李樹學(xué)

【摘 要】目的：研究DEK蛋白在胃癌中表達(dá)的影響。方法：121例胃癌和39例正常組織制作成組織芯片，利用免疫組織化學(xué)方法檢測DEK蛋白在胃癌及正常胃組織中表達(dá)的水平。結(jié)果：DEK蛋白在121例胃癌中86例呈陽性表達(dá)，早期胃癌及進(jìn)展期胃癌的陽性表達(dá)率與正常胃粘膜組織比較有顯著性差異（P<0.001），進(jìn)展期胃癌的陽性表達(dá)率與早期胃癌相比有顯著性差異（P<0.001）。不同組織類型中，DEK蛋白在未分化癌、鱗狀細(xì)胞癌和管狀腺癌衣粘液腺癌和印戒細(xì)胞癌相比均有顯著性差異（P<0.001）。結(jié)論：DEK蛋白的高表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，并與胃癌的組織學(xué)類型、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有密切相關(guān)，可作為胃癌早期診斷及預(yù)后判定的一個(gè)指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】胃癌 DEK蛋白：免疫組織化學(xué)：組織芯片

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料 胃癌組織芯片

人胃癌組織芯片購置于上海芯超生物科技有限公司，組織芯片編號為200點(diǎn)的0D-CT-Dgstm01-002（90例胃癌，8例正常組織，12例其他器官對照組織，共110例）和62點(diǎn)的OD-CT-Dgsm03-003（31例胃癌和31例癌旁組織）。

1.2主要試劑

1.2.1 PBS緩沖液（PH：7.2-7.4）：購于美國CAMBREX公司；

1.2.2 枸櫞酸緩沖液（PH：6.0）：購于北京中山生物技術(shù)有限公司；

12.3 單克隆抗體：DEK抗體為美國US bio生物公司產(chǎn)品；

1.2.4 ABC免疫組織化驗(yàn)試劑盒：購于北京華美生物工程公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法：

1.3.1免疫組織化學(xué)染色方法檢測DEK蛋白在胃癌中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色方法根據(jù)ABC試劑盒說明書步驟進(jìn)行。

1.3.2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

DEK蛋白以細(xì)胞核呈棕黃色顆粒為陽性。蛋白表達(dá)采用雙評分半定量法進(jìn)行評分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理分析，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果分析采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 DEK蛋白在胃癌中的表達(dá)見表1

2.2 DEK蛋白在胃癌不同組織學(xué)類型中的表達(dá)見表2

2.3 DEK蛋白的過表達(dá)與胃癌病理學(xué)行為的相關(guān)性見表3

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其死亡率局世界癌癥的第二位，在我國胃癌的死亡率局各種惡性腫瘤的首位。目前發(fā)現(xiàn)參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程的癌基因有C-met、ras、bcl-2、c-myc、survivin、Ki-67、CDK4和MMPs基因等。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要方式，在胃癌的早期即可出現(xiàn)。有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對胃癌的治療方案產(chǎn)生重要影響。因此，早期發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并及時(shí)進(jìn)行治療是改善胃癌預(yù)后、提高生存率的關(guān)鍵。

DEK蛋白廣泛存在于有機(jī)體的大多數(shù)細(xì)胞中，是一種豐富的細(xì)胞核蛋白，存在于大多數(shù)生物體中和一些單核細(xì)胞有集體中（小木軍除外）。研究發(fā)現(xiàn)DEK蛋白與自身免疫疾病的發(fā)生有密切相關(guān)，同時(shí)在許多惡性腫瘤比如膀胱癌、卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌和肝癌中，DEK蛋白均有過表達(dá)。人類DEK蛋白是在急性粒細(xì)胞白血?。ˋML）亞型中作為一種融合蛋白，這種AML亞型的特征是有特殊的染色體異位（6；9）（p23；q34）。它廣泛存在于有機(jī)體的大多數(shù)細(xì)胞中（酵母菌除外）。人類的DEK蛋白由375個(gè)氨基酸組成。DEK蛋白定位于細(xì)胞核，主要分布與細(xì)胞核的常染色質(zhì)，DEK的表達(dá)水平與細(xì)胞的生理狀態(tài)有密切相關(guān)，細(xì)胞增殖狀態(tài)時(shí)DEK表達(dá)水平升高。而靜止或終末分化狀態(tài)時(shí)細(xì)胞內(nèi)的DEK表達(dá)水平降低。

