黃依玲

【摘要】 目的：建立高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法，色譜柱：Agi。lent ZORBAX SB C18（4。6ram×250mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（20：80），檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm；流速1.0ml/min；柱溫：30℃。結(jié)果：迷迭香酸在0.068～1.357μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999，n=6），平均加樣回收率為99.15%，RSD為1.4%（n=9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便快捷，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可用于夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 夏桑菊顆粒；迷迭香酸；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2013）18-0015-02

夏桑菊顆粒收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十五冊(cè)，由夏枯草、桑葉、菊花等3味藥材組成，具有清肝明目，疏風(fēng)散熱，除濕痹，解瘡毒的功效，臨床用于治療風(fēng)熱感冒，目赤頭痛，高血壓，頭暈耳鳴，咽喉腫痛，疔瘡腫毒等癥。方中夏枯草為君藥，具有清肝瀉火，明目，散結(jié)消腫的功效。該制劑標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目，為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)選用處方中君藥夏枯草中主要成分迷迭香酸作為指標(biāo)性成分，參照《中國(guó)藥典》2010年版一部夏枯草項(xiàng)下迷迭香酸的測(cè)定方法，建立高效液相色譜法測(cè)定本品中迷迭香酸的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agilent 1200高效液相色譜儀；KQ-300型超聲波清洗器；迷迭香酸對(duì)照品（批號(hào)：111871-201102，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，）；不同廠家不同批號(hào)的夏桑菊顆粒均購(gòu)自南寧市各零售藥店；乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（20：80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm；流速：1.0mL/rnin；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μ1，在此條件下，迷迭香酸峰與鄰峰基線分離。取除夏枯草外的其他幾味藥材同法制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法同法制成陰性樣品溶液，陰性樣品溶液無(wú)干擾（見(jiàn)圖1）。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的迷迭香酸對(duì)照品10.18mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.2036mg/ml對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml置15ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，避光保存。

2.3 供試品溶液的制備取夏桑菊顆粒適量，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇15ml，稱定重量，超聲處理30min（功率300w，頻率40kHz），放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5、1、2、4、6、8、10ml，分別置15ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。分取上述不同濃度對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積的積分?jǐn)?shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程：Y=2139X-37.8，r=O.9998（n=6），說(shuō)明迷迭香酸進(jìn)樣量在0。068～1.357p，g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定迷迭香酸的峰面積，其RSD為1.08%（n=6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)20120210的供試品溶液，按供試品測(cè)定方法分別在0、2、4、6、8、10、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果8次進(jìn)樣迷迭香酸峰面積的RSD=1.27%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取廣州G藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20120210的夏桑菊顆粒，精密稱取6份，制備供試品溶液，并依法測(cè)定迷迭香酸峰面積，計(jì)算其平均含量為0.53 mg/g，RSD為0.87%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批供試品（批號(hào)：20120210）9份，每份精密稱取1g，分別精密加入一定量的迷迭香酸對(duì)照品，照“2.3”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。迷迭香酸平均回收率為99.15%，RSD=1.4%，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

3.1 夏桑菊顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目，對(duì)夏桑菊顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，分別有測(cè)定熊果酸、綠原酸、蒙花苷的含量，但對(duì)迷迭香酸的含量測(cè)定未見(jiàn)有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定迷迭香酸的含量，結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確可靠，可為夏桑菊顆粒進(jìn)一步制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

3.2 迷迭香酸對(duì)照品溶液在自然光下穩(wěn)定性較差，易產(chǎn)生分解，因此操作中應(yīng)注意閉光，選擇采用棕色量瓶。

3.3 按照《中國(guó)藥典》2010年版一部的方法進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相甲醇0.1%三氟乙酸溶液（42：58）并不適合夏桑菊顆粒。另考察了多個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)，如甲醇-0.2%甲酸（40：60）、甲醇-0.1%磷酸（40：60）、乙腈-0.1%磷酸（20：80）等，最后選擇乙腈-0.1%磷酸（20：80）作為流動(dòng)相，出峰時(shí)間適當(dāng)。同時(shí)還考察不同色譜柱，如phenomenex Gemini C18（4.6mm×250 mm，5μm）、AgilentZORBAX SB C18（4.6mm×250mm，5μm）、Diamonsil C18（4.6mm×250 mm，5μm）等，最后選擇Agilent ZORBAXSB C18（4.6mm×250mm，5μm）作為色譜柱，結(jié)果迷迭香酸色譜峰的對(duì)稱性和分離度均較好。

3.4 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用稀乙醇、甲醇、50%甲醇溶液和70%甲醇溶液同法處理樣品，結(jié)果表明50%甲醇溶液提取迷迭香酸的含量最高。同時(shí)考察超聲處理及回流提取法，結(jié)果表明，兩種提取方法迷迭香酸的含量差異性不大，考慮到實(shí)驗(yàn)上操作方便，故采用超聲法處理樣品。

3.5 實(shí)驗(yàn)測(cè)定了不同廠家不同批號(hào)的夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的夏桑菊顆粒，迷迭香酸的含量相差較大，建議通過(guò)測(cè)定迷迭香酸的含量來(lái)控制夏桑菊顆粒的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第15冊(cè)[S].1997：164.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：263。

[3]黃淑彰.HPLC法測(cè)定夏桑菊顆粒中熊果酸的含量[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2004，18（3）：33—35.

[4]熊國(guó)營(yíng)，徐君，梁兆昌，等。高效液相色譜法測(cè)定夏桑菊顆粒中綠原酸的古量[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，16（6）：48。

[5]黃曉文，謝艷婷，馮嘉欣，等.HPLC測(cè)定夏桑菊顆粒中蒙花苷的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（3）：233—235.

[6]王祝舉，趙玉英，王玢，等.夏枯草中迷迭香酸含量分析方法研究[J].藥物分析雜志，2006，26（3）：399—400.

[7]秦雯，張?zhí)m珍，巴寅穎，等.高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地夏枯草中咖啡酸和迷迭香酸的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（3）：43—45.

[8]林麗美，許招懂，閆積彪，等.夏枯草中活性成分迷迭香酸的提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定與富集[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（8）：35—37.

（收稿日期：2013.06.28）