江鏡全　郭旭光　陳瓊　夏勇

【摘要】目的統(tǒng)計(jì)和分析2010年1月至2012年12月本院臨床分離的肺炎鏈球菌的耐藥性，為臨床合理應(yīng)用抗生素提供依據(jù)。方法對臨床分離的81株肺炎鏈球菌菌株，用VITEK-2細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果共收集到肺炎鏈球菌81份，主要為痰液。肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素的敏感率均為100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松、氯霉素、厄他培南替、敏感率均大于90%。結(jié)論肺炎鏈球菌主要引起呼吸道感染，阿莫西林/克拉維酸和莫西沙星可作為治療的首選藥物，臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)本院的藥敏結(jié)果經(jīng)驗(yàn)作為經(jīng)驗(yàn)用藥的指導(dǎo)。

【關(guān)鍵詞】肺炎鏈球菌；耐藥；肺炎；鏈球菌；感染

肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）是一種球狀的革蘭氏陽性菌，是鏈球菌屬下的一種細(xì)菌。作為一種重要的人類致病菌，肺炎鏈球菌于1880年已被發(fā)現(xiàn)能引起肺炎，亦是體液免疫研究的對象。肺炎鏈球菌最初名字是肺炎雙球菌，因它在革蘭氏染色中的特征[1]。1974年，研究發(fā)現(xiàn)它在液體媒介中呈鏈狀的生長，而被重新命名為肺炎鏈球菌。因它是肺炎的致病因子，一般都會稱它為肺炎球菌。肺炎鏈球菌亦會導(dǎo)致不同種類的疾病，包括有急性鼻竇炎、中耳炎、腦膜炎、骨髓炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、腹膜炎、心囊炎、蜂窩組織炎及腦膿腫。

近年來隨著青霉素耐藥肺炎鏈球菌及多重耐藥菌株的增加[2-4]，給臨床治療帶來一定的困難[5]。為更好的指導(dǎo)臨床用藥，為臨床經(jīng)驗(yàn)用藥提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，了解該菌在我院的分布及耐藥情況，對2010年1月——2012年12月臨床送檢標(biāo)本分離的肺炎鏈球菌藥敏結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。

1材料與方法

1.1菌株來源及培養(yǎng)方法81株肺炎鏈球菌均自本院2010年1月——2012年12月住院患者及門急診患者。包括痰液、血液、腦脊液等。標(biāo)本接種血平板和巧克力平板，放入5%CO2培養(yǎng)箱，35℃，24h培養(yǎng)。對于疑似肺炎鏈球菌的菌株，轉(zhuǎn)血平板，加奧普脫欣紙片篩選，敏感的菌株進(jìn)一步做鑒定和藥敏試驗(yàn)。

1.2儀器與試劑標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后，按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）要求處理，經(jīng)培養(yǎng)獲得單個(gè)菌落后，經(jīng)初篩后，疑似肺炎鏈球菌的菌落增菌后，用Vitek-2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀及其配套的鑒定卡和藥敏卡進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)，結(jié)果判定按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）推薦的方案和標(biāo)準(zhǔn)，以敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報(bào)告結(jié)果。抗菌藥物包括阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松氯霉素、厄他培南、頭孢呋辛鈉、亞胺培南、喹努普汀/達(dá)福普汀、頭孢噻肟、美羅培南、青霉素G、復(fù)方新諾明、紅霉素、四環(huán)素。

1.3統(tǒng)計(jì)軟件藥敏結(jié)果的導(dǎo)出采用東方旗云軟件，藥敏結(jié)果分析采用Excel2003軟件。

2結(jié)果

2.1肺炎鏈球菌臨床菌株的分布81株肺炎鏈球菌分別來自呼吸道、分泌物、膿液、血液等標(biāo)本，其中以痰液標(biāo)本檢出率最高，其次為分泌物，見表1。

2.2藥敏結(jié)果本次試驗(yàn)分離出的81株肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素的敏感率均為100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松、氯霉素、厄他培南替、敏感率均大于90%.頭孢呋辛鈉、亞胺培南、喹努普汀/達(dá)福普汀、頭孢噻肟的敏感率在80%-90%之間；美羅培南的敏感率為61.54%；青霉素的敏感率為55.56%；復(fù)方新諾明的敏感率為40.00%；紅霉素的敏感率為23.68%；四環(huán)素的敏感率為21.74%。具體藥敏檢測結(jié)果，見表2。