我們利用胃癌組織芯片，通過免疫組化方法研究DEK蛋白在胃癌中的表達(dá)及病理學(xué)行為相關(guān)性。結(jié)果表明，DEK蛋白在胃癌中的陽性表達(dá)率明顯高于正常胃黏膜組織，兩組間有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （p<0.001），在臨床病理學(xué)行為的相關(guān)性方面，DEK蛋白的高表達(dá)與腫瘤 組織學(xué)類型、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有密切相關(guān)。表明DEK蛋白在胃癌的早期診斷及預(yù)后判定的潛在指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Zhao J，Zhang X，Xin Y. Up-regulated expressionof Ezrin and c-Met protins are related to the metastasis and prognosis of gastric darcinomas[J]. Histopathol. 2011，26（9）：1111-20.

[2] Sureka C， Ramesh T. Molecular assessment of c-H-ras p21 expression in Helicobacter pylori-mediated gastric carcinogenesis[J]. Mol Cell Biochem. 2012，362（1-2）：169-76.

[3] Leal MF， Calcagno DQ ，Borges da Costa Jde F， et al. MYC，TP53， and chromosome 17 copy-number alterations in multiple gastric cancer cell lines and in their parental primary tumors[J]. J Biomed Biotchnol. 2011，2011：631268.

[4] Gryko M， Pryczynicz A， Guzinska-Ustymowicz K， et al. Immunohistochemical assessment of apoptosis-associated proteins： p53，Bcl-xL， Bax and Bak in gastric cancer cells in correlation with clinical and pathomorphological factors[J]. Adv Med Sci. 2012，22：1-7.

[5] Carrasco V， Canfran S， Rodriguez-Franco F， et al.Canine gastric catcinoma：immunohistochemical expression of cell cycle proteins （p53， p21， and p16）and heat shock proteins （Hsp27 and Hsp70）[J]. Vet Pathol. 2011，48（1）：322-9.

[6] Kim YH， Lee HS， Lee HJ， et al. Prognostic siginficance of the expression of Smad4 and Smad7 in human gastric carcinomas[J]. Ann Oncol. 2004， 15（4）：574-80.

[7] Xiong X， Ren HZ， Li MH， et al. Down-regulated miRNA-214 induces a cell cycle Gl arrest in gastric cancer cells by up-regularing the PTEN protein[J].Pathol Oncol Res.2011， 17（4）：931-7.

[8] Kim MA， Lee HE， Lee HS， et al. Expression of apoptosis-related proteins and its clinical implication in surgically resected gastric carcinoma[J]. Virchows Arch. 2011，459（5）：503-10.

[9] Datta A， Adilson ME， Mogilevkin Y， et al. Oncoprotein DEK as a tissue and urinary biomarker for bladder cancer[J]. BMC Cancer. 2011， 11：234.

[10] Han S， Xuan Y，Liu S， et al. Clinicopathological signifcance of DEK overexpression in serous ovarian tumore[J]. Pathol Int. 2009，59（7）；443 -7.

[11] Wu Q，Li Z，Lin H ，et al.DEK overexpssion in uterine cervical cacers[J].Pathol Int .2008，5（6）；378-82

[12] Liu S，Wang X， Sun F， et al. DEK overexpression is correlated with the clinical features of breast cancer[J]. Pathol Int. 2012， 62（3）；176-81.

[13] Yan X， Li F， Dozmorov I， et al.External Qi of Yan Xin Qigong induces cell death and gene expression alterations promoting apoptosis and inhibiting proliferation， migraton and glucose metabolism in small-cell lung cancer cells [J]. Mol Cell Biochem. 2012， 363（1-2）：245-55.

[14] 林黎娟，蔡英蘭，張曉燕，等。 肝細(xì)胞癌中閱耘運(yùn)蛋白的表達(dá)及其意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志， 2011，27（70：778-779.

[15] Kip M， Gohring F， Ostendorp T， et al.SAF-Box， a conserved protein domain that specifically recognizes scaffold attachment region DNA[J]. Mol Cell BIOL. 2000，20（20）：7480-9.

[16] Aravind L， Koonin EV. SAP-a putative DNA-binding motif involved in chromosomal organization[J]. Trends Biochem Sci. 2000，25（3）：112-4.

[17] Kappes F， Burger K，Baack M， et al.Subcellular localization of the human proto-oncogene protein DEK[J]. J Biol Chem. 2001，276（28）：26317-23.

[18] Hu HG，Schlten I， Gruss C， et al. The distribution of the DEK protein in mammalian chromatin[J]. Biochem Biochem Biophys Res Commun. 2007，358（4）：1008-14.