錢小華

【摘要】 目的 研究觀察MiR143和C-Myc在直腸腺癌中的表達(dá)意義，以供直腸腺癌病理診斷給予參考。方法 選擇2010年9月——2012年12月我院收治的直腸腺癌30例、直腸良性病變患者30例為臨床研究對(duì)象，對(duì)所有患者均取病理組織，檢測(cè)MiR143和C-Myc。觀察比較檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 直腸腺癌MiR143表達(dá)明顯低于直腸良性病變組，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。直腸腺瘤組C-Myc陽(yáng)性率表達(dá)高于直腸良性病變患者，組間比較，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 直腸腺癌患者有MiR143的低表達(dá)和C-Myc的高表達(dá)，有助于對(duì)直腸腺癌患者給予早期輔助診斷。

【關(guān)鍵詞】 MiR143；C-Myc；直腸腺癌；病理診斷

直腸癌是臨床常見(jiàn)的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤，隨著我國(guó)人們生活水平的逐年提高，患者飲食結(jié)構(gòu)的改變，導(dǎo)致直腸癌在我國(guó)發(fā)病率呈現(xiàn)了逐年上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重地威脅人類健康。而直腸癌患者早期多無(wú)明顯的臨床癥狀，因此臨床診斷多被延誤，一旦出現(xiàn)有臨床癥狀時(shí)多已經(jīng)到了癌癥的中晚期。我院本次實(shí)驗(yàn)研究分析MiR143和C-Myc在直腸腺癌中的表達(dá)意義，報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 擇2010年9月——2012年12月我院收治的直腸腺癌30例、直腸良性病變患者30例為臨床研究對(duì)象。直腸腺癌患者30例中排出有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，腫瘤管飯浸潤(rùn)?quán)徑鞴俚幕颊摺?/p>

直腸腺癌30例中，男16例，女14例，患者年齡在47-76歲之間，平均年齡為70.93±7.84歲。直腸良性病變患者30例中，男17例，女13例，患者年齡在48-77歲之間，平均年齡為70.41±7.04歲。兩組患者的一般資料差異不明顯，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 在石蠟標(biāo)本中提取總RNA，首先加入純二甲苯，混勻后溶解標(biāo)本的石蠟，在室溫下進(jìn)行高速離心，沉淀組織后棄去二甲苯，加入無(wú)水乙醇混勻，室溫下進(jìn)行高度離線，棄去乙醇后加入無(wú)水乙醇，重復(fù)操作2次以上[1]。隨后加入緩沖液和蛋白酶，混勻后孵育，加入無(wú)水乙醇混勻后棄去管內(nèi)液體，重復(fù)操作到所有液體都可以通過(guò)FilterCartridge。加入Wash Buffer等，進(jìn)行核酸蛋白檢測(cè)儀檢測(cè)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。

首先對(duì)石蠟切片進(jìn)行脫蠟，進(jìn)行抗原修復(fù)，加入血清封閉液，吸干組織周圍多余的血清，擦干PBS，使用DW清晰，在鏡下控制顯色的程度，使用蘇木素對(duì)細(xì)胞核復(fù)染，烤干并封片。其中細(xì)胞漿為深棕色或棕褐色為陽(yáng)性細(xì)胞[2]，每張切片陽(yáng)性細(xì)胞的陽(yáng)性程度包括：無(wú)色0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，根據(jù)著色的面積：無(wú)色為0分，著色在1/3以下為2分，1/3-2/3為2分，3分為2/3以上，將兩項(xiàng)之和作為判斷結(jié)果，其中3分以上為陽(yáng)性[3]。

1.3 數(shù)據(jù)處理 本次實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù)處理均采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05，以95%為可信區(qū)間，計(jì)算結(jié)果中P<0.05時(shí)，為樣本差異明顯且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

其中MiR143的檢測(cè)結(jié)果為計(jì)量資料，組間對(duì)比方法為t檢驗(yàn)；C-Myc陽(yáng)性率為計(jì)數(shù)資料，組間比較使用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

直腸癌標(biāo)本MiR143Ct值高于直腸良性病變標(biāo)本，說(shuō)明直腸腺癌MiR143表達(dá)明顯低于直腸良性病變組，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。直腸腺瘤組C-Myc陽(yáng)性率表達(dá)高于直腸良性病變患者，組間比較，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

3 討 論

直腸癌是臨床較為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，在1974年有學(xué)者提出直腸腺瘤—直腸腺癌的序貫學(xué)說(shuō)，認(rèn)為多數(shù)直腸癌起源于直腸腺瘤。直腸癌為多基因且多步驟的致癌過(guò)程，包括癌基因的激活及癌基因的抑制失活。

MiRNA為非小編碼的RNA分子，包括18-25個(gè)核苷酸組成，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)，在動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、分化、細(xì)胞增殖及凋亡等均有租用。MiR143是定位在人類染色體5q32的基因，成熟序列為5′—UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3′.我院本次實(shí)驗(yàn)使用實(shí)時(shí)定量檢測(cè)技術(shù)PCR對(duì)直腸腺癌、直腸良性病變組的患者組織檢測(cè)了MiR143，結(jié)果顯示，直腸腺癌組低于直腸良性病變組，組間比較，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明MiR143在直腸癌患者中有較為明確的表達(dá)，可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖，誘發(fā)癌變，對(duì)癌癥起到了明顯的促進(jìn)作用。且大量研究還發(fā)現(xiàn)，MiR143為一種抑癌基因，充分地發(fā)揮了抑癌基因的作用。

C-Myc為原癌基因，為多功能基因，可以在細(xì)胞周期發(fā)生變化，并參與到細(xì)胞生長(zhǎng)代謝，可以刺激血管的生成和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，對(duì)細(xì)胞凋亡和分化均有重要的作用[4]。C-Myc編碼出的蛋白可以結(jié)合靶基因的啟動(dòng)子，進(jìn)而刺激細(xì)胞的增生，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在直腸腺癌中C-Myc蛋白的高表達(dá)，說(shuō)明C-Myc在直腸腺癌中的激活明顯，對(duì)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生了一定的抑制作用，并會(huì)延長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的生存，增加其基因突變的機(jī)會(huì)[5]，進(jìn)而對(duì)直腸腺癌的發(fā)生和發(fā)展起到了重要的作用。在癌變的過(guò)程中，C-Myc的大量表達(dá)，也會(huì)促進(jìn)有癌變傾向的細(xì)胞發(fā)生明確的凋亡，且細(xì)胞增殖速度明顯高于細(xì)胞凋亡速度。

綜上所述，直腸癌MiRNA的發(fā)生和發(fā)展有非常重要的作用，且直腸腺癌患者有MiR143的低表達(dá)和C-Myc的高表達(dá)，有助于對(duì)直腸腺癌患者給予早期輔助診斷。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳少鍇.研究miR-1256和miR143基因?qū)θ四I透明細(xì)胞癌的調(diào)控作用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（21）：105-106

[2] 謝希暉，王榮，賈正平等.毛細(xì)管電泳法檢測(cè)癌基因C-myc胃癌中基因點(diǎn)突變[J].分析化學(xué)，2011，39（11）：1695-1700.

[3] 周炳娟，張金庫(kù)，趙文明等.基底細(xì)胞樣乳腺癌中CIP2A及c-myc蛋白表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012，28（9）：966-969.

[4] 劉香娟，李福年，姜丹丹等.非p53依賴通路c-myc基因?qū)14ARF基因的調(diào)控及細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92（30）：2140-2143.

[5] 趙云霞，龔曉萌，崔芳芹等.乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc的異常表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，32（12）：2531-2533.