龐 炎 (廣東省遂溪縣人民醫(yī)院檢驗科，廣西 遂溪 524300)

銅綠假單胞菌是老年性慢性呼吸道感染中較為常見的一種致病菌，可分為黏液型銅綠假單菌和一般型銅綠假單胞菌兩種類型。黏液型銅綠假單胞菌由于大量產(chǎn)生藻酸鹽而在菌體外形成生物被膜，該被膜能使菌體逃逸機(jī)體免疫清除和增強對抗菌藥物的耐藥，給治療帶來困難，被鑒定為黏液型銅綠假單胞菌應(yīng)及時報告，現(xiàn)將具體情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源:來自2011年1月～2013年1月住我院患者送檢5 000例痰標(biāo)本。白細(xì)胞≥25個每低倍鏡視野，上皮細(xì)胞≤10個低倍鏡視野為合格痰標(biāo)本。

1.2 藥敏抗生素和菌株鑒定試劑:均為廣東省惠州市陽光生物科技有限公司提供的300020微生物檢測/藥敏檢測卡。

1.3 菌株分離與鑒定:標(biāo)本培養(yǎng)分離嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版進(jìn)行。36℃培養(yǎng)24 h，在血平板上生長為無色透明水滴樣，邊緣不整齊，不溶血細(xì)小菌落，48 h長大而融合，黏稠，凍膠樣菌落，溶血不典型，用接種針不易挑起，往往緊貼在平板上，無金屬光澤，無生姜氣味的菌落，分純后經(jīng)廣東省惠州市陽光生物科技有限公司SS－1000B型細(xì)菌測定/藥敏分析儀鑒定，均為銅綠假單胞菌，判斷為黏液型銅綠假單胞菌。

1.4 藥敏試驗:藥敏試驗采用藥敏卡肉湯稀釋方法，結(jié)果按2009年版 CLSI標(biāo)準(zhǔn)來判斷。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。

2 結(jié)果

35株黏液型銅綠假單胞菌對13種抗生素的耐藥率:詳見表1。

表1 35株黏液型銅綠假單胞菌對13種抗生素的耐藥率

3 討論

銅綠假單胞菌在人體內(nèi)繁殖時所產(chǎn)生的多種毒性因子在致病機(jī)制中起著不同作用，引起病情的嚴(yán)重的程度與細(xì)菌的毒力和患者免疫狀態(tài)有關(guān)外，還與細(xì)菌分泌黏液樣莢膜物質(zhì)(細(xì)胞外黏液)平行。本研究用于分離黏液型銅綠假單胞菌的痰標(biāo)本大多屬于長期慢性下呼吸道感染的老年性患者，考慮與呼吸道感染患者的免疫力低下、病情嚴(yán)重程度和大量使用抗生素三個因素有關(guān)。抗生素在臨床上的大力開展，使得細(xì)菌能在短時間內(nèi)出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，導(dǎo)致抗菌治療失敗。黏液型銅綠假單胞菌檢出率近些年來有越來越高的趨勢，耐藥率每年也呈現(xiàn)出逐年增高的趨勢［1］。

筆者探討?zhàn)ひ盒豌~綠假單胞型菌對13種抗生素的耐藥性，但是僅在體外進(jìn)行藥敏試驗，檢測的僅僅是呈浮游態(tài)的細(xì)菌對抗生素的敏感性，無法真實反映出生物被膜對抗生素的耐藥狀況。表1結(jié)果表明，黏液型銅綠假單胞菌的體外敏感的抗生素較多，耐藥性相對來說較弱，哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、頭孢吡肟對黏液型銅綠假單胞菌的敏感性較高，為經(jīng)驗治療中首選的抗生素。治療該菌造成的感染時還需要將生物被膜耐藥因素考慮進(jìn)去。黏液型銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制復(fù)雜多變，黏液型銅綠假單胞菌分泌的細(xì)胞外黏液樣物質(zhì)，多聚糖分解，相鄰細(xì)菌、纖維蛋白和血小板等聚集，最終形成細(xì)菌生物被膜。細(xì)菌生物被膜一方面使得細(xì)菌與抗菌藥物直接接觸的機(jī)會得以大大減少，從而對抗生素產(chǎn)生嚴(yán)重耐藥現(xiàn)象，被膜另一方面免疫細(xì)胞和抗體與細(xì)菌接觸發(fā)生嚴(yán)重阻礙，從而使得細(xì)菌不容易被清除，藻酸鹽是黏液型銅綠假單胞菌形成生物被膜的主要成分。體外研究發(fā)現(xiàn)，藻酸鹽在黏液型銅綠假單胞菌生物被膜的形成中發(fā)揮著重要的作用，所以除去生物被膜必須設(shè)法減少藻酸鹽的合成。有報道認(rèn)為，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能起到有效抵抗生物被膜的作用［2］。

黏液型銅綠假單胞菌體外耐藥性比較弱，可是由于能產(chǎn)生大量藻酸鹽，而在菌體外形成生物膜，體內(nèi)用藥時耐藥率較高，因此臨床微生物室培養(yǎng)鑒定出銅綠假單胞時，特別注意黏液型，以便醫(yī)生選擇合理的抗生素進(jìn)行治療［3］。

［1］ 李玉棟，王成軍，趙建平.銅綠假單胞菌5種菌落形態(tài)與耐藥性監(jiān)測［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2006，38(1):69.

［2］ Li F，Yu J，Yang H.Effects of ambroxol on alginate ofmature Pseudomonas aeruginosa biofilms［J］.Curr MicrobioL，2008，57(1):1.

［3］ 張文元，楊亞冬，唐 靚.十四元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類對細(xì)菌生物被膜形成影響及對環(huán)丙沙星的增效作用［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005，15(11):1288.