吳芝園 劉競(jìng)天 陸海峰 朱 纓 魏 楠

玉米與連錢草套種對(duì)連錢草品質(zhì)的影響

吳芝園 劉競(jìng)天 陸海峰 朱 纓 魏 楠

（江蘇省蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院檢驗(yàn)藥學(xué)系，蘇州215009）

目的 通過(guò)檢測(cè)單作、套種兩種培育模式連錢草藥材中總黃酮成分含量，來(lái)分析連錢草套種玉米的可行性。方法 分光光度法。結(jié)果 單作、與玉米套種兩種培育方式收獲的連錢草中的總黃酮含量，無(wú)顯著差別，而無(wú)論是單作還是與套種玉米七月采收連錢草的總黃酮含量，明顯高于十一月收獲的連錢草，說(shuō)明單作與套種玉米方式對(duì)連錢草藥材品質(zhì)有效成分的影響不明顯、而采收時(shí)間對(duì)連錢草的總黃酮含量影響較大。結(jié)論 連錢草套種玉米的方式增加土地利用率，且不會(huì)明顯降低連錢草的有效成分，可以提高種植的經(jīng)濟(jì)回報(bào)率。

連錢草；分光光度法；總黃酮；套種

連錢草，為唇形科植物活血丹Glechoma longituba（Nakai）Kupr.干燥地上部分入藥，為《中國(guó)藥典》2010版一部收載品種。功效利濕通淋，清熱解毒，散瘀消腫，臨床主要用于熱淋，石淋濕熱黃疸，瘡癰腫痛，跌打損傷。活血丹莖葉含有的化學(xué)成分主要有萜類、黃酮類、揮發(fā)油類以及有機(jī)酸類和甾體類?，F(xiàn)代藥理研究其作用具有多樣性，主要有利尿作用、利膽作用、溶解結(jié)石作用，降血糖作用。抑菌實(shí)驗(yàn)表明，連錢草對(duì)金黃色葡萄球菌極度敏感，對(duì)痢疾桿菌、綠膿桿菌、傷寒桿菌中度敏感。

活血丹除西北部分地區(qū)外，我國(guó)大部分地區(qū)有分布，尤以江蘇產(chǎn)量大，質(zhì)量?jī)?yōu)，為江蘇道地藥材，故稱“江蘇金錢草”。其雖在全國(guó)大部分地區(qū)都有分布，然其儲(chǔ)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠資源開發(fā)的需要，且由于采集量大，野生資源已不斷減少。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)單作、與玉米套種兩種培育方式采收的連錢草中總黃酮的含量的對(duì)比，來(lái)評(píng)價(jià)兩種種植方式對(duì)連錢草品質(zhì)的影響。

1 實(shí)驗(yàn)的前期供試連錢草的培育及準(zhǔn)備工作

本實(shí)驗(yàn)選中盱眙縣王店鄉(xiāng)的栽培連錢草作為引種樣本，移植到本院藥用植物院中，經(jīng)過(guò)初步改進(jìn)種植條件，成活。

對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行規(guī)劃，在植物園中丈量選擇相聚30米，兩塊樣田，經(jīng)過(guò)測(cè)量其面積為500cm×300cm，其中一塊樣田，依照株間距約80cm，行間距120cm，種植連錢草，4月末移種玉米，當(dāng)年收獲玉米，當(dāng)年7、11月采收連錢草。另外一塊樣田，自始至終單作連錢草，也是當(dāng)年7、11月采收連錢草，將兩塊樣田的連錢草，分別曬干，準(zhǔn)備鑒定其中的總黃酮成分。

2 供試連錢草中總黃酮的含量的對(duì)比

2.1 材料

2.1.1 儀器 UV-2450PC紫外可見分光光度計(jì)（日本島津）；CQ250超聲波清洗儀（上海超聲波儀器廠）。

2.1.2 試藥 蘆丁對(duì)照品（南京春秋生物有限公司，批號(hào)：RU20121202A）；亞硝酸鈉（分析純，中國(guó)天津巴斯夫化工有限公司，批號(hào)2008年6月03號(hào)）；三氯化鋁（分析純，天津大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)2008年5月06日）；氫氧化鈉（分析純，無(wú)錫市展望化工試劑有限公司，批號(hào)08012105）

