吳周良 劉自增

摘要：奶牛布魯氏菌病是由牛布魯氏桿菌引起的一種人畜共患病，主要侵害生殖器官，可引起妊娠母牛流產(chǎn)、公牛睪丸炎和附睪炎等。綜述了該病的病原、流行特點、臨床癥狀、病理變化、診斷方法，并提出了綜合防控措施。

關(guān)鍵詞：布魯氏菌病；奶牛；預(yù)防；治療

中圖分類號：S852.61+4 文獻標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2013）06-0045-03

布魯氏菌病簡稱布病，又名奶牛地中海弛張熱、馬耳他熱和波浪熱，奶牛布病是由牛種布氏桿菌引起的一種急性、慢性人畜共患傳染病，在我國被列為二類動物疫病。病菌可侵害奶牛生殖、神經(jīng)和骨骼系統(tǒng)，以母牛不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎衣不下和產(chǎn)奶量下降，公牛睪丸炎、附睪炎關(guān)節(jié)炎和身體消瘦等為主要臨床癥狀。人感染后，呈典型的波浪熱癥狀，難以根除。該病世界范圍內(nèi)流行廣泛，四季發(fā)病，以春冬季節(jié)發(fā)病較多。近年來，布病的發(fā)生呈明顯的上升勢頭。

1 病原

布魯氏菌為革蘭氏陰性菌（9個種），細(xì)胞內(nèi)寄生，兼性需氧，最適溫度36～37 ℃，最適pH 6.6～7.4。菌體長0.6～7.5 μm，寬0.5～0.7 μm，初次分離時呈球形、球桿形和卵圓形，傳代培養(yǎng)后呈短小桿狀。菌體無鞭毛，不形成芽孢，毒力菌株有菲薄的莢膜。菌落邊緣完整，分平滑型和粗糙型，直徑0.5～l.0 mm。光滑型菌落發(fā)射光下呈黃白色，反射光下呈藍灰色；粗糙型菌落反射光下呈暗白色或者黃色。菌體具有較強的侵襲力和擴散力，對外界環(huán)境的抵抗力也較強，在乳品和牛肉制品中可存活2個月，在糞便中可存活120 d，在水中可存活21 d，在土壤中可存活20～120 d。細(xì)菌對熱、常用消毒藥和紫外線等都敏感，60 ℃濕熱條件（15～30 min）、70 ℃濕熱條件（5 min）、0.1%升汞液（3 min）、1%來蘇爾（15 min）、5%石灰水（15 min）、2%福爾馬林溶液（15 min）和紫外線照射等，都能很快將其殺死。生鮮乳中的布魯氏菌，經(jīng)巴氏消毒后也能被很快殺死。

細(xì)菌對四環(huán)素最敏感，對鏈霉素、土霉素等抗生素敏感，但對青霉素不敏感。在正常光照下，菌體生長迅速，但在藍光下，菌體的生長速度可下降90%多。

2 流行特點

布病世界范圍內(nèi)分布廣泛，世界上200多個國家和地區(qū)中170個有疫情發(fā)生。在我國，當(dāng)前28個省市有該病的發(fā)生和流行，約3.5億人受該病的威脅。2011年我國布病發(fā)病人數(shù)為38 151人，為歷年新高。

布病可四季發(fā)病，以春冬季節(jié)發(fā)病較多，奶牛產(chǎn)仔季節(jié)發(fā)病也較多。

2.1 易感性

布魯氏菌對牛、馬和人都有很強的致病性。母牛比公牛更具易感性，不同年齡的牛易感性也不同。初產(chǎn)母牛易感性最強，且流產(chǎn)率較高；成年母牛特別是處于妊娠期時易感性較強，老齡母牛和犢牛易感性較弱。犢牛感染后，因其生殖系統(tǒng)尚未完全發(fā)育成熟，因此不表現(xiàn)發(fā)病。母牛隨著胎次的增加，易感性會逐漸降低。

2.2 傳染源

患病和感染奶牛是布病的主要傳染源，病菌可以廣泛散布于奶牛的排泄物（如糞便等）、分泌物（如流涎等）、流產(chǎn)物（如胎兒等）、乳汁和公牛精液等。布魯氏菌在不同的易感動物之間有轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，該菌可轉(zhuǎn)移給羊和豬等，也可以感染人，但一般不發(fā)生人與人間的水平傳播。