3討論

肺炎鏈球菌是一種普遍導(dǎo)致成人感染細(xì)菌性腦膜炎的病菌，亦是首兩種在中耳炎發(fā)現(xiàn)的分離株。由肺炎鏈球菌引致的肺炎是在年幼或年長的人中最經(jīng)常出現(xiàn)。肺炎鏈球菌與同是γ溶血性的草綠色鏈球菌是有所分別，因肺炎鏈球菌是對奧普托欣較敏感，所以能透過奧普托辛測試驗(yàn)出它們的分別。肺炎鏈球菌的粒狀體是有莢膜包裹及呈革蘭氏陽性，與草綠色鏈球菌在革蘭氏染色有型態(tài)上的不同（肺炎鏈球菌染色型態(tài)的是呈針刺狀）。它有著一個(gè)多糖莢膜，是一種重要的致病因子[6]。

本次試驗(yàn)分離出的81株肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素的敏感率均為100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松、氯霉素、厄他培南替敏感率均大于90%.頭孢呋辛鈉、亞胺培南、喹努普汀/達(dá)福普汀、頭孢噻肟的敏感率在80%-90%之間；美羅培南G的敏感率為61.54%；青霉素的敏感率為55.56%；復(fù)方新諾明的敏感率為40.00%；紅霉素的敏感率為23.68%；四環(huán)素的敏感率為21.74%。

根據(jù)藥敏結(jié)果，對于肺炎鏈球菌的感染首選阿莫西林/克拉維酸和莫西沙星，雖然利奈唑胺、替考拉寧、萬古霉素的敏感率也為100%，但是其價(jià)格昂貴，而且為以后其他細(xì)菌的感染以及多重耐藥菌的感染用藥留下余地。次選左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、頭孢曲松、厄他培南替等。

肺炎鏈球菌的常規(guī)檢測費(fèi)時(shí)費(fèi)力，目前快速檢測的方向之一就是分子診斷。肺炎鏈球菌的檢測技術(shù)很多，分為基于核酸水平的檢測技術(shù)、基因芯片技術(shù)以及其他檢測技術(shù)。而基因芯片這一類檢測技術(shù)尚處研究階段并不成熟[7]。因此，應(yīng)用最廣的為基于核酸水平的PCR定性檢測技術(shù)。當(dāng)前我國對細(xì)菌DNA的檢測，主要是通過提取DNA，再進(jìn)行PCR+凝膠電泳（初篩），對于陽性結(jié)果采用實(shí)時(shí)熒光PCR、Southern雜交或測序方法進(jìn)行確證，或?qū)μ崛〉腄NA直接采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測。這些常見檢測基因的分子生物學(xué)方法目前比較成熟，但不可避免具有消耗昂貴，方法耗時(shí)較長等缺點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的快速發(fā)展，以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)為基礎(chǔ)的新型鑒定技術(shù)已日益得到廣泛應(yīng)用。恒溫基因擴(kuò)增方法（LAMP，Loop-mediated Isothermal Amplification）是在PCR基礎(chǔ)上創(chuàng)建的一種較理想的手段，其特點(diǎn)是：①只需一恒定溫度就能擴(kuò)增反應(yīng)，不需要特殊試劑，不需要預(yù)先進(jìn)行雙鏈DNA的變性；②高特異性：采用六個(gè)區(qū)段，四條引物，擴(kuò)增特異性高，可以根據(jù)是否擴(kuò)增來判斷目標(biāo)基因的存在與否；③快速、高效擴(kuò)增：擴(kuò)增在不到1h即可完成，且產(chǎn)率高；④靈敏度高：擴(kuò)增模板可達(dá)10拷貝或更少；⑤鑒定簡便：在核酸大量合成時(shí)，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應(yīng)溶液中的Mg2+結(jié)合，產(chǎn)生副產(chǎn)物-焦磷酸鎂沉淀，可用肉眼觀察判斷擴(kuò)增與否；總體而言，LAMP法是一種簡便、快速、高特異的基因擴(kuò)增法[8-10]。

而實(shí)時(shí)熒光LAMP是在在LAMP基礎(chǔ)上引入ESEQuant Tube Scanner及熒光染料，實(shí)現(xiàn)LAMP法實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增的目的，不僅結(jié)果易于觀察和判斷，同時(shí)避免因開蓋導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)，實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確檢測的目的[11]。下一步，我們將繼續(xù)收集臨床菌株，建立檢測肺炎鏈球菌的Rea-LAMP檢測方法。

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