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口服HSP60對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清TGF-β和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞含量的影響1)

2013-03-29 11:23:56郝春艷段虎斌劉學(xué)軍白春愛鄭小俊滕萍萍羅非同王鳳芝李茹香
關(guān)鍵詞:免疫耐受調(diào)節(jié)性抗原

郝春艷,段虎斌,劉學(xué)軍,習(xí) 玲,高 嶺,白春愛,鄭小俊,滕萍萍,羅非同,王鳳芝,李茹香

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種發(fā)生在血管內(nèi)膜表面由于結(jié)構(gòu)異常以及代謝紊亂而導(dǎo)致的疾?。?]。AS的動(dòng)脈管壁增厚變硬、失去彈性和管腔縮小,可以造成血管狹窄或阻塞導(dǎo)致組織器官缺血缺氧或壞死,是嚴(yán)重危害健康的“殺手”[2]。熱休克蛋白60(HSP60)在AS發(fā)病中發(fā)揮重要作用,可作為自身抗原引發(fā)血管壁的免疫反應(yīng),啟動(dòng)AS的形成并促進(jìn)AS進(jìn)一步發(fā)展[3]。本研究將HSP60作為耐受原,研究口服HSP60誘導(dǎo)免疫耐受和抗AS的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 儀器 流式細(xì)胞儀(FACS Calibur型,美國(guó)Becton-Dickinson公司),酶標(biāo)儀(Novapath TM型,美國(guó)BIO-RAD公司),圖像分析系統(tǒng)(MIAS-2000型,中國(guó)四川川大智勝軟件股份有限公司),HSP60抗原(中國(guó)北京博奧生生物技術(shù)公司),維生素D3粉劑(飼料級(jí),浙江花園生物高科股份有限公司),注射維生素D3針劑(中國(guó)江蘇吳中實(shí)業(yè)股份有限公司蘇州第六制藥廠),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)ELISA kit(美國(guó) Santa Cruz公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 4周齡健康雄性SD大鼠40只,體重100 g±10 g,由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為4組:健康對(duì)照組(C組),動(dòng)脈粥樣硬化未干預(yù)組(AS組),造模前口服HSP60組(H1組),造模后口服HSP60組(H2組),以上4組每組10只。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 造模及標(biāo)本采集 H1組先于造AS模型前30 d開始用HSP60灌胃,每日一次,其余3組喂飼普通飼料和500μL PBS液灌胃;于出生后60 d,C組繼續(xù)喂飼普通飼料,AS組、H1組、H2組開始喂飼高脂飼料和維生素D3粉劑90 d,建立AS大鼠模型,于出生后150 d各組停止高脂飲食,H2組開始用HSP60灌胃,C組、AS組和H1組仍以500μL PBS液灌胃,4個(gè)組均灌胃30 d。采用ELISA法檢測(cè)各組血清中TGF-β含量;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)血清CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞含量。

1.3.2 制作標(biāo)本 石蠟切片后HE染色及采用圖像分析系統(tǒng)照相分析,觀察各組大鼠主動(dòng)脈病理改變,計(jì)算血管內(nèi)膜(IT)與血管內(nèi)徑(ID)之比(IT/ID)。

1.3.3 ELISA檢測(cè)血清TGF-β含量 應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中TGF-β水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入TGF-β抗原、生物素化的抗大鼠TGF-β抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

1.3.4 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè) 流式細(xì)胞儀用前向角(Fsc)測(cè)向角(Ssc)設(shè)二維點(diǎn)圖,用Gate1將淋巴細(xì)胞圈住,檢測(cè)Gate1內(nèi)細(xì)胞10 000個(gè)。獲取熒光信號(hào)并分析數(shù)據(jù)的軟件均使用CELLQUEST軟件,用對(duì)數(shù)方式分別以FL1-FL3,F(xiàn)L2-FL3作二維點(diǎn)圖,檢測(cè)CD4、CD25、Foxp3陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 13.0軟件。數(shù)據(jù)變量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示;同一組不同時(shí)間均數(shù)比較采用重復(fù)資料方差分析;多組間均數(shù)比較采用LSD檢驗(yàn)(方差齊)和Dunnett’sT檢驗(yàn)(方差不齊),相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。檢驗(yàn)水平為雙側(cè)α=0.05,以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

高脂飲食可形成AS斑塊,AS組主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚,平滑肌細(xì)胞增生,排列紊亂,部分血管內(nèi)膜突起,淋巴細(xì)胞、炎性細(xì)胞、泡沫細(xì)胞浸潤(rùn),肌纖維斷裂,斑塊形成斑塊處可形成夾層動(dòng)脈瘤,甚至斑塊有破裂出血。實(shí)驗(yàn)組IT/ID、血清TGF-β和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞含量較對(duì)照組均高(P<0.05);H1組和H2組較A組IT/ID值為低(P<0.05);H2組較 H1組為高(P<0.05)。外周血中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與細(xì)胞因子TGF-β含量相關(guān)性分析示:二者成正相關(guān)(r=0.854 6,t=10.145 1,P<0.05);直線回歸方程:Y=-11.432 1+52.541 7X(F=102.922 2,P<0.05)。

表1 大鼠主動(dòng)脈IT/ID、血清TGF-β和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞含量(±s)

表1 大鼠主動(dòng)脈IT/ID、血清TGF-β和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞含量(±s)