2.3 傳播途徑

布魯氏菌的侵襲能力很強，可以穿過完整的消化道、呼吸道、生殖道和皮膚黏膜、眼結(jié)膜等感染奶牛，也可以經(jīng)由吸血性昆蟲叮咬傳播。奶牛場獸醫(yī)、飼養(yǎng)員、乳品加工人員、牛屠宰加工人員、皮毛加工人員、實驗室操作人員等跟傳染源接觸密切的職業(yè)人員易患此病，飲用未消毒的生奶也可感染。

3 臨床癥狀

布病的潛伏期較長，14～180 d不等，多為隱性感染?；疾∧膛Ｖ饕R床表現(xiàn)為：母牛流產(chǎn)、不孕、乳房炎、關(guān)節(jié)炎、產(chǎn)奶量和奶品質(zhì)下降等，公牛睪丸炎、附睪炎、精子活率和活力降低、身體消瘦、關(guān)節(jié)炎等。母牛流產(chǎn)多發(fā)生于妊娠5～8個月，流產(chǎn)前表現(xiàn)精神萎靡不振、食欲低下、陰唇充血腫脹、陰道黏膜潮紅、陰門有黃紅色或灰褐色黏液流出、乳房腫脹等，流產(chǎn)1～2次后，可正常分娩。流產(chǎn)的胎兒多為死胎，且全身水腫，胎衣不完整，子葉破碎。人患病后，呈典型的波浪熱癥狀，可致不孕不育，難以根除。

4 病理變化

病原進入機體后，寄生于網(wǎng)狀淋巴組織，可對奶牛生殖、神經(jīng)和骨骼系統(tǒng)造成嚴(yán)重?fù)p害[1]。病牛主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃?，淋巴結(jié)、肝、脾等實質(zhì)器官水腫和肉芽腫，關(guān)節(jié)炎性腫大。妊娠母?？梢娞ケP絨毛膜炎癥、壞死，絨毛間有灰色或黃色無味膠樣滲出物。胎膜水腫肥厚、膠樣浸潤、表面有纖維素和膿汁。流產(chǎn)胎兒主要為敗血癥病變，漿膜黏膜有出血點和出血斑，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液出血性炎癥，脾臟和淋巴結(jié)腫大，肝臟中出現(xiàn)壞死灶，肺常有支氣管炎。流產(chǎn)病牛多繼發(fā)子宮炎，若子宮炎持續(xù)數(shù)月以上，將出現(xiàn)子宮體增大，內(nèi)膜增厚，呈污紅色，其中可見彌漫性紅色斑紋。肥厚的黏膜構(gòu)成波紋狀皺褶，有時可見局灶性壞死和潰瘍。輸卵管腫大，卵巢發(fā)炎，組織硬化，有時形成卵巢囊腫。乳腺病變常表現(xiàn)為間質(zhì)性乳腺炎，嚴(yán)重的可續(xù)發(fā)乳腺萎縮和硬化。公牛布病可發(fā)生化膿壞死性睪丸炎、附睪炎、精囊出血或壞死。睪丸明顯腫大，被膜與外層漿膜粘連，切面見壞死病灶與化膿灶。

5 診斷

布魯氏菌病是一種重要的人畜共患傳染病，可對畜牧業(yè)生產(chǎn)和人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害，已被世界衛(wèi)生組織（OIE）列為B類傳染病，在我國被列為二類動物疫病，國際上也是P3條件下的人畜共患病原。該病臨床癥狀不明顯時不易診斷。臨床癥狀明顯時，可根據(jù)流行病學(xué)做出初步診斷，但最終的確診還需要做病原診斷和血清學(xué)實驗。

5.1 病原診斷

病料可取自于母牛的陰道分泌物、流產(chǎn)胎盤子葉、流產(chǎn)胎兒組織、胃內(nèi)容物和公牛精液等。細(xì)菌培養(yǎng)后，可根據(jù)菌落的大小、形態(tài)和色澤等，篩選出疑似布魯氏菌菌落。隨后用革蘭氏染色法或Stamps 染色法染色[2]，根據(jù)布魯氏菌的形態(tài)特征，鑒定出布魯氏菌。隨后再用血清學(xué)方法檢查，包括特異性抗血清檢測和菌落凝集試驗等。因布病病原診斷需要P3實驗室條件，危險性較高，在實際布病普查中不易推廣。

