楊 薔，舒 鵬

（南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210029）

中藥逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞多藥耐藥機(jī)制研究

楊 薔，舒 鵬*

（南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210029）

胃癌多藥耐藥（MDR）是臨床化療失敗的重要原因，其機(jī)制主要為激活相關(guān)信號通路誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低或引起凋亡。中藥有效成分單體如貝母毒乙、蟾蜍靈、粉防乙堿、芍藥苷等及復(fù)方如參芪健胃湯、圣和散、二藤散對胃癌多藥耐藥細(xì)胞有逆轉(zhuǎn)作用。

中藥；胃癌；多藥耐藥；逆轉(zhuǎn)機(jī)制；貝母毒乙；參芪健胃湯

胃癌多藥耐藥（MDR）現(xiàn)象的存在表明，一旦腫瘤細(xì)胞對某一藥物抗藥時，對其他一些結(jié)構(gòu)不同、作用機(jī)制也不同的藥物也產(chǎn)生交叉耐藥。西藥逆轉(zhuǎn)劑雖然在體外實(shí)驗(yàn)中有明確效果，因不良反應(yīng)較大不適用于臨床。中藥因其毒副作用小、效果好已成為近年來研究的熱點(diǎn)。

1 胃癌多藥耐藥的機(jī)制

1.1 膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白異常

1.1.1 ABC（ATP－binding cassette）跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族 主要包括P－糖蛋白（ABCB1）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP/ABCC）和乳腺癌相關(guān)蛋白（BCRP/ABCG2）［1］。研究表明，胃癌患者中P－gp、MRP、BCRP均有不同程度的高表達(dá)，證明為原發(fā)耐藥相關(guān)基因。臨床觀察［2］發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中PGP等蛋白的表達(dá)明顯高于正常組織，且與臨床分期有關(guān)，分期越晚，PGP的表達(dá)越高。

1.1.2 肺耐藥相關(guān)蛋白（LRP） LRP是細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)運(yùn)輸通道，可阻止并排除作用于細(xì)胞核的藥物，并將細(xì)胞質(zhì)中的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到囊泡，再經(jīng)胞吐機(jī)制排出胞外。

1.2 酶表達(dá)異常

1.2.1 谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶（GST－π） GST－π是GST超基因家族中的一員，是同工酶中表達(dá)最高的一種，可催化親電物質(zhì)（如抗癌藥物）與谷胱甘肽（GST）結(jié)合，促進(jìn)藥物排出細(xì)胞；本身還能增加藥物的水溶性，促進(jìn)細(xì)胞代謝。

1.2.2 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（ToPoⅡ） TopoⅡ活性降低，表達(dá)下降或基因突變，減少抗癌藥物的作用靶點(diǎn)而產(chǎn)生耐藥性。其特點(diǎn)是藥物在細(xì)胞內(nèi)積聚與保留沒有變化，其耐藥性不能經(jīng)膜活性藥物逆轉(zhuǎn)，因此又稱為不典型耐藥。

1.3 細(xì)胞凋亡

1.3.1 P53 P53是腫瘤中最易發(fā)生突變的抑癌基因，當(dāng)其發(fā)生缺失、突變等導(dǎo)致表達(dá)異常時，對凋亡過程調(diào)控異常，可抑制化療藥物誘導(dǎo)的凋亡，導(dǎo)致耐藥，同時也可特異性激活MRP－1/P－gp，產(chǎn)生MDR。

1.3.2 Bcl－2家族 Bcl－2基因家族成員分為2類：Bcl－2類，是凋亡抑制因子，包括Bcl－2、Bcl－xl和Bcl－w等；Bax類，為凋亡促進(jìn)因子，包括Bax、Bak、Box等。Bcl－2與Bax基因表達(dá)的強(qiáng)弱決定了細(xì)胞接受凋亡信號后細(xì)胞存活與否。