2.2 方法

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0.0118g，置于100ml容量瓶中，用60ml 60%乙醇超聲溶解（容量瓶密塞），放冷，用60%乙醇定容，得到0.11mg·ml-1蘆丁對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密稱取經(jīng)干燥的連錢草（單作和套種）粉末約0.5g，置100ml具塞容器中，精密加60ml 60%乙醇，密塞，稱重，超聲提取30min。放冷，密塞，再稱重，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 精密稱取蘆丁對(duì)照品5mg，置于25ml容量瓶中，加60%乙醇約15ml，超聲使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（0. 2mg·ml-1）。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液8ml，置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min，加三氯化鋁試液1ml，搖勻，放置6min，再加5%的氫氧化鈉10ml，加水至刻度，搖勻，于波長(zhǎng)200～800nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在508nm處有一最大吸收峰。精密稱取2g連錢草粗粉，置于具塞錐形瓶中，加50ml 60%乙醇，超聲50min，過(guò)濾，取續(xù)濾液，不顯色，直接于波長(zhǎng)200～800nm范圍內(nèi)掃描；再取續(xù)濾液1ml，照對(duì)照品蘆丁一樣顯色后，于波長(zhǎng)200～800nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在501nm處有一最大吸收峰。見圖1。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密量取蘆丁對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0ml，置于10ml容量瓶中，分別加入60%乙醇使成7ml，精密加入5%亞硝酸鈉0.3ml，搖勻，放置6min；精密加入10%三氯化鋁0.3ml，搖勻，放置6min；加入1mol／L的氫氧化鈉2ml，用60%乙醇

定容，搖勻，以不加蘆丁對(duì)照品溶液其他同法操作得到的溶液作為空白對(duì)照，在502nm處測(cè)定吸光度。求得回歸方程為：C（mg／ml）＝0.076235A＋0.001682（r＝0.9996，n＝6）；蘆丁對(duì)照品在0.01～0.07mg／ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖1 蘆丁和連錢草的吸收?qǐng)D譜

3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取蘆丁對(duì)照品溶液適量，配成高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度3份，分別顯色后測(cè)定吸收度。結(jié)果表明，測(cè)定方法的精密度良好，見表1。

表1 連錢草中總黃酮含量測(cè)定的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（%）

3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液3.0ml，進(jìn)行顯色，每隔5min測(cè)定一次吸收度，共測(cè)定至40min，計(jì)算總黃酮的平均含量為0.0289mg·ml-1，RSD＝0.95%（n＝9），結(jié)果表明顯色后的溶液在40min內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取受試的單作連錢草粉末5份，每份約0.5g，精密稱定，按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密量取供試品溶液0.5ml，顯色后測(cè)定吸收度，測(cè)得總黃酮的平均含量為57.76mg·g-1，RSD＝0.68%（n＝5），結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

3.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取3份已知總黃酮含量的連錢草粉末（單作）約0.1g，加入蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密量取供試品溶液1ml，按“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的含量，結(jié)果見表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該測(cè)定方法準(zhǔn)確性高。

表2 連錢草中總黃酮含量測(cè)定加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n，%）

3.7 單種和套種連錢草中總黃酮含量測(cè)定 各取單作、套種玉米的連錢草約0.5g，按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密吸取供試品溶液0.5ml，按“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定不同產(chǎn)地連錢草中總黃酮的含量，結(jié)果見表3。

表3 單種和套種連錢草中總黃酮含量測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果（n，%）

從表3可知，相同采收季節(jié)的連錢草，單作、與玉米套種兩種培育方式收獲的連錢草中的總黃酮含量，無(wú)顯著差別，而無(wú)論是單作還是與套種玉米7月采收連錢草的總黃酮含量，明顯高于11月收獲的連錢草，說(shuō)明單作與套種玉米方式對(duì)連錢草藥材品質(zhì)有效成分的影響不明顯、而采收時(shí)間對(duì)連錢草的總黃酮含量影響較大。連錢草套種玉米的方式增加土地利用率，且不會(huì)明顯降低連錢草的有效成分，可以提高種植的經(jīng)濟(jì)回報(bào)率。我們可以充分開發(fā)利用套種的方式增加土地利用率，提高經(jīng)濟(jì)效益。

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10.3969／j.issn.1672-2779.2013.21.106

1672-2779（2013）-21-0146-02

吳義紅

2013-08-15）