組別 IT/ID%TGF-β pg/m L CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例(%)C組6.1±1.3 88.7±20.1 2.55±0.36 A組 38.3±6.51) 53.6±15.41) 1.66±0.361)H1組 15.8±7.41)2) 291.9±71.71)2) 5.58±0.221)2)H2組 26.9±3.31)2)3)161.3±49.61)2)3) 3.28±0.611)2)3)與C組比較,1)P<0.05;與A組比較,2)P<0.05;與 H1組比較,3)P<0.05

3 討 論

AS形成發(fā)展中,有大量與免疫相關(guān)的細(xì)胞參與并形成了一系列免疫反應(yīng)機(jī)制,主要包括:免疫系統(tǒng)的單核、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等,特別是T淋巴細(xì)胞,它們?cè)诟鞣N免疫分子的協(xié)調(diào)下相互作用,相互影響,共同參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展,故現(xiàn)在許多學(xué)者開始把AS視為一種慢性炎癥反應(yīng)或自身免疫性疾病[4]。動(dòng)脈內(nèi)膜的損傷與抗原的識(shí)別是AS發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié),在動(dòng)脈粥樣損害的早期階段即有活化的免疫細(xì)胞在斑塊局部浸潤(rùn)和熱休克蛋白(HSP)的表達(dá)[5]。HSP60是一種主要由受刺激以及死亡的內(nèi)皮細(xì)胞分泌和釋放的蛋白,在動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞受外界因素如應(yīng)激、高血壓、感染等刺激時(shí),可引起HSP60的表達(dá),被樹突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞所識(shí)別,從而觸發(fā)自身免疫反應(yīng)。HSP60與AS密切相關(guān),Xu等[6]調(diào)查發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣損害的高危人群的血清中含有高滴定的HSP60抗體。急性冠脈綜合征病人的體內(nèi)存在HSP60特異性T細(xì)胞,證明HSP60是重要的斑塊相關(guān)抗原[7]??诜褪埽∣T)是指口服抗原后,引起機(jī)體對(duì)該抗原產(chǎn)生特異性無(wú)或低免疫性應(yīng)答,但對(duì)其他抗原仍可產(chǎn)生正常免疫性反應(yīng)[8]。CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子在口服誘導(dǎo)免疫耐受中起重要作用[9]。TGF-β表達(dá)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4與抗原提呈細(xì)胞和黏膜內(nèi)分泌細(xì)胞表達(dá)的CD80/CD86結(jié)合,還表達(dá)高水平的免疫抑制相關(guān)分子糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子(TNF)樣受體(GITR),發(fā)揮免疫抑制、誘導(dǎo)免疫耐受作用[10]。

本實(shí)驗(yàn)顯示,口服HSP60能夠產(chǎn)生免疫耐受,表現(xiàn)為口服HSP60組CD4+CD25+Foxp3+ 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在外周血中含量增加,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌的具有抑制免疫、誘導(dǎo)免疫耐受的TGF-β等細(xì)胞因子在外周血中含量也增加,相反,動(dòng)脈粥樣硬化組上述指標(biāo)在降低,上述各指標(biāo)之間成正相關(guān)。預(yù)防組較治療組誘導(dǎo)免疫耐受效果好,提示越早口服HSP60誘導(dǎo)免疫耐受效果越好。本研究對(duì)理解口服HSP60誘導(dǎo)免疫耐受抗AS機(jī)制有一定幫助,對(duì)開闊臨床上治療AS新思路也有一定益處。

[1] Chen MA,Kawakubo M,Colletti PM,et al.Effect of age on aortic atherosclerosis[J].J Geriatr Cardiol,2013,10(2):135-140.

[2] Hamamdzic D,Wilensky RL.Porcine models of accelerated coronary atherosclerosis:Role of diabetes mellitus and hypercholesterolemia[J].J Diabetes Res,2013,2013:761415.

[3] Grundtman C,Kreutmayer SB,Almanzar G,et al.Heat shock protein 60 and immune inflammatory responses in atherosclerosis[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2011,31(5):960-968.

[4] Peter Libby,Paul M Ridker,G?ran K,et al.Inflammation in Atherosclerosis:From Pathophysiology to Practice[J].J Am Coll Cardiol,2009,54(23):2129–2138.

[5] Grundtman C,Kreutmayer SB,Almanzar G.Heat shock protein 60 and immune inflammatory responses in atherosclerosis[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2011,31(5):960-968.

[6] Xu Q,Metzler B,Jahangiri M,et al.Molecular chaperones and heat shock proteins in atherosclerosis[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2012 ,302(3):H506-514.

[7] Curry AJ,Portig I,Goodall JC,et al.T lymphocyte lines isolated from atheromatous plaque contain cells capable of responding to Chlamydia antigens[J].Clin Exp Immunol,2000 ,121(2):261-269.

[8] Stanley S.Oral tolerance of food[J].Curr Allergy Asthma Rep,2002,2(1):73-77

[9] Matta B,Jha P,Bora PS,et al.Tolerance to melanin-associated antigen in autoimmune uveitis is mediated by CD4+CD25+T-regulatory cells[J].Am J Pathol,2008,173(5):1440-1454.

[10] Park JJ,Omiya R,Matsumura Y,et al.B7-H1/CD80 interaction is required for the induction and maintenance of peripheral T-cell tolerance[J].Blood,2010,116(8):1291-1298.

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