2 MDR相關(guān)的信號通路

2.1 NF－κB通路 研究［3］表明，NF－κB在正常胃黏膜、不典型增生及胃癌組織中的表達(dá)呈遞增趨勢。將突變型IκBα真核表達(dá)重組體（pCMV4－m IκBα）經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至SGC7901/VCR細(xì)胞中，可顯著抑制NF－κB的表達(dá)達(dá)64％，抑制MDR1的表達(dá)達(dá)75％［4］，提示NF－κB通路與MDR1的表達(dá)相關(guān)。采用RNA干擾技術(shù)下調(diào)SGC7901中NF－κB p65基因的表達(dá)，表明其對腫瘤細(xì)胞的增殖活性有下調(diào)作用［5］。

2.2 PI3K/Akt通路 與乳腺癌、卵巢癌、小細(xì)胞肺癌等多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)。免疫組化法檢測p－Akt的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Akt在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義［6］。PI3K抑制劑LY294002處理胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR和SGC7901后能明顯增加對VCR的敏感性，說明提高耐藥和非耐藥細(xì)胞對化療藥物的敏感性的過程與抑制PI3K/AKT通路密切相關(guān)［7］。

2.3 Nrf2通路 轉(zhuǎn)錄因子NF－E2相關(guān)因子2（Nrf2），其作為轉(zhuǎn)錄因子廣泛存在于全身多器官，參與機(jī)體的抗氧化、解毒、抗凋亡等功能。MTS檢測法發(fā)現(xiàn)的Nrf2低表達(dá)H460細(xì)胞株較對照組細(xì)胞對奧沙利鉑的敏感性明顯增強(qiáng)［8］。

2.4 JNK通路 免疫組化法研究168例胃癌和27例正常胃組織中JNK的表達(dá)與P－gp、MRP1、LRP的表達(dá)正相關(guān)（P＜0.01）［9］。SP600125抑制p－JNK表達(dá)后，敏感株SCG7901和耐藥株SGC7901/DDP的藥物敏感性和細(xì)胞凋亡率增加，同時耐藥蛋白P－gp表達(dá)水平明顯減低，提示p－JNK和P－gp的表達(dá)呈正相關(guān)［10］。

2.5 Wnt/β－連環(huán)蛋白［11］肺癌A549/DDP細(xì)胞系與A549相比，Akt磷酸化水平升高，抑制了下游GSK－3的活性，從而上調(diào)β－catenin通路的激活而導(dǎo)致耐藥［12］。

3 胃癌多藥耐藥的中藥逆轉(zhuǎn)劑

3.1 中藥有效成分

3.1.1 貝母素乙 張裴等［13］發(fā)現(xiàn)貝母素乙可抑制SGC7901和SGC7901/VCR的細(xì)胞增殖，提高細(xì)胞敏感性和胞內(nèi)ADR濃度，與5－Fu聯(lián)用后能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與caspase－3通路、產(chǎn)生caspase－3剪切體cleaved caspase－3有關(guān)［14］。

3.1.2 蟾蜍靈 蟾蜍靈（bufalin）為中藥蟾酥中的有效成分，實(shí)驗(yàn)［15］證實(shí)bufalin以時間和劑量依賴方式抑制SGC7901/CDDP的增殖，且通過下調(diào)Bcl－2、上調(diào)Bax的表達(dá)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

3.1.3 粉防己堿 粉防己堿又名漢防己甲素，是粉防己的塊根中提取的生物堿。粉防己堿在明顯無毒劑量（1.0μg/mL）有明顯逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細(xì)胞多藥耐藥的作用，其作用機(jī)制與其抑制P－gp、Survivin的表達(dá)有關(guān)，且無明顯細(xì)胞毒作用，是安全有效的逆轉(zhuǎn)劑［16］。粉防己堿亦對卵巢癌、人口腔上皮癌、白血病耐藥細(xì)胞株有逆轉(zhuǎn)作用。

3.1.4 芍藥苷 體外實(shí)驗(yàn)［17］證實(shí)，芍藥苷呈劑量依賴性的抑制SGC7901/VCR的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并部分逆轉(zhuǎn)多藥耐藥，其機(jī)制可能通過抑制NF－κB的活化，進(jìn)而下調(diào)Bcl－xl、Bcl－2和P－gp的表達(dá)。吳昊［18］證實(shí)芍藥苷可通過抑制NF－κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增強(qiáng)5－Fu誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制和凋亡效應(yīng)。