5.2 血清學(xué)檢查

目前，用于布魯氏菌檢測的方法很多，如：虎紅平板凝集試驗（RBPT）、試管凝集試驗（SAT）、補體結(jié)合試驗（CFT）、乳環(huán)試驗（MRT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、熒光偏振分析法（FPA）、巢式PCR（nested-PCR）等，但至今沒有一種方法兼具檢測的敏感性、特異性和操作方法的簡便、快速、廉價等優(yōu)點。在實際的操作中，建議根據(jù)自身條件，兩種方法結(jié)合使用?？梢韵扔靡环N便捷的方法初篩，隨后再用另一種靈敏性和特異性都較高的方法進行確診。但，常規(guī)血清學(xué)檢查不易區(qū)分免疫牛和感染牛。

5.2.1 RBPT/SAT/CFT RBPT和SAT 均具有操作簡單、成本低廉的特點，而CFT操作相對復(fù)雜，參與成分也較多，結(jié)論也具有一定主觀性，但是準(zhǔn)確性較高。RBPT是OIE指定的國際貿(mào)易中布魯氏菌的初篩試驗，適用于大量樣本的篩查；CFT是OIE指定的國際貿(mào)易布魯氏菌診斷的確診試驗。RBPT和SAT單獨使用時都會產(chǎn)生一定的假陽性和假陰性，尤其是SAT，OIE 已于2000年宣布不主張將其用于國際貿(mào)易檢測。

5.2.2 ELISA ELISA 包括間接ELISA（I- ELISA）和競爭ELISA（C- ELISA），兩者均具有操作簡單、結(jié)果確切等優(yōu)點，但后者的診斷特異性比前者更高，因此更適用于布病的確診；前者更適于對布病的普查。國內(nèi)有實驗證明I-ELISA的敏感性和特異性為95.92%和98.65%[3]。國際上，ELISA已被OIE列為奶牛布病診斷的指定方法，在很多國家得到了廣泛應(yīng)用， 并取得了良好效果。

5.2.3 FPA FPA是常規(guī)血清學(xué)檢測方法的重要替代方法，原理是通過溶液中受檢粒子旋轉(zhuǎn)速率的變化來判定熒光標(biāo)記抗原分子是否與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，適用的抗原分子大小最好在20kD。實驗證明，F(xiàn)PA用于牛布病檢測的特異性為99.6%，敏感性為98.0%[4]，檢測結(jié)果是可靠的。國際上，F(xiàn)PA已被OIE列為奶牛布病診斷的指定方法，在很多國家得到了廣泛應(yīng)用，并取得了良好效果。

5.2.4 MRT MRT該方法具有操作簡單、省時省力的特點，易于布病田間泌乳奶牛布病的篩選試驗。但大量樣本檢測時，該方法的敏感性較低，檢測結(jié)果不夠可靠。疫苗免疫4個月以內(nèi)的牛和有異常乳的牛（患有乳房炎或其他疾?。?，檢測結(jié)果可出現(xiàn)假陽性。對奶牛初乳檢測，也產(chǎn)生假陽性。

5.2.5 Nested-PCR 通過對布魯氏菌保守基因片段2對引物的設(shè)計和實驗條件的控制，Nested-PCR檢測方法消除了病料污染或奶牛感染其他疾病而引起的檢測結(jié)果呈假陽性的情況[5]。該方法適用于布魯氏菌的實驗室分子檢側(cè)診斷。

6 防控措施

6.1 接種疫苗免疫

免疫前要徹底清群，將感染牛和布魯氏菌攜帶牛全部清除出牛群，免疫密度100%，并且要保持免疫的連續(xù)性，不能間斷。目前，國內(nèi)普遍使用的畜用布病疫苗都是傳統(tǒng)的光滑型菌株的減毒苗，如S19苗、Rev.1苗、S2苗等，其免疫保護效果已獲得臨床驗證，具有造價低廉、免疫保護時間長、免疫保護效率高等優(yōu)點。但是，這些減毒疫苗的殘留毒力會引起妊娠奶牛流產(chǎn)，因此，這些弱毒苗不能免疫妊娠母牛和產(chǎn)奶母牛。弱毒疫苗接種后產(chǎn)生的持續(xù)免疫應(yīng)答還會對以后的布病血清學(xué)普查產(chǎn)生干擾，但粗糙型菌株弱毒苗卻不干擾布魯氏菌臨床檢測。20世紀(jì)90年代美國研制的RB51活菌苗（粗糙型牛種布魯氏菌2308在含利福平的培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得）卻成功克服了這一缺點，已獲得美國政府批準(zhǔn)正式使用[6]，在應(yīng)用中可替代S19號苗。其他新型疫苗，如基因工程亞單位疫苗、DNA疫苗和活載體疫苗等都沒有達到常規(guī)疫苗等保護效果。人用弱毒苗有BA219和104M，均具有毒力返強的特點，只用于高危人群，一般不建議使用。

