子毒性。研究其配伍后對(duì)馬錢子抗炎、鎮(zhèn)痛作用的影響，對(duì)馬錢子運(yùn)用于臨床治療風(fēng)濕病具有指導(dǎo)意義。由于肉桂與桂枝中含有的桂皮醛有抗炎、鎮(zhèn)痛的作用[5]，所以肉桂與桂枝應(yīng)當(dāng)有增強(qiáng)馬錢子的藥效作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，配伍肉桂對(duì)馬錢子的抗炎、鎮(zhèn)痛作用沒有明顯增強(qiáng)；配伍桂枝對(duì)馬錢子的鎮(zhèn)痛作用無明顯協(xié)同作用，但抗炎方面卻有明顯的增強(qiáng)作用。分析鎮(zhèn)痛方面的原因，可能是兩藥中都含有的桂皮醛以及其他成分，雖然有鎮(zhèn)痛作用，但卻不明顯，以致配伍馬錢子也沒有明顯的增強(qiáng)其鎮(zhèn)痛作用；分析抗炎方面的原因，有學(xué)者對(duì)63種藥用植物的抗胰蛋白酶作用進(jìn)行研究[6]，最后確定桂皮的熱水提取物有很強(qiáng)的抗炎活性，并分離出其活性成分鞣酸樣物質(zhì)。而肉桂用的是粉末，桂枝用的是水煎液的提取物，所以只有配伍桂枝的混懸液中含有鞣酸樣物質(zhì)才能以起到抗炎作用，但具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步探討。

5 參考文獻(xiàn)

[1]婁高峰，婁玉鈐，婁萬峰.婁多峰論治痹病精華[M].天津：天津科技翻譯出版公司，1994.

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[3]白明，劉雅敏，婁玉鈐.制馬錢子粉急性毒性試驗(yàn)研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2012，1（1）：41.

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