3.1.5 齊墩果酸（OA） OA對SCG7901/CDDP有抑制作用，并激活凋亡相關(guān)蛋白酶caspase－3［19］、上調(diào)促凋亡基因Bax和下調(diào)抗凋亡基因Bcl－2的表達(dá)［20］，說明OA抑制耐藥細(xì)胞增殖的方式為誘導(dǎo)凋亡。

3.1.6 β－欖香烯 張曄等［21］通過對PARP和P－gp蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究，認(rèn)為β－欖香烯逆轉(zhuǎn)SGC7901/Adr的機(jī)制可能與增加胞內(nèi)藥物蓄積，誘導(dǎo)PARP裂解及降低P－gp的表達(dá)有關(guān)。β－欖香烯在體內(nèi)、外均具有抑制SCA3－7901和SGC－7901/5－FU細(xì)胞生長的作用，該作用可能與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)［22］。

3.1.7 雷公藤甲素 實(shí)驗(yàn)［23］證明，無毒濃度的雷公藤甲素通過降低microRNA－21的表達(dá)，抑制Bcl－2表達(dá)，從而提高胃癌SCG7901/CDDP和白血病K562/A02化療敏感性。

3.2 中藥提取物 康萊特注射液是從薏苡仁中提取天然有效抗癌活性物質(zhì)薏苡仁油制備的脂肪乳劑。王惠芝等［24］通過對160例病理證實(shí)的胃癌術(shù)后患者的臨床觀察發(fā)現(xiàn)，康萊特注射液可降低P－gp的表達(dá)而逆轉(zhuǎn)耐藥。

3.3 中藥復(fù)方

3.3.1 參芪健胃湯 通過對60例Ⅱ～Ⅲ期胃癌術(shù)后患者的臨床觀察，舒鵬等［25］發(fā)現(xiàn)參芪健胃湯具有降低MRP的表達(dá)、抑制MDR1表達(dá)的作用，從多個途徑起到逆轉(zhuǎn)耐藥的效果。

3.3.2 斑貞1號 付桂珍等［26］對SCG7901/ADR的實(shí)驗(yàn)表明，斑貞1號（斑蝥0.06g，露蜂房12g，女貞子、山茱萸各15g）聯(lián)合5－Fu加川芎嗪（TMP）對MRP基因表達(dá)的抑制作用較單獨(dú)使用時明顯。

3.3.3 圣和散 Wang Jian－h(huán)ua等［27］發(fā)現(xiàn)，圣和散有提高SGC7901/VCR胞內(nèi)藥物濃度，其機(jī)制與下調(diào)P糖蛋白和Bcl－2的表達(dá)有關(guān)。

3.3.4 二藤散結(jié)方 實(shí)驗(yàn)［28］證實(shí)，無毒濃度的二藤散結(jié)方通過抑制P－gp的表達(dá)從而增加胞內(nèi)藥物濃度，對SGC7901/VCR有逆轉(zhuǎn)作用。

4 存在的問題

多藥耐藥為西醫(yī)概念，目前僅運(yùn)用西醫(yī)藥理的方法尋找中藥逆轉(zhuǎn)劑，且以西藥逆轉(zhuǎn)劑的類似物為主，傳統(tǒng)中醫(yī)對多藥耐藥及其逆轉(zhuǎn)的機(jī)理及作用機(jī)制缺少理論支持。中藥逆轉(zhuǎn)MDR的機(jī)制尚未完全明確，很多靶點(diǎn)、信號通路途徑僅處于假想及推測階段，沒有針對ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白途徑進(jìn)行系統(tǒng)的相關(guān)基因及信號通路的研究。而中藥復(fù)方針對腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)的研究更為少見。

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R273

B

1007－4813（2013）02－0266－03

2012－11－16）

楊 薔（1988－），女，碩士研究生。研究方向：中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)。

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舒 鵬，E－mail：shupen8sp＠163．com