6.2 綜合防控

奶牛免疫接種具有一定的局限性，實際布病防控中應(yīng)采取包括疫苗接種在內(nèi)的“免疫、監(jiān)測、消毒、撲殺和無害化處理”等綜合防控措施 [7-10]。

6.2.1 檢疫檢測 奶牛養(yǎng)殖場區(qū)要做好布病的定期檢測，每年至少1次。各牛舍混裝奶每年要至少隨機抽檢3次。一經(jīng)發(fā)現(xiàn)感染者，應(yīng)立即捕殺，并按正確的方法做好焚燒、深埋和消毒處理，對可疑奶牛，應(yīng)立即離場隔離，并做好衛(wèi)生消毒。

6.2.2 自繁自養(yǎng) 奶牛養(yǎng)殖場區(qū)應(yīng)該做到“自繁自養(yǎng)”，盡量不從外地調(diào)牛或購牛。需要購牛時，應(yīng)選擇非疫區(qū)牛源，并且要求有當(dāng)?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督部門出具的動物檢疫合格證明。奶牛買進后要先隔離30天，隨后“兩檢一免”，即做2次布病檢疫（間隔30 d），隨后再疫苗免疫，15 d月以后方可入群。

6.2.3 犢牛培養(yǎng) 實施人工授精，選用精液要檢疫合格，所用器械要嚴(yán)格消毒。犢牛出生后用3%～5%來蘇兒溶液全身消毒，并立即隔離。犢牛喂初乳5～10天，隨后用健康牛乳飼喂（可巴氏消毒）。犢牛舍環(huán)境應(yīng)經(jīng)常消毒，并做好人員、工具器械進出場的消毒工作。犢牛20日齡、5月齡和9月齡時要各進行一次布病檢測，3次結(jié)果全是陰性者方可進入犢牛群。

6.2.4 環(huán)境消毒 嚴(yán)格執(zhí)行獸醫(yī)防疫制度，每季度進行一次全場消毒。場區(qū)、牛舍入口設(shè)消毒池（可內(nèi)置3～5%來蘇爾溶液或20%石灰乳等，10 d更換一次），牛舍、運動場每月消毒一次，飼養(yǎng)、擠奶等設(shè)備也要定期消毒。對布病流產(chǎn)奶牛的胎兒、流產(chǎn)物等要做焚燒或深埋等處理，還要做好場區(qū)鼠、蚊、蠅等的撲殺工作。

疫情檢出后，對病牛、可疑牛的牛床、食槽等每天要進行一次消毒，糞便等排泄物要單獨收集并做無害化處理。牛舍、飼養(yǎng)工具每天都要進行消毒，直至病牛、可疑牛無害化處理完畢。運動場地要徹底清污，并連續(xù)消毒3～5 d。牛場金屬設(shè)備用火燒、熏蒸等方式消毒；飼槽、牛欄、地面、糞尿溝、車輛、分娩室等用2%燒堿、5%來蘇兒或氯制劑等消毒；運動場徹底清掃，隨后用20%石灰乳消毒；牛舍的飼料、墊料采取深埋發(fā)酵或焚燒處理；糞便采取堆積后密封發(fā)酵或深埋處理。

6.2.5 飼養(yǎng)管理 對奶牛群要加強飼養(yǎng)管理，保證飼草飼料安全，適時調(diào)整飼料配方，以增強奶牛體質(zhì)，提高奶牛自身的抗病能力?？娠曃刮⑸镏苿?，以抑制奶牛體內(nèi)的病原微生物，有效提高奶牛機體的免疫力。

6.2.6 人員防護 布病是嚴(yán)重的人畜共患傳染病。場區(qū)的獸醫(yī)、飼養(yǎng)員、配種員和修蹄員等工作人員，必須嚴(yán)格遵守防護制度，尤其在產(chǎn)犢季節(jié)。與感染牛接觸的人員，應(yīng)穿好防護服裝，并做好消毒工作。以上人員每年都要進行1次布病檢查，對檢出的感染人員，要堅決調(diào)離原工作崗位，消除布病傳染